董博翰，丁園園，戴廣麗，王貝茹，張思遠(yuǎn)

(1.皖南醫(yī)學(xué)院 a.生物化學(xué)教研室;b.活性生物大分子研究安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;c.藥學(xué)院，安徽 蕪湖 241002;2.蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院 婦產(chǎn)科，安徽 蕪湖 241000)

三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌中的一種特殊類型。這類疾病因ER、PR、HER-2均呈陰性表達(dá)，缺乏針對(duì)性的藥物作用靶點(diǎn)，所以臨床治療效果不佳、復(fù)發(fā)率較高[1-3]。

抗腫瘤免疫治療是近年來(lái)新興的一種腫瘤治療方法。其中，基于腫瘤細(xì)胞裂解物(tumor cell lysate,TCL)的抗腫瘤療法，有著較好的應(yīng)用前景[4]。這種物質(zhì)中含有腫瘤細(xì)胞內(nèi)絕大多數(shù)的抗原及蛋白質(zhì)，因此，其可以被作為一種抗腫瘤的免疫物質(zhì)去誘導(dǎo)機(jī)體免疫細(xì)胞參與抗腫瘤免疫作用[5-6]。

目前，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TCL可誘導(dǎo)多種免疫細(xì)胞的活化，如單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等[7-8]。不過，TCL活化免疫細(xì)胞并進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞分化的具體機(jī)理，還不甚清楚。本研究中，我們選取人單核細(xì)胞系THP-1作為研究模型，利用三陰性乳腺癌細(xì)胞HCC1937制備的TCL誘導(dǎo)其活化及分化，并探討分化的潛在機(jī)制，為基于TCL的三陰性乳腺癌免疫治療方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 HCC1937細(xì)胞系購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù);人白血病單核細(xì)胞株THP-1購(gòu)于無(wú)錫菩禾生物技術(shù)有限公司；THP-1RPMI 1640培養(yǎng)基購(gòu)于hyclone公司；胎牛血清(FBS)購(gòu)于天津四季青公司；TNF-α、IL-12檢測(cè)試劑盒購(gòu)于武漢華美生物技術(shù)有限公司；LPS購(gòu)于碧云天生物技術(shù)有限公司;PE 偶聯(lián)的抗人 CD68 單克隆抗體購(gòu)于美國(guó)biolegend公司，6 孔培養(yǎng)板 ( 美國(guó) Corning公司；RNAprep Pure培養(yǎng)細(xì)胞/細(xì)菌總RNA提取試劑盒、FastQuant RT 試劑盒及SuperReal 熒光定量預(yù)混試劑購(gòu)于北京天根生物技術(shù)有限公司;其他試劑為國(guó)產(chǎn)市售分析純。CO2培養(yǎng)箱購(gòu)于美國(guó)Thermo Forma 公司;酶標(biāo)檢測(cè)儀購(gòu)于美國(guó) Bio-Rad 公司；相差顯微鏡購(gòu)于日本佳能公司；流式細(xì)胞儀購(gòu)于美國(guó) BD 公司；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購(gòu)于美國(guó)A&B公司。

1.2 三陰性乳腺癌細(xì)胞HCC1937細(xì)胞裂解物的制備 將培養(yǎng)好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HCC1937細(xì)胞用0.25%胰酶消化，于15 mL離心管中制成單細(xì)胞懸液，用1×PBS洗滌細(xì)胞3次，離心，棄去上清后再用PBS重懸細(xì)胞，接著，于-80℃凍存15 min,37℃溫育5 min,震蕩1 min,反復(fù)操作5次，然后離心將上清轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP管中，即得到HCC1937 細(xì)胞裂解物。

