盛英霞 熊雅婷

為了解山東地區(qū)市售家禽產(chǎn)品中獸藥殘留現(xiàn)狀，為山東省食品安全保障提供有效信息，本次調(diào)查選取了山東省泰安市、青島市、聊城市、臨沂市、濰坊市5個城市的大型超市和農(nóng)貿(mào)市場為采樣點，利用酶聯(lián)免疫試劑盒對采集的324份雞肉、鴨肉樣本中的四環(huán)素類、氯霉素、金剛烷胺、喹諾酮類等獸藥殘留進(jìn)行篩查，并根據(jù)《動物性食品中獸藥最高殘留限量》對檢測結(jié)果進(jìn)行判定。結(jié)果顯示，檢測的324份樣本的獸藥殘留檢出率為5.56%，其中超標(biāo)率為2.47%，4類藥物均有檢出，氯霉素藥物殘留現(xiàn)象最明顯，超標(biāo)率為1.85%；鴨胸肉檢出率最高（7.41%），雞腿肉超標(biāo)率最高（4.00%）；臨沂市檢出率最高，達(dá)到9.84%，濰坊市超標(biāo)率最高，達(dá)到5.56%。經(jīng)統(tǒng)計，農(nóng)貿(mào)市場的檢出率和超標(biāo)率顯著高于大型超市。通過對試劑盒靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度以及檢出樣本確證結(jié)果驗證發(fā)現(xiàn)，試劑盒檢測結(jié)果準(zhǔn)確，與國標(biāo)方法檢測結(jié)果一致。通過本次調(diào)查可以看出，山東省家禽產(chǎn)品獸藥殘留現(xiàn)象依舊存在，需要加強(qiáng)對家禽產(chǎn)品獸殘的監(jiān)測與管理，酶聯(lián)免疫試劑盒具有較高的準(zhǔn)確度，操作方法比儀器方法便捷，推薦作為初篩手段用于大批量家禽產(chǎn)品獸藥殘留現(xiàn)場快速檢測。

前言

山東省是家禽飼養(yǎng)大省，肉雞、肉鴨、蛋類總產(chǎn)量約占全國的15%，家禽產(chǎn)品出口量占全國的60%以上。國家統(tǒng)計局相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，2016年山東全省家禽存欄量達(dá)到6.57億只，禽蛋產(chǎn)量達(dá)440.6萬噸，分別比2015年增長了6.8%和3.9%。在2016年5月發(fā)布的《山東省家禽業(yè)轉(zhuǎn)型升級實施方案》中提到，計劃到2020年山東省禽肉產(chǎn)量達(dá)到285萬噸。

隨著家禽養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，在養(yǎng)殖過程中任意加大用藥劑量和療程，不遵守休藥期違規(guī)用藥現(xiàn)象已屢見不鮮。2012年爆發(fā)的“速成雞”、“藥雞門”事件以及2013年爆發(fā)的禽流感等，都給山東的家禽養(yǎng)殖業(yè)造成了不小的打擊，在山東省食藥監(jiān)局近期公布的食品抽檢信息中，有5批次雞肉被檢出禁用藥物或藥物殘留超標(biāo)，其中檢出強(qiáng)力霉素超標(biāo)達(dá)10倍之多。家禽產(chǎn)品中殘留的藥物，經(jīng)食物鏈的作用會在人體內(nèi)富集，從而對人類健康造成嚴(yán)重危害。家禽產(chǎn)品質(zhì)量安全不僅事關(guān)人民健康，對山東省家禽養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展以及家禽產(chǎn)品的國際競爭力均有影響。因此，深入了解山東省家禽產(chǎn)品中獸藥殘留現(xiàn)狀，對提升該省家禽產(chǎn)品獸藥殘留的監(jiān)控力度具有現(xiàn)實的指導(dǎo)意義。加強(qiáng)家禽養(yǎng)殖戶規(guī)范獸藥使用和獸藥殘留控制，提高家禽產(chǎn)品品質(zhì)，對保證居民吃上“放心禽肉”、“放心蛋”極為重要。

本研究面向山東省5大城市，以雞肉、鴨肉等家禽產(chǎn)品為研究對象，針對四環(huán)素類、氯霉素、金剛烷胺、喹諾酮類等獸藥，分析不同種類藥物殘留情況、不同動物及組織的殘留量等數(shù)據(jù)。該研究有助于山東省食品安全管理部門了解獸藥殘留種類、評估動物源性食品的質(zhì)量安全水平，提高消費(fèi)者的食品安全意識。

1材料與方法

1.1 材料與試劑

乙腈（色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），乙酸乙酯（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司），正己烷（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司），水（符合GB/T 6682-2008規(guī)定的二級水），四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)品（美國Sigma公司），氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品（美國Sigma公司），金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品（美國Sigma公司），喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)品（美國Sigma公司）。

四環(huán)素類酶聯(lián)免疫試劑盒、氯霉素酶聯(lián)免疫試劑盒、金剛烷胺酶聯(lián)免疫試劑盒及喹諾酮類酶聯(lián)免疫試劑盒由北京維德維康生物技術(shù)有限公司提供。

