，，

1.中國人民解放軍第92醫(yī)院消化內(nèi)科，福建 南平 353000； 2.福建醫(yī)科大學(xué)?？偱R床醫(yī)學(xué)院

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of Cyclin D1 and P53 protein in different pathological classification, endoscopic morphology and organization atypia of short segment Barrett’s esophagus (SSBE), predict the risk of canceration in patients with SSBE, screen the patients with high-risk accurately, and provide an evidence for making endoscopic follow-up plan.MethodsFifty-one cases with SSBE were diagnosed by endoscopy, biopsy and pathological examination. Another 32 cases with normal esophageal mucosa were chosen as the control group. According to endoscopic morphology, the cases with SSBE were sub-grouped included circumferential type (16 cases), tongued-like type (13 cases) and island type (22 cases). According to histopathology, the cases with SSBE were classified to gastric fundus type (20 cases), cardia type (21 cases) and special intestinal metaplasia type (10 cases). According to organization atypia, the cases with SSBE were included non-dysplasia (37 cases), low-grade dysplasia (14 cases) and high-grade dysplasia (no case). The expressions of Cyclin D1 and P53 protein were examined with the SP immunohistochemistry method and the results were statistically analyzed.ResultsThe expressions of Cyclin D1 and P53 protein in SSBE group and normal esophageal mucosa had no statistically significant difference (P>0.05). No remarkable differences about the expressions of Cyclin D1 and P53 protein among the subgroups according to endoscopic morphology and histopathology were found (P>0.05). The expressions of Cyclin D1 and P53 protein were all in high level in SSBE group with dysplasia. The positive rates of Cyclin D1 in non-dysplasia group, low-grade dysplasia group were 21.6%, 64.3%, respectively, the difference between two groups was statistically significant (P=0.007). The

positive rates of P53 protein in non-dysplasia group, low-grade dysplasia group were 27.0%, 71.4%, respectively, there was significant difference between two groups (P=0.006).ConclusionSSBE has low risk of canceration. The risk of cancer in SSBE has no direct correlation with morphologic classification under endoscope and histopathological classification. But with the increase of dysplasia degree, the expressions of Cyclin D1 and P53 protein increase obviously, which prompts that cancerization risk in SSBE with dysplasia will increase significantly.

【Keywords】 Short segment Barrett’s esophagus; Organization atypia; Cyclin D1; P53 protein; Immunohistochemistry

Barrett’s食管(Barrett’s esophagus，BE)是指正常食管的復(fù)層鱗狀上皮被化生的柱狀上皮所替代的一種病理現(xiàn)象，是長期胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease，GERD)的嚴(yán)重并發(fā)癥。雖然特殊腸上皮化生→低度異型增生→高度異型增生→原位癌→浸潤性腺癌的BE惡性進(jìn)展的病理過程已為學(xué)術(shù)界所公認(rèn)；伴有腸上皮化生的BE屬于食管腺癌的癌前病變，而食管下段不伴腸上皮化生的單純柱狀上皮是否也存在相似的惡變潛能仍未確定。細(xì)胞的異常增殖及惡性轉(zhuǎn)變是由細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)失控所致，作為在細(xì)胞增殖周期中起正、負(fù)反饋調(diào)控關(guān)鍵作用的基因，Cyclin D1、P53蛋白的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生關(guān)系已越來越多地受到關(guān)注，但在作為食管腺癌發(fā)生的危險因素BE尤其是短段Barrett’s食管(short segment Barrett’s esophagus，SSBE)病理進(jìn)程中的作用研究尚少。本課題通過免疫組化染色法對SSBE不同內(nèi)鏡下形態(tài)分型、不同組織分型及不同異型程度各亞組中Cyclin D1、P53蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測和分析，并將SSBE與正常食管黏膜組織中Cyclin D1、P53蛋白的表達(dá)進(jìn)行比較，以探討Cyclin D1、P53蛋白與SSBE病理進(jìn)展的關(guān)系，進(jìn)而評估SSBE總體癌變風(fēng)險及各亞型SSBE的癌變風(fēng)險，準(zhǔn)確篩選出高危人群，為制定更加精準(zhǔn)的內(nèi)鏡隨訪計劃、選擇合適的治療手段提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2015年11月至2016年12月于中國人民解放軍第92醫(yī)院行電子胃鏡及病理檢查明確診斷為SSBE患者51例，另選取同期內(nèi)鏡檢查提示正常食管黏膜32名作為對照組。符合入選標(biāo)準(zhǔn)的SSBE組中男27例、女24例，年齡(51.31±13.75)歲；正常食管黏膜組中男17名、女15名，年齡(51.64±12.46)歲；兩組在年齡、性別構(gòu)成上比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2內(nèi)鏡檢查與活檢取材BE內(nèi)鏡下表現(xiàn)為齒狀線上移，胃結(jié)合部近端出現(xiàn)橘紅色伴或不伴有柵欄樣血管表現(xiàn)的柱狀上皮。化生的柱狀上皮未累及食管全周或雖累及全周但長度<3 cm的BE，即SSBE；化生的柱狀上皮累及食管全周且長度≥3 cm的BE，即長段BE(long segment Barrett’s esophagus，LSBE)。內(nèi)鏡分型：全周型、舌型、島型。