1.3 HCC1937細(xì)胞裂解物作用后的THP-1分泌TNF-α、IL-12檢測(cè) 將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的THP-1細(xì)胞接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，1.6×106THP-1細(xì)胞/孔(2 mL) RPMI 1640培養(yǎng)液。將5×105、1×106、2×106的三陰性乳腺癌HCC1937細(xì)胞所制備的裂解物，分別同THP-1細(xì)胞共孵育48 h。與此同時(shí)，將只用1×PBS作用的THP-1細(xì)胞作為陰性對(duì)照組。然后，收集THP-1細(xì)胞培養(yǎng)上清液，ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-12的分泌情況并繪制劑量-效應(yīng)曲線，以篩選出HCC1937細(xì)胞裂解物的最佳濃度。用1×106的HCC1937制備細(xì)胞裂解物，同THP-1細(xì)胞共孵育6、12、24、48 h。同時(shí)設(shè)立PBS陰性對(duì)照組。各時(shí)間點(diǎn)分別收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-12的分泌情況并繪制時(shí)間-效應(yīng)曲線，以篩選出裂解物作用的最佳時(shí)間點(diǎn)。

1.4 流式檢測(cè)HCC1937細(xì)胞裂解物作用后的THP-1細(xì)胞形態(tài)及CD68表達(dá) 用1×106的HCC1937制備細(xì)胞裂解物，同THP-1細(xì)胞共孵育48 h，并在培養(yǎng)液中加入LPS，終濃度為0.05 μg/L。同時(shí)設(shè)立低劑量LPS對(duì)照組，LPS終濃度0.05 μg/L；高劑量LPS對(duì)照組，LPS終濃度0.25 μg/L；1×PBS陰性對(duì)照組。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組THP-1細(xì)胞表面共刺激分子CD68的表達(dá)：首先，制備各組THP-1單細(xì)胞懸液。接下來(lái)，每個(gè)細(xì)胞樣品中加入200 μL 4%多聚甲醛室溫避光20 min，12 000 r/min離心5 min，0.1% trition X-100 1 mL 室溫避光10 min，離心后用熒光標(biāo)記的抗CD68抗體室溫染色細(xì)胞30 min；PBS洗滌液洗滌兩次染色后的 THP-1細(xì)胞，接著，12 000 r/min，離心5 min，棄去上清液保留沉淀；最后用1×PBS重懸THP-1細(xì)胞后上機(jī)檢測(cè)。

1.5 Q-PCR分析THP-1中C/EBPα和PU.1表達(dá)情況 1×106的HCC1937細(xì)胞裂解物作用于THP-1細(xì)胞，于6、12、24、48 h收集作用后的THP-1細(xì)胞及相應(yīng)的1×PBS對(duì)照組細(xì)胞。提取各細(xì)胞樣品的總RNA，反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA分子。以cDNA為模板配置PCR反應(yīng)體系，在Q-PCR儀中兩步法進(jìn)行PCR反應(yīng)，根據(jù)輸出的Ct值分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算ΔCt值及各樣品相對(duì)表達(dá)量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有結(jié)果至少完成3次代表性實(shí)驗(yàn)。利用SPSS 18.0軟件處理全部數(shù)據(jù)，對(duì)于方差齊的兩樣本均數(shù)，采用t檢驗(yàn)；對(duì)于方差不齊的兩樣本均數(shù)，采用秩和檢驗(yàn)來(lái)進(jìn)行比較。百分比的比較，采用卡方檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCC1937細(xì)胞裂解物誘導(dǎo)THP-1活化分泌細(xì)胞因子TNF-α、IL-12 通過將不同劑量的HCC1937細(xì)胞裂解物同THP-1細(xì)胞共同作用48 h后,我們發(fā)現(xiàn)，同PBS對(duì)照組相比5×105、1×106和2×106HCC1937細(xì)胞制備的裂解物都能夠促進(jìn)THP-1分泌TNF-α(P<0.05，其中5×105劑量組t值為24.62，1×106劑量組t值為67.98，2×106劑量組t值為247.42)、IL-12(P<0.05，其中5×105劑量組t值為18.30，1×106劑量組t值為29.07，2×106劑量組t值為52.40),并且細(xì)胞因子的分泌量存在劑量依賴性，隨著作用時(shí)間的增加細(xì)胞因子的濃度也逐漸增加(圖1A)。不過，實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)2×106裂解物作用48 h后，細(xì)胞亮度變暗，細(xì)胞邊緣變得毛糙，這提示THP-1的細(xì)胞狀態(tài)較差，但其他兩個(gè)劑量作用后的THP-1細(xì)胞狀態(tài)未發(fā)現(xiàn)明顯變化。

