王小永 趙麗娜
【摘 要】目的:為了解當(dāng)前中藥制劑中的非法添加化學(xué)降壓藥物的現(xiàn)象,通過HPLC進行定性檢測中藥制劑可能存在有非法添加的10種化學(xué)降壓藥物。方法:應(yīng)用Agilent Extend-C18柱(250 mm*4.6 mm,5 μm),0.02 mol·L?1醋酸銨溶液為流動相A,甲醇-乙腈(2∶1)為流動相B,梯度洗脫,230 nm檢測波長,30℃柱溫,1.0 mL·min?1流速。結(jié)果:10種化學(xué)降壓藥物均具分離度、線性與檢測的靈敏度。檢測限0.01~13 ng,5針連續(xù)進樣的色譜圖中,各組分保留的時間RSD <0.1%。結(jié)論:HPLC檢測中藥中非法添加化學(xué)降壓藥物簡便且靈敏,同時重復(fù)性佳,可作為對降壓類藥物鑒別的有效方法進行推廣。
【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法;中藥制劑;化學(xué)降壓藥物;非法添加
【中圖分類號】R284 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851(2018)05--02
近年以來,純中藥的制劑及各類的保健品中,非法進行化學(xué)藥物添加的案例越多越多[1]。降壓類的中藥制劑當(dāng)中,添加了西藥成分的現(xiàn)象在這些案件中相對突出,這種不法行為為人們健康帶來極其嚴(yán)重的威脅[2]。本研究通過對中藥的制劑中是否存在非法添加了化學(xué)降壓藥進行初步的篩查,選擇10種降壓藥物,應(yīng)用梯度洗脫法對化學(xué)降壓藥進行分離的操作,結(jié)果顯示了該方法靈敏、簡便且重復(fù)性好,具體操作如下。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
高效液相色譜儀(Agilent 1200),配液相四元泵、紫外光可變波長檢測器、控溫自動進樣器;高速離心機(TGL 16G);電子天平(Mettler AE200);超聲波發(fā)生器(SB5200)。
1.2 降壓藥的對照品
氫氯噻嗪片:(國藥準(zhǔn)字H44023235,用量規(guī)格:25 mg,三才石岐制藥股份有限公司)、吲達怕胺片:(國藥準(zhǔn)字H44020885,用量規(guī)格:2.5 mg,廣東安諾藥業(yè)股份有限公司)、氯沙坦鉀片:(國藥準(zhǔn)字H20070264,用量規(guī)格:50 mg,浙江華海藥業(yè)股份有限公司)、厄貝沙坦片:(國藥準(zhǔn)字H20030016,用量規(guī)格:150 mg,浙江華海藥業(yè)股份有限公司)、硝苯地平片:(國藥準(zhǔn)字H44023986,用量規(guī)格:10 mg,廣東華南藥業(yè)集團有限公司)、酒石酸美托洛爾片:(國藥準(zhǔn)字H32025390,用量規(guī)格:25 mg,阿斯利康制藥有限公司)、鹽酸特拉唑嗪片:(國藥準(zhǔn)字H20023659,用量規(guī)格:2 mg,上海雅培制藥有限公司)、替米沙坦片:(國藥準(zhǔn)字H20061185,用量規(guī)格:40 mg,蘇州東瑞制藥有限公司)、鹽酸地爾硫片:(國藥準(zhǔn)字H10880015,用量規(guī)格:30 mg,上海信誼萬象藥業(yè)股份有限公司)、尼群地平片:(國藥準(zhǔn)字H13022629,用量規(guī)格:10 mg,石藥集團歐意藥業(yè)有限公司)、
均為市場購買,含量按標(biāo)示的含量100%進行折算。
1.3 試劑 分析純試劑(醋酸銨)、純化水、色譜純?yōu)榧状寂c乙腈(Tedia,美國)。
1.4 樣品 采用珍菊降壓片(國藥準(zhǔn)字Z20053333,規(guī)格:0.25 g,含鹽酸可樂定0.03 mg、氫氯噻嗪5 mg蘆丁20 mg,雷允上藥業(yè)有限公司)為市場購買。
2 方法
2.1 高效液相色譜條件設(shè)置 應(yīng)用C18色譜柱(250 mm*4.6 mm,5 μm),0.02 mol·L?1醋酸銨溶液為流動相A,甲醇-乙腈(2∶1)為流動相B,梯度洗脫,230 nm檢測波長,30℃柱溫,1.0 mL·min?1流速,進樣量控制2 μL。
2.2 制備對照液 將10種獲得的對照藥研磨成粉,依次精密的稱取相當(dāng)各對照的化合物10mg量,置于同一帶塞的錐形瓶,精準(zhǔn)加入20 mL甲醇,進行10min超聲后靜置,并進行高速離心10min,取離心后的上清液,獲得對照液以備用。
2.3 制備樣品液 將珍菊降壓片研磨成細粉狀,進行精準(zhǔn)稱定后置帶塞的錐形瓶當(dāng)中,加入20 mL甲醇,進行10min超聲后靜置,并進行高速離心10min,取離心后的上清液,獲得制備樣品液。
3 結(jié)果
3.1 降壓藥峰面積線性結(jié)果
制備得對照液注入高效液相色譜儀當(dāng)中進行分析[3]。依據(jù)高效液相色譜條件設(shè)置,10種降壓藥化合物均得到很好的分離。對照液進行適量10倍稀釋,按高效液相色譜條件下依次進樣分析(2~10μL每2μL梯度進樣)。將10種降壓藥的進樣量峰面積線性回歸顯示,R=0.9994~0.9999,藥物該流動相系統(tǒng)穩(wěn)定,線性均呈現(xiàn)良好。
3.2 檢測限
精密量取適量對照液,加甲醇逐級稀釋至不同濃度,按高效液相色譜條件設(shè)置進行測定,顯示在高效的液相色譜圖當(dāng)中,各物質(zhì)的色譜峰信噪比(S/N)=10,研究的10種降壓藥物檢測限均處于0.01~13ng,表明HPLC檢測的靈敏性高。
討論
應(yīng)用梯度洗脫程序,以甲醇、乙腈及緩沖鹽作為流動相。此系統(tǒng)可對10種降壓藥進行同時的分離。并采用不同色譜柱,各藥物分離結(jié)果各不同。在應(yīng)用Agilent TC-C18柱分析HPLC的圖譜中觀察到了9個特征峰,其中,替米沙坦特征峰在圖譜中消失,因此Agilent TC-C18靈敏度低。而應(yīng)用Agilent Extend-C18柱進行分析時,則10種藥的分離均良好,可選擇Agilent Extend-C18柱進行處理分析。另外,研究的10種降壓藥物檢測限均處于0.01~13ng,表明HPLC檢測的靈敏性高。
總而言之,HPLC檢測中藥中非法添加化學(xué)降壓藥物簡便且靈敏,同時重復(fù)性佳,可作為對降壓類藥物鑒別的有效方法進行推廣。
參考文獻
鞏麗萍,田晨穎,郭常川,等.超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜快速篩查及定量分析中成藥或保健品中非法添加的24種消炎止痛類化學(xué)成分[J].中國藥學(xué)雜志,2015,50(24):2154-2159.
林偉杰,梁祈,詹若挺.止咳平喘類中成藥中9種非法添加化學(xué)成分的定性定量檢驗方法研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2017,34(3):418-423.
沈于蘭,申蘭慧,蘇嘉焱.HPLC法同時測定止咳平喘類中成藥中非法添加的9種化學(xué)成分[J]. 中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2016,17(1):37-40.