1.3 組織病理

1.3.1 HE染色：病理學(xué)檢查證實存在柱狀上皮細(xì)胞即可診斷為BE。按照食管下段化生的柱狀上皮的組織學(xué)特征分為：胃底型、賁門型、腸上皮化生型。根據(jù)異型細(xì)胞累及范圍分為輕度、中度和重度異型增生。

1.3.2 免疫組化：選用福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)的鼠抗人單克隆抗體P53(一抗)、鼠抗人單克隆抗體Cyclin D1(一抗)、免疫組化SP試劑盒。陰性對照：磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗。判斷標(biāo)準(zhǔn)：Cyclin D1、P53表達(dá)陽性部位均位于細(xì)胞核，核內(nèi)見棕黃色顆粒者為陽性細(xì)胞，超過10%的細(xì)胞出現(xiàn)陽性表達(dá)計為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各型例數(shù)統(tǒng)計SSBE組患者按內(nèi)鏡分型：全周型16例、舌型13例、島型22例；按組織學(xué)特征分型：胃底型20例、賁門型21例、腸上皮化生型10例；按異型細(xì)胞累及范圍分型：無異型增生37例、輕度異型增生14例、重度異型增生0例。

2.2CyclinD1在各組食管黏膜組織中的表達(dá)情況Cyclin D1在SSBE組中的表達(dá)陽性率為33.3%(17/51)，在正常食管黏膜組中的表達(dá)陽性率為15.6%(5/32)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.165，P=0.075)。

2.3P53在各組食管黏膜組織中的表達(dá)情況P53在SSBE組中的表達(dá)陽性率為39.2%(20/51)，在正常食管黏膜組中的表達(dá)陽性率25.0%(8/32)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.778，P=0.182)。

2.4CyclinD1在不同類型SSBE中的表達(dá)情況SSBE不同的內(nèi)鏡形態(tài)分型、組織分型中Cyclin D1的表達(dá)陽性率相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。合并異型增生的SSBE組中Cyclin D1呈高表達(dá)，在輕度異型增生組與無異型增生組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

2.5P53在不同類型SSBE中的表達(dá)情況SSBE不同的內(nèi)鏡形態(tài)分型、組織分型中P53的表達(dá)陽性率相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；而在合并異型增生的SSBE組中P53呈高表達(dá)，輕度異型增生組與無異型增生組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表2)。

表1 Cyclin D1在不同類型SSBE中的表達(dá)Tab 1 Expression of Cyclin D1 in different types of SSBE

表2 P53在不同類型SSBE中的表達(dá)Tab 2 Expression of P53 protein in different types of SSBE