接下來(lái)，我們選擇促進(jìn)THP-1分泌細(xì)胞因子能力更強(qiáng)，同時(shí)又不影響細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)的1×106這個(gè)裂解物劑量，進(jìn)行后續(xù)的作用時(shí)間摸索。我們發(fā)現(xiàn)，在將裂解物同THP-1孵育6 h后TNF-α、IL-12的分泌水平就升高(P<0.05，其中TNF-α檢測(cè)組t值為41.25，IL-12檢測(cè)組t值為30.23)，12 h時(shí)TNF-α、IL-12的分泌水平達(dá)到最高，分別為272.39 ng/L、647.10 ng/L。這種高分泌水平持續(xù)到24、48 h時(shí)TNF-α、IL-12的分泌量會(huì)出現(xiàn)下降，但同PBS對(duì)照組相比仍處于較高水平(P<0.05，TNF-α檢測(cè)組t值為18.44，IL-12檢測(cè)組t值為39.23)(圖1B)。

A.TNF-α、IL-12分泌劑量依賴曲線；5×105,1×106,2×106代表制備細(xì)胞裂解物的細(xì)胞數(shù)；B.TNF-α、IL-12分泌時(shí)間依賴曲線。

圖1 HCC1937細(xì)胞裂解物促THP-1細(xì)胞分泌TNF-α、IL-12

2.2 HCC1937細(xì)胞裂解物促進(jìn)THP-1細(xì)胞形態(tài)改變 THP-1是一種單核細(xì)胞系，具有進(jìn)一步分化成巨噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞的潛能。THP-1分化后細(xì)胞形態(tài)會(huì)發(fā)生改變。通過流式檢測(cè)細(xì)胞裂解物+低劑量LPS作用后的THP-1細(xì)胞，我們發(fā)現(xiàn)：同對(duì)照組相比，THP-1細(xì)胞流式檢測(cè)前向角光散射的檢測(cè)數(shù)值發(fā)生了明顯的增加，檢測(cè)值50 K以上的細(xì)胞比例達(dá)36.8%(χ2=6.21)，這和高劑量LPS作用后的細(xì)胞檢測(cè)值基本相似，高劑量LPS作用的THP-1細(xì)胞中高檢測(cè)值比例達(dá)28.7%(χ2=1.70)。與之相比，低劑量LPS作用后的THP-1細(xì)胞和PBS對(duì)照組THP-1細(xì)胞，細(xì)胞比例都相對(duì)較小，分別為21.6%(χ2=0.03)和21.4%(圖2A)；同前向角光散射類似的，細(xì)胞裂解物+低劑量LPS組THP-1細(xì)胞中(χ2=16.835)，高側(cè)向角光散射檢測(cè)值細(xì)胞比例高于低劑量LPS組(χ2=1.332)和PBS對(duì)照組，而與高劑量LPS組類似(χ2=6.438)(圖2B)。上述結(jié)果提示：細(xì)胞裂解物作用組、高劑量LPS作用組的細(xì)胞形態(tài)同PBS對(duì)照組、低劑量LPS組相比差別明顯。

A.THP-1細(xì)胞前向角光散射的改變；PBS:1×PBS對(duì)照組，LPS 1：低劑量LPS 0.05 μg/L作用組，LPS 2：高劑量LPS 0.25 μg/L作用組，LPS1+TCL：LPS 0.05 μg/L、HCC1937細(xì)胞裂解物聯(lián)用組；B.THP-1細(xì)胞側(cè)向角散射光的改變。

