張 林 張 偉 解嵐嵐 張鋒利 史 英 吳潔瓊

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712000；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽712000）

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一種病因尚未明確的發(fā)生在結(jié)腸、直腸的慢性非特異性疾病，目前大多學(xué)者認(rèn)為UC的炎癥反應(yīng)與氧自由基密切關(guān)系，UC炎癥反應(yīng)的重要因素很有可能是氧自由基。筆者所在醫(yī)院院內(nèi)中藥方青柏潰結(jié)湯（原潰結(jié)Ⅰ號方）通過灌腸方式作用于UC患者取得了不錯的療效。本實(shí)驗(yàn)擬在造模成功的基礎(chǔ)上，通過治療UC大鼠檢測各組結(jié)腸組織超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量，觀察青柏潰結(jié)湯治療UC大鼠的治療效果，并探討其可能的機(jī)制，為進(jìn)一步推廣應(yīng)用青柏潰結(jié)湯提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康雄性SD大鼠55只，體質(zhì)量（200±20） g，生產(chǎn)許可證號：SCXK（陜） 2012-003。購于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 青柏潰結(jié)湯（藥物組成：黃柏9 g，苦參 20 g，大青葉 12 g，板蘭根 20 g，烏賊骨 25 g，炒薏苡仁30 g。所得水煎液每毫升含1 g生藥，由陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科熬制完成），康復(fù)新液（湖南科倫制藥有限公司，批號：M160918），柳氮磺吡啶（上海信誼天平藥業(yè)有限公司）。

1.3 試劑與儀器 水合氯醛（上海山浦化工有限公司產(chǎn)品），溶于0.9%氯化鈉注射液配成10%的混合液；冰乙酸（天津市天力化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品），溶于0.9%氯化鈉注射液配成8%的混合液；MDA試劑盒（北京邦定生物公司產(chǎn)品）；SOD試劑盒（南京聚力生物醫(yī)學(xué)工程研究所產(chǎn)品）。UV-1601分光光度儀（日本島津公司產(chǎn)品）。

1.4 模型制備 大鼠禁食不禁水24 h后用10%水合氯醛根據(jù)3 mL/kg腹腔注射麻醉，8%乙酸1 mL注入距肛門7 cm的結(jié)腸腔，灌注30 s，隨后用0.9%氯化鈉注射液5mL沖洗1次，之后常規(guī)飼養(yǎng)。

1.5 分組與給藥 將健康雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為5組，即空白組（等體積0.9%氯化鈉注射液）、模型組（等體積0.9%氯化鈉注射液）、青柏潰結(jié)湯組（1 mg/L）、柳氮磺吡啶組（0.5 g/kg）、康復(fù)新液組（5 mL/kg），除空白組以外，其余各組按上述方法制備UC模型，造模后第3日每組（除外空白組）隨機(jī)取2只做病理學(xué)檢查以確定造模成功，而后開始灌腸給藥，每日1次，連續(xù)7 d。

1.6 標(biāo)本采集與檢測 1）病理學(xué)檢查。取出距肛門2 cm以上8 cm處的結(jié)腸段，縱向剪開腸腔，預(yù)冷0.9%氯化鈉注射液反復(fù)沖洗直至干凈，取約0.5 cm病變嚴(yán)重處固定于4%甲醛中，行HE染色，顯微鏡下觀察結(jié)腸組織；另取濕重約200mg結(jié)腸組織，制成10%的組織勻漿，4000 r/min離心10min，取上清液待檢。2）結(jié)腸組織SOD與MDA檢測。取上述已制備的上清液分別按照SOD與MDA試劑盒說明書檢測。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，采用單因素方差分析。P＜0.05時(shí)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組一般情況 見圖1。空白組大鼠食欲、精神可，大便成形，無便血及大便帶血，毛發(fā)光澤，活動自如。模型組大鼠喜蜷縮，食欲、精神欠佳，可見肉眼血便，肛周不潔，毛發(fā)粗糙。各治療組介于兩組之間，以青柏潰結(jié)湯組情況最好，康復(fù)新液組最差，柳氮磺吡啶組居中。

圖1 兩組一般情況

2.2 病理觀察結(jié)果 見圖2。空白組腸黏膜完整，腺體排列齊整，無明顯炎性細(xì)胞浸潤；模型組腸黏膜不完整，腺體缺如或者排列不齊，潰瘍形成，局部水腫及充血甚至壞死、脫落，炎性細(xì)胞浸潤明顯；各治療組介于上述兩組之間，以青柏潰結(jié)湯組效果最好，康復(fù)新液組不明顯，柳氮磺吡啶組居中，可見愈合跡象，以青柏潰結(jié)湯組愈合最好，康復(fù)新液組不明顯，柳氮磺吡啶組居中。

圖2 各組大鼠治療后結(jié)腸病理學(xué)結(jié)果（HE染色）

2.3 各組大鼠結(jié)腸組織中SOD、MDA含量比較 見表1。與空白組比較，模型組SOD含量下降（P＜0.01），MDA含量上升（P＜0.01）；與柳氮磺吡啶組比較，青柏潰結(jié)湯組MDA含量含量下降（P＜0.01）；與康復(fù)新液組比較，SOD 含量上升（P＜0.05），MDA 含量下降（P＜0.05）。