3 討論

雖然BE已被公認(rèn)為食管腺癌的癌前病變，然而食管腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個需要多因素參與的多階段演進(jìn)的復(fù)雜過程。國內(nèi)多項回顧性研究[2-4]表明，我國食管惡性腫瘤的病理分型中食管鱗癌仍占絕大比重，腺癌所占的比例很低(0.8%～3.23%)，這與西方國家食管腺癌患病率呈逐年增加的趨勢存在明顯差異。我國Barrett’s食管診治共識中明確指出伴有腸上皮化生的BE才屬于食管腺癌的癌前病變，而食管下段不伴腸上皮化生的柱狀上皮的癌變風(fēng)險尚未確定。在我國，雖然內(nèi)鏡及手術(shù)病理檢查發(fā)現(xiàn)食管下段柱狀上皮化生的發(fā)生率較高，但BE中出現(xiàn)腸上皮化生的比例很低。我們在研究中發(fā)現(xiàn)，51例經(jīng)內(nèi)鏡及病理確診為SSBE的患者中，僅10例(19.6%)出現(xiàn)特殊腸上皮化生，也支持上述結(jié)論。近年來有學(xué)者在對BE進(jìn)展為食管腺癌風(fēng)險的大樣本人群研究[6]中發(fā)現(xiàn)，有特殊腸上皮化生的BE年癌變率為0.27%，而無特殊腸上皮化生的BE年癌變率為0.06%。我國多數(shù)患者的柱狀上皮化生長度<3 cm，即以SSBE為主，LSBE少見[7]。已有研究[8]證實，SSBE組中特殊腸上皮化生的發(fā)生率低于LSBE組，不典型增生的發(fā)生率亦明顯低于LSBE組。由此推論，雖然BE是公認(rèn)的食管腺癌的癌前病變，但其總體癌變風(fēng)險很低，尤其是未出現(xiàn)特殊腸上皮化生的柱狀上皮化生。

基于腫瘤分子生物學(xué)的研究[9]表明，細(xì)胞的異常增殖及惡性轉(zhuǎn)變是由細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)失控所致，而細(xì)胞周期的調(diào)控又依賴于細(xì)胞周期蛋白(Cyclins)-細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶(CDKs)-周期蛋白依賴性激酶抑制因子(CKIs)系統(tǒng)。Cyclin D1是細(xì)胞周期的啟動因子，其作為原癌基因被激活后，在細(xì)胞中表達(dá)異常增高，此時Rb蛋白磷酸化提前，導(dǎo)致細(xì)胞周期G1/S期轉(zhuǎn)換時間縮短，細(xì)胞增殖失控，從而發(fā)生癌變。P53基因是最為重要的抑癌基因，參與細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)控、阻滯細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并促進(jìn)其分化，在抑制腫瘤的發(fā)生方面發(fā)揮重要作用[10]。當(dāng)P53基因突變，所表達(dá)的P53蛋白可能會失去對細(xì)胞生長的抑制功能，導(dǎo)致細(xì)胞增殖活性增加和細(xì)胞周期發(fā)生異常改變，進(jìn)而促使細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)變和腫瘤的形成。

本研究采用免疫組織化學(xué)法分別檢測SSBE組與正常食管黏膜組間，SSBE不同內(nèi)鏡下形態(tài)分型、不同組織分型及不同異型程度各亞組間Cyclin D1、P53的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，Cyclin D1、P53在SSBE組及正常食管黏膜組中的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示可能SSBE總體癌變風(fēng)險低，但因樣本量少，特別是異型病例少，仍需進(jìn)一步研究。在SSBE不同的內(nèi)鏡分型、組織分型中Cyclin D1、P53的陽性表達(dá)率組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；由此可知，SSBE惡性進(jìn)展的風(fēng)險與內(nèi)鏡分型及組織學(xué)分型的不同并無直接相關(guān)性，但因研究對象中出現(xiàn)特殊腸上皮化生的病例少，這一結(jié)果還有待通過增加樣本量的研究進(jìn)一步驗證。Cyclin D1、P53在合并異型增生組中均呈高表達(dá)，二者的表達(dá)陽性率在無異型增生、輕度異型增生組間比較，均有顯著性差異。由此推論，SSBE合并異型增生者癌變風(fēng)險將明顯增加。

綜上所述，并不是所有的BE患者均有進(jìn)展為食管腺癌的潛能，因此，有必要在內(nèi)鏡及普通病理檢查的基礎(chǔ)上更深入地探尋能有效反映BE疾病進(jìn)展的分子生物學(xué)標(biāo)記物，精準(zhǔn)篩選高危人群，避免在大范圍人群中進(jìn)行無選擇性、高頻率的內(nèi)鏡監(jiān)測，并為指導(dǎo)制定內(nèi)鏡隨訪計劃、選擇合適的治療手段進(jìn)行早期干預(yù)提供依據(jù)。

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