圖2 HCC1937細(xì)胞裂解物作用的THP-1細(xì)胞形態(tài)改變

2.3 HCC1937細(xì)胞裂解物上調(diào)THP-1細(xì)胞CD68表達(dá) CD68是巨噬細(xì)胞特異性的細(xì)胞表面分子。THP-1向巨噬細(xì)胞分化，這一表面分子會(huì)出現(xiàn)上調(diào)。在流式檢測(cè)細(xì)胞裂解物作用后的THP-1形態(tài)變化的同時(shí)，我們也檢測(cè)THP-1細(xì)胞CD68的表達(dá)情況。LPS+細(xì)胞裂解物作用后，THP-1細(xì)胞表面CD68的表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)，表達(dá)率達(dá)93.7%(χ2=91.55)，而高劑量LPS作用的THP-1細(xì)胞CD68表達(dá)也出現(xiàn)上調(diào)，表達(dá)率為71.6%(χ2=38.72)。不過，PBS對(duì)照組、低劑量LPS組CD68的表達(dá)相對(duì)較低，尤其是PBS對(duì)照組的表達(dá)率只有28.1%(χ2=18.36)(圖3)。這應(yīng)該是THP-1自發(fā)分化后的CD68基礎(chǔ)表達(dá)率。如將這一基礎(chǔ)表達(dá)率減除后，則LPS+細(xì)胞裂解物組CD68表達(dá)率為65.6%，高劑量LPS組為43.5%，低劑量LPS組為30.1%。

PBS:1×PBS對(duì)照組，LPS 1：低劑量LPS 0.05 μg/L作用組，LPS 2：高劑量LPS 0.25 μg/L作用組，LPS1+TCL：LPS 0.05 μg/L、HCC1937細(xì)胞裂解物聯(lián)用組。

圖3 HCC1937細(xì)胞裂解物上調(diào)THP-1細(xì)胞表面分子CD68的表達(dá)

2.4 HCC1937細(xì)胞裂解物對(duì)單核細(xì)胞分化標(biāo)志物C/EBPα和PU.1表達(dá)的影響 C/EBPα和PU.1是控制單核細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子，它們的變化直接影響單核細(xì)胞分化方向。Q-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：同PBS對(duì)照組相比，細(xì)胞裂解物作用的THP-1，其C/EBPα和PU.1表達(dá)都會(huì)出現(xiàn)明顯的增加。但隨著作用時(shí)間的增加，C/EBPα的表達(dá)逐漸增加，而PU.1的表達(dá)則逐漸下降。其中，C/EBPα的表達(dá)量在6 h時(shí)是PBS對(duì)照組的1.47倍，而12、24 h分別為對(duì)照組的1.59倍和2.25倍，至48 h，C/EBPα表達(dá)量則為對(duì)照組的2.01倍。其24 h和48 h表達(dá)量同PBS對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，其中24 h檢測(cè)組t值為17.06、48 h檢測(cè)組t值為12.87)，6 h和12 h差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，其中6 h檢測(cè)組t值為4.99、12 h檢測(cè)組t值為9.57)(圖4A);與之不同的是，PU.1的表達(dá)在6 h時(shí)即達(dá)最大值，為對(duì)照組的2.29倍，之后開始下降，至48 h下降為對(duì)照組的1.57倍。其中6、12 h同PBS對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，其中6 h檢測(cè)組t值39.15、 12 h檢測(cè)組t值為34.5)，24、48 h相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，其中24 h檢測(cè)組t值為3.12，48 h檢測(cè)組t值為7.48)(圖 4B)。這些結(jié)果表明，HCC1937細(xì)胞裂解物能促進(jìn)THP-1細(xì)胞中分化因子C/EBPα的表達(dá)，但卻抑制另外一種分化因子PU.1的表達(dá)。