1.2儀器

BILON-WX08型高速電動勻漿機(jī)（上海比朗儀器制造有限公司）；電子天平ER-182A（日本A&D;公司）；HQ-60型恒溫振蕩儀（北京方正生物科技發(fā)展有限公司）；TDL-40C型高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；GM-2100型氮氣吹干儀（日本 EYELA公司）；Thremo-F2型微量移液器（美國Thermo）；TSQ Quantum Ultra液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Thermo）。

1.3樣本收集

2017年1～3月，選擇山東省泰安市、青島市、聊城市、臨沂市、濰坊市5個主要城市作為采樣區(qū)域，每個城市內(nèi)隨機(jī)選擇2個人口較為集中的居民區(qū)，從每個居民區(qū)周邊隨機(jī)選擇采購頻率較高的超市和農(nóng)貿(mào)市場各1個作為采樣點。根據(jù)山東省當(dāng)?shù)鼐用袢粘ｏ嬍沉?xí)慣，分別采購雞肉類（雞胸、雞腿）、鴨肉類（鴨胸、鴨腿）兩類4種家禽產(chǎn)品。20個采樣點共采集樣本324份，其中，雞胸85份、雞腿75份、鴨胸81份、鴨腿83份；泰安市采樣70份、青島市采樣75份、聊城市采樣64份、臨沂市采樣61份、濰坊市采樣54份。

1.4方法

1.4.1 酶聯(lián)免疫快速檢測試劑盒檢測：利用酶聯(lián)免疫試劑盒對收集的324份家禽產(chǎn)品樣本中的四環(huán)素類、氯霉素、金剛烷胺、喹諾酮類的殘留含量進(jìn)行初篩，分別按照四環(huán)素類酶聯(lián)免疫試劑盒、氯霉素酶聯(lián)免疫試劑盒、金剛烷胺酶聯(lián)免疫試劑盒及喹諾酮類酶聯(lián)免疫試劑盒說明書規(guī)范檢測。

經(jīng)酶聯(lián)免疫快速檢測試劑盒初篩后，高于最大殘留限量（MRL）的樣本利用國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法規(guī)定的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）進(jìn)行確證。

1.4.2 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測：對酶聯(lián)免疫分析方法檢出陽性的樣本，參考國家標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T 22338-2008《動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定》、GB/T 21317-2007《動物源性食品中四環(huán)素類獸藥殘留量檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法與高效液相色譜法》、GB/T 21312-2007《動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》、DB32/T 1163-2007《雞肝中金剛烷胺殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》進(jìn)行檢測確證。

1.4.3 評判依據(jù)：統(tǒng)計檢測結(jié)果后，將結(jié)果與農(nóng)業(yè)部235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》規(guī)定的最大殘留限量進(jìn)行比較，判斷樣本獸藥殘留是否超標(biāo)。其中，國家禁止在動物性食品中使用的藥物，一旦被檢出，即判為超標(biāo)；對于國家在動物性食品中限量使用的藥物，當(dāng)檢測結(jié)果高于其MRL時，判為超標(biāo)。

樣本的檢出率和超標(biāo)率計算公式分別為（1）、（2）。

檢出率： p1=含有某種（類）獸藥的動物性食品檢出個數(shù)/檢測動物性食品總數(shù)×100% ··············（1）。

超標(biāo)率：p2=含有某種（類）獸藥的動物性食品超標(biāo)個數(shù)/檢測動物性食品總數(shù)×100% ··············（2）。

1.4.4 統(tǒng)計分析：采用SPSS 19.0系統(tǒng)軟件對樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計和顯著性分析，p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果與分析

2.1家禽產(chǎn)品獸藥殘留檢出情況分析

在收集的324份家禽產(chǎn)品樣本中，有18份樣本檢出獸藥殘留，檢出率為5.56%，其中有8份樣本檢測結(jié)果超標(biāo)，超標(biāo)率為2.47%。這說明家禽產(chǎn)品獸藥殘留現(xiàn)象依舊存在，需要繼續(xù)加強(qiáng)對家禽產(chǎn)品質(zhì)量安全的監(jiān)管與檢測。

2.2 獸藥殘留種類分析

據(jù)統(tǒng)計，四環(huán)素類、氯霉素、金剛烷胺、喹諾酮類4種藥物均有殘留檢出，其中氯霉素檢出率最高，達(dá)到1.85%，這可能與氯霉素在環(huán)境中易殘留，且方法靈敏度高有關(guān)。四環(huán)素類和喹諾酮類藥物雖有殘留檢出，但是并未超過MRL，表明在動物飼養(yǎng)過程中飼喂了四環(huán)素類和喹諾酮類藥物，可能屠宰時并未嚴(yán)格遵循休藥期規(guī)定，導(dǎo)致藥物代謝不完全，存在藥物殘留。

