孟思妤 孟長明 陳昌福

（1.河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司，453700；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，430070）

其次，就是藥敏片。藥敏片材質(zhì)的好壞，對藥物穩(wěn)定性和活性有很大影響。加工藥敏片的濾紙一般是使用加厚型的濾紙，因為這種濾紙雜質(zhì)少，對藥物保存無太大影響。如果使用普通濾紙的話，被水浸潤后會呈堿性，并且含有大量無機離子，所以使用普通濾紙加工的藥敏片對藥物有較大的影響。藥敏片的pH一般要求為中性，這樣才適合保持藥物自身的特性。藥敏片的厚度要求大約1.0mm，這樣才有利于細菌的生長和藥物的擴散速度。藥敏片的直徑在6.00～6.35mm之間，紙片的厚度和直徑大小都會影響藥敏試驗的結(jié)果。

藥敏片的片間差和質(zhì)量好壞是決定藥敏試驗成敗的關(guān)鍵。如果是從商店購買的藥敏片，就可能會有抑菌環(huán)偏大或偏小的問題，紙片之間又存在很大的片間差。因此，紙片在用前必須檢驗其片間差和準確度，只有都達到標(biāo)準要求后才能使用。同時要注意藥敏片的保存，因為有些種類的藥敏片，如青霉素類，在保存中因為受潮濕環(huán)境的影響容易降低其藥物的活性。

其三，就是致病菌。由于各種致病菌對藥物的敏感性不同，產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小不同，如果供試致病菌不純，試驗中所產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小與該菌種在純培養(yǎng)狀態(tài)下產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小存在較大的差異，直接影響到判斷結(jié)果的準確性。因此，需要對各種致病菌提純后，分別進行不同的藥敏試驗。藥敏試驗時，需要將提純后的菌種配制成一定濃度的菌液。NCCLS制定的標(biāo)準是要求菌液濃度在1.5億/mL左右。若菌液濃度過高，該菌會對所有藥物產(chǎn)生耐藥；反之，菌液濃度過低，該菌會對所有藥物均敏感。最精確的方法是使用分光光度計測定新鮮培養(yǎng)物菌懸液的吸光度，確定菌液濃度。

藥敏試驗中要將菌液均勻地涂在培養(yǎng)基上，使細菌均勻分布，這樣才能使試驗結(jié)果不會出現(xiàn)較大的偏差。涂菌后15分鐘才能貼藥敏片。由于涂菌后，細菌要有一段時間的適應(yīng)過程，但是時間不能過長，否則會使細菌產(chǎn)生耐藥。貼藥敏片時，每取一種藥敏片必須燒一下鑷子口，避免藥敏片之間相互混淆，以提高藥敏試驗的準確性。藥物殺滅細菌存在一定的量比，藥敏試驗培養(yǎng)基上細菌層越厚抑菌圈就越小，反之抑菌圈就越大。根據(jù)一種藥物抑菌圈的有無或者大小，只能判斷出該藥對細菌有沒有效果，但是，其敏感性的高低需要通過科學(xué)嚴謹?shù)脑囼瀬泶_定。藥物的敏感程度需要根據(jù)藥敏試驗的結(jié)果，并結(jié)合以上因素做綜合分析，才能得出科學(xué)的結(jié)論，而片面地根據(jù)藥敏圈的大小來決定敏感與否，結(jié)果就會不夠準確。

其四，就是培養(yǎng)時間。對于水生動物致病菌一般培養(yǎng)溫度和時間為在28℃條件下培養(yǎng)24～48小時為宜，有些抗菌藥擴散速度比較慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的培養(yǎng)基平皿，先放置于4℃冰箱內(nèi)2～4小時，使藥敏片中的抗菌藥預(yù)擴散，然后再放28℃溫箱中培養(yǎng)，這樣就可以推遲細菌的生長，而得到較大的抑菌圈。

表2 水生動物致病菌藥敏試驗的常用藥物及其稀釋液

最后，藥敏試驗后，應(yīng)選擇高敏藥物用于疾病的治療，也可選用兩種藥物協(xié)助使用，以減少耐藥菌株的產(chǎn)生。在選擇高敏藥物時應(yīng)考慮藥物的吸收途徑，因為我們藥敏試驗是藥液直接和細菌接觸，而在給水生動物用藥的時候，必須通過機體的吸收才能使藥物達到一定的效果，所以在實際用藥時，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法，這樣才會達到理想的治療效果。

2）液體培養(yǎng)基稀釋法

該方法適用于需氧及兼性厭氧的快速生長型致病菌，如腸桿菌科、葡萄球菌屬和腸球菌屬；嗜血桿菌屬、奈瑟菌屬、肺炎鏈球菌及其他鏈球菌等菌株，還適用于厭氧菌、酵母樣真菌及支原體等。

根據(jù)每種藥物（根據(jù)藥物的性質(zhì)不同，按照表2的方法進行稀釋）、致病菌種類和感染部位的不同，選擇不同的抗生素濃度稀釋范圍，用M-H肉湯以2n進行倍比稀釋抗菌藥物（如256、128、64、～0.125……）。