3 討論

腫瘤細(xì)胞裂解物的主要抗腫瘤機(jī)理是可以活化免疫細(xì)胞。免疫細(xì)胞的種類很多，不同免疫細(xì)胞的活化是一個(gè)連續(xù)分階段的過程。腫瘤細(xì)胞裂解物中的抗原或蛋白接觸免疫系統(tǒng)后，抗原遞呈細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞會(huì)攝取抗原蛋白，并將其遞呈給T淋巴細(xì)胞，使其特異性活化以發(fā)揮抗腫瘤作用[9]。在這些免疫細(xì)胞中，抗原遞呈細(xì)胞往往又是由單核細(xì)胞分化而來(lái)[10]。因此，促進(jìn)單核細(xì)胞活化及向抗原遞呈細(xì)胞分化，將有利于腫瘤細(xì)胞裂解物抗腫瘤作用的發(fā)揮。

A.各作用時(shí)間點(diǎn)，THP-1中C/EBPα mRNA相對(duì)于PBS對(duì)照組的表達(dá)量；B.各作用時(shí)間點(diǎn)，THP-1中PU.1 mRNA相對(duì)于PBS對(duì)照組的表達(dá)量;PBS:1×PBS對(duì)照組。

圖4 HCC1937細(xì)胞裂解物作用后的THP-1中C/EBPα、PU.1的表達(dá)

為驗(yàn)證腫瘤細(xì)胞裂解物對(duì)單核細(xì)胞活化及分化的影響。我們選取人單核細(xì)胞THP-1作為研究對(duì)象，在將不同劑量的HCC1937細(xì)胞裂解物同THP-1細(xì)胞共同作用之后，我們發(fā)現(xiàn)雖然2×106的HCC1937細(xì)胞制備的細(xì)胞裂解物可以顯著刺激THP-1細(xì)胞分泌TNF-α，但該劑量的細(xì)胞裂解物同THP-1細(xì)胞共孵育48 h后會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。因此，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中我們選擇了1×106的HCC1937細(xì)胞制備裂解物。通過將這一劑量的細(xì)胞裂解物，同THP-1細(xì)胞共同孵育6、12、24、48 h后我們發(fā)現(xiàn)：HCC1937細(xì)胞裂解物可以顯著刺激THP-1分泌TNF-α和IL-12。 TNF-α和IL-12都是活化單核細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，這兩種細(xì)胞因子分泌水平的增加說明HCC1937細(xì)胞裂解物可以激活單核細(xì)胞。

單核細(xì)胞是抗原遞呈細(xì)胞的前體細(xì)胞，活化的單核細(xì)胞會(huì)向不同類型的抗原遞呈細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞分化。在本研究中，流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示：同PBS對(duì)照組相比，細(xì)胞裂解物作用的THP-1前向角光散射(FSC)及側(cè)向角光散射(SSC)明顯增大。前向角光散射增大證明細(xì)胞體積明顯增大，側(cè)向角光散射增大代表細(xì)胞顆粒度增大，這些都符合單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化的特征[11-12]。與此同時(shí)，LPS和細(xì)胞裂解物共同作用的THP-1細(xì)胞表面分子CD68出現(xiàn)上調(diào)。這說明在HCC1937裂解物作用下，單核細(xì)胞THP-1會(huì)分化成為巨噬細(xì)胞[13]。