2.3不同組織樣本中各藥物的檢出情況

分別對雞胸肉、雞腿肉、鴨胸肉、鴨腿肉的藥物殘留情況進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鴨胸肉中的四環(huán)素類藥物檢出率最高，達(dá)到3.70%；雞腿肉中氯霉素超標(biāo)率最高，達(dá)到2.67%；雞胸肉、雞腿肉、鴨胸肉、鴨腿肉4種樣本藥物殘留基本一致，說明這4種藥物在雞胸肉、雞腿肉、鴨胸肉、鴨腿肉中的殘留代謝情況相似。

2.4 不同采樣地區(qū)藥物檢出情況分析

結(jié)果顯示，山東省泰安市、青島市、聊城市、臨沂市、濰坊市5個采樣區(qū)域均有獸殘檢出、超標(biāo)現(xiàn)象，其中臨沂市獸殘檢出率最高，達(dá)到9.84%；濰坊市樣本超標(biāo)率最高，達(dá)到5.56%。

2.5 樣本來源藥物檢測情況分析

結(jié)果顯示，超市出售的雞肉、鴨肉獸藥檢出率明顯低于農(nóng)貿(mào)市場的檢出率，獸殘超標(biāo)樣本均來自于農(nóng)貿(mào)市場。由此可見，超市出售的動物性食品獸藥殘留情況要優(yōu)于農(nóng)貿(mào)市場出售的動物性食品，因此，本研究建議購買動物性食品應(yīng)盡可能到正規(guī)超市。

2.6 酶聯(lián)免疫試劑盒靈敏度驗證

為保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，對檢測所用酶聯(lián)免疫試劑盒的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度進(jìn)行驗證。同時，與儀器方法在檢出樣本中的檢測值比較，驗證試劑盒的實用性。

2.6.1 檢出限驗證：通常以檢出限（Limit Of Detection，LOD）作為靈敏度的驗證指標(biāo)，利用20份空白雞肉類（雞胸、雞腿）、鴨肉類（鴨胸、鴨腿）樣本，驗證四環(huán)素類、氯霉素、金剛烷胺、喹諾酮類4種藥物試劑盒的檢出限。檢出限計算公式為平均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差。由表6可知，氯霉素、四環(huán)素類、金剛烷胺、喹諾酮類4種藥物在家禽產(chǎn)品樣品的檢出限分別約為：0.1、3.0、0.5、2.0μg/kg，達(dá)到國家限量要求，部分檢出限優(yōu)于LC-MS/MS方法。

2.6.2 準(zhǔn)確度和精密度驗證：在空白樣本中分別添加1、2、4倍檢出限的四環(huán)素類、氯霉素、金剛烷胺、喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每個添加量樣品重復(fù)實驗10次，并且連續(xù)3d重復(fù)實驗，分別計算每個樣本的檢測值、平均回收率和批內(nèi)、批間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。由表7可知，四環(huán)素類、氯霉素、金剛烷胺、喹諾酮類4種藥物在家禽產(chǎn)品樣品的平均添加回收率為67%～110%；批內(nèi)、批間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于15%，說明酶聯(lián)免疫試劑盒的準(zhǔn)確度良好、精密度高。

2.6.3 與國家標(biāo)準(zhǔn)方法比較：對酶聯(lián)免疫試劑盒檢出的樣本進(jìn)行對應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)方法驗證，結(jié)果顯示，兩種方法檢測結(jié)果一致，顯著性差異分析顯示，P值為0.102（P>0.05），說明兩種方法的檢測結(jié)果無顯著性差異，進(jìn)一步證實了酶聯(lián)免疫試劑盒的準(zhǔn)確性。此外，與LC-MS/MS相比，酶聯(lián)免疫試劑盒反應(yīng)迅速，操作簡單，便于在現(xiàn)場大批量樣本檢測中推廣。

2.7 討論

經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，山東省家禽產(chǎn)品獸藥殘留現(xiàn)象依舊存在，有必要加強(qiáng)對家禽產(chǎn)品獸殘的檢測管理。酶聯(lián)免疫試劑盒具有較高的準(zhǔn)確度，推薦作為初篩手段用于大批量家禽產(chǎn)品獸藥殘留的現(xiàn)場快速檢測。

導(dǎo)致獸藥殘留的原因是多方面的，可能與家禽飼養(yǎng)過程中濫用藥物或休藥期違規(guī)屠宰有關(guān)。由于家禽產(chǎn)品在居民膳食中所占比例較大，應(yīng)當(dāng)提高警惕。相關(guān)部門應(yīng)加強(qiáng)對獸藥使用的監(jiān)管力度，加強(qiáng)源頭監(jiān)管，嚴(yán)格規(guī)范獸藥的安全生產(chǎn)和使用，確保畜產(chǎn)品的質(zhì)量安全。同時，應(yīng)與時俱進(jìn)改進(jìn)檢驗技術(shù)，加強(qiáng)檢測體系的建設(shè)，提高基層單位的獸藥殘留檢測能力，擴(kuò)大檢測范圍，將殘留危害降低到最小程度。