表1 各組大鼠治療后結(jié)腸黏膜SOD、MDA含量比較（±s）

表1 各組大鼠治療后結(jié)腸黏膜SOD、MDA含量比較（±s）

與空白組比較，▽P＜0.05，▽▽P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與柳氮磺吡啶組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與康復(fù)新液組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組 別 n SOD（U/g） MDA（nmol/g）空白組 11 98.13±30.50 6.27±4.59模型組 9 66.38±13.94▽▽△△ 42.24±5.15▽▽青柏潰結(jié)湯組 9 96.09±22.25**## 10.88±1.10**△△##柳氮磺吡啶組 9 96.73±27.41*# 26.73±4.79**康復(fù)新液組 9 70.41±18.30▽△△ 40.79±6.92△△##

3 討 論

用乙酸法誘導(dǎo)大鼠UC，是研究UC致炎機(jī)理的常用模型之一，其機(jī)制與激活炎癥介質(zhì)（激肽等）、增強(qiáng)血管通透性有關(guān)，近年來關(guān)于UC發(fā)病機(jī)理，氧自由基已成為重要課題，氧自由基（OFR）主要包括羥自由基（OH-）和超氧陰離子自由基（O2-）等，是一類含有不配對電子的含氧基團(tuán)，具有促進(jìn)水腫和炎性滲出等作用，但是其對作用的靶細(xì)胞不具有選擇特異性，因此氧自由基也能導(dǎo)致細(xì)胞和組織的損傷。為了防止其損傷細(xì)胞和組織，體內(nèi)存在著一整套完善的可清除氧自由基的防御系統(tǒng)，如超氧化物歧化酶（SOD）等。

Simmonds等發(fā)現(xiàn)UC（活動期）腸黏膜中有大量OFR［1]。由于OFR在臨床上直接測定十分困難，目前多采用檢測呼氣乙烷的濃度及MDA來間接反映UC腸黏膜OFR的水平。研究顯示，機(jī)體清除氧自由基能力的下降同時(shí)也是導(dǎo)致潰瘍形成和自身組織損傷的重要因素，氧自由基水平升高，會加強(qiáng)激活炎癥介質(zhì)，從而促進(jìn)炎癥反應(yīng)［2]。

SOD是廣泛存在于生物體內(nèi)且重要的抗氧化酶，能有效清除氧自由基，能抑制結(jié)腸組織中的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，SOD含量的高低可間接反應(yīng)機(jī)體清除氧自由基的能力，張麗華等發(fā)現(xiàn)模型組大鼠SOD活性明顯低于空白對照組［3]，目前SOD已被證明是治療UC的有效藥物之一［4]。MDA可由脂質(zhì)過氧化物分解產(chǎn)生等，可進(jìn)一步加重機(jī)體組織損害［5]。測定組織MDA的含量，可反映組織生物膜脂質(zhì)過氧化的程度和氧自由基的生成量［6]。MDA是氧自由基是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物［7]，MDA水平、氧自由基水平與機(jī)體組織損傷正相關(guān)。有研究表明在排除其他器官病變的情況下［8]，健康對照組血清MDA水平明顯低于UC患者。

臨床上治療UC一般予以西藥對癥治療，病情容易反復(fù)，且不良反應(yīng)多［9]，中藥在其治療上既避免了西藥的不足，又有較好療效，近年來，自擬方治療UC顯現(xiàn)出不錯的療效，何繼剛等用自擬中藥方灌腸治療本病，有效率91.67%［10]；秦書香等用青熱澀腸、活血生肌中藥灌腸治療本病可降低復(fù)發(fā)率［11]；李琪等采用灌腸方灌腸治愈率為95.83%［12]。UC是一種主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、黏液膿血便伴或者不伴有里急后重的一種慢性非特異性疾?。?3]，中醫(yī)認(rèn)為濕熱蘊(yùn)腸、氣滯絡(luò)瘀是基本病機(jī)［14]。本院自擬青柏潰結(jié)湯（原名潰結(jié)Ⅰ號方）灌腸治療UC患者臨床效果確切，組方中的大青葉、板藍(lán)根清除疫毒之邪；黃柏、苦參清除內(nèi)蘊(yùn)臟腑濕熱；炒薏苡仁清除腸道腐敗膿血；烏賊骨制酸止痛止血［15]。

通過本研究結(jié)果可看出，UC大鼠與空白組比較，結(jié)腸黏膜中的SOD含量下降、MDA含量上升，SOD含量降低說明機(jī)體清除氧自由基的能力下降，MDA含量升高說明自由基產(chǎn)生增加或有氧代謝增強(qiáng)，表明在UC發(fā)病時(shí)氧化代謝存在著失衡。各治療組經(jīng)過對應(yīng)藥物治療后，SOD含量上升，MDA含量降低，說明已恢復(fù)清除能力，同時(shí)說明UC局部炎癥反應(yīng)和異常的氧自由基代謝密切相關(guān)，提示青柏潰結(jié)湯治療UC很有可能是通過調(diào)節(jié)氧自由基水平來實(shí)現(xiàn)的。

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