為了進(jìn)一步驗(yàn)證THP-1細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化。我們利用Q-PCR的方法檢測(cè)了裂解物作用后的THP-1細(xì)胞中分化關(guān)鍵因子C/EBPα(CCAAT enhancer binding protein α)和PU.1的表達(dá)情況。PU.1及C/EBPα是調(diào)控單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。研究表明，PU.1的表達(dá)可以抑制單核-巨噬細(xì)胞的定向分化[14]。與之相反的，分化誘導(dǎo)因子C/EBPα的表達(dá)可以誘導(dǎo)單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化[15]。通過Q-PCR檢測(cè)HCC1937細(xì)胞裂解物作用的THP-1細(xì)胞C/EBPα及PU.1的表達(dá)我們發(fā)現(xiàn)：裂解物作用的THP-1細(xì)胞，C/EBPα的表達(dá)出現(xiàn)增加，而另外一種分化調(diào)節(jié)因子PU.1，則隨細(xì)胞裂解物作用時(shí)間的增加，表達(dá)量逐漸減少。這又進(jìn)一步證明了HCC1937裂解物可以誘導(dǎo)THP-1向巨噬細(xì)胞分化，且分化的機(jī)制同細(xì)胞中分化調(diào)節(jié)因子C/EBPα的上調(diào)和PU.1的下調(diào)有密切聯(lián)系。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)三陰性乳腺癌細(xì)胞HCC1937裂解物可以刺激活化人單核細(xì)胞THP-1分泌TNF-α及IL-12，并通過上調(diào)THP-1中C/EBPα和下調(diào)PU.1的表達(dá)，誘導(dǎo)THP-1向巨噬細(xì)胞分化。分化后的巨噬細(xì)胞，將可以通過分泌細(xì)胞因子或遞呈抗原給淋巴細(xì)胞，發(fā)揮更強(qiáng)的抗腫瘤免疫作用。這些發(fā)現(xiàn)將為三陰性乳腺癌細(xì)胞裂解物疫苗的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】

[1] GADI VK,DAVIDSON NE.Practical Approach to triple-negative breast cancer [J].J Oncol Pract,2017,13(5):293-300.

[2] JITARIU AA,CIMPEAN AM,RIBATTI D,etal.Triple negative breast cancer:the kiss of death [J].Oncotarget,2017,8(28):46652-46662.

[3] ANAREOPOULOU E,SCHWEBER SJ,SPARANO JA,etal.Therapies for triple negative breast cancer [J].Expert Opin Pharmacother,2015,16(7):983-998.

[4] SUN W,FANG M,CHEN Y,etal.Delivery system of CpG oligodeoxynucleotides through eliciting an effective T cell immune response against melanoma in mice [J].J Cancer,2016,7(3):241-250.

[5] YAN Y,FANG M,XUAN W,etal.The therapeutic potency of HSP65-GTL in GL261 glioma-bearing mice [J].J Immunother,2015,38(9):341-349.

[6] XUAN W,YAN Y,WAN M,etal.Antitumor activity of mHSP65-TTL enhanced by administration of low dose cyclophosphamide in pancreatic cancer-bearing mice[J].Int Immunopharmacol,2015,27(1):95-103.

[7] 朱學(xué)軍,曹雪濤,雷虹,等.弱酸洗脫提取的腫瘤抗原肽致敏的樹突狀細(xì)胞對(duì)CTL的體內(nèi)外激活 [J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2000,20(2):98.

[8] DONG BH,SUN LG,WU XL,etal.Vaccination with TCL plus MHSP65 induces anti-lung cancer immunity in mice [J].Cancer immunol immun，2010，59(6):899-908.

[9] SMITHGARVIN JE，KORETZKY GA，JORDAN MS.T cell activation[J].Annual Review of Immunology,2015,27 (27):591-619.

[10] JAKUBZICK CV,RANDOLPH GJ,HENSON PM.Monocyte differentiation and antigen-presenting functions.[J].Nat Rev Immunol,2017，17(6):349-362.

[11] 魏然,陳彬,甘田福,等.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血CD14+細(xì)胞的活化程度 [J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2003,26(1):22-24.

[12] 張美英.吞噬細(xì)胞和巨噬細(xì)胞 [J].生物學(xué)通報(bào),1992(10):33.

[13] 崔璐華,王庸晉,王金勝,等.不對(duì)稱二甲基精氨酸對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞表達(dá)巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子的影響 [J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志,2010,3:169-172.

[14] ZHU XJ,YANG ZF,CHEN Y,etal.PU.1 is essential for CD11c expression in CD8(+)/CD8(-) lymphoid and monocyte-deriveddendritic cells during GM-CSF or FLT3L-induced differentiation [J].PLoS One，2012，7(12):e52141.

[15] 應(yīng)霽，王偉銘.轉(zhuǎn)錄因子CCAAT增加子結(jié)合蛋白α的研究進(jìn)展[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2015，35(2)：262-267.