杜苑琪,　肖小華,　李攻科

(中山大學(xué)化學(xué)學(xué)院, 廣東 廣州 510275)

衍生化(derivatization)技術(shù)是將待分析物轉(zhuǎn)化為其他更適合物質(zhì)形式以便于分析檢測(cè)的一種有效手段[1]。它可以改變分析物的理化性質(zhì)或增強(qiáng)離子化效率、消除基質(zhì)干擾,提高物質(zhì)分離度,增強(qiáng)檢測(cè)器靈敏度和目標(biāo)物選擇性[2,3],廣泛應(yīng)用于食品、環(huán)境、醫(yī)藥、生物等領(lǐng)域的微痕量分析物高靈敏分析檢測(cè)中。衍生化技術(shù)一般分為柱前、柱后和柱上衍生化等形式,其中柱前衍生化應(yīng)用最廣,又可細(xì)分為萃取前衍生化(pre-extraction derivatization)、萃取后衍生化(post-extraction derivatization)和原位衍生化(in situ derivatization)[3]。

柱上衍生化需要對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行預(yù)處理,將其轉(zhuǎn)變?yōu)檫m合衍生化的形式后在柱上衍生,或需要先對(duì)柱子進(jìn)行衍生化試劑加載等預(yù)處理,步驟繁瑣、限制較多,使用頻率較低。而柱后衍生化雖具有引入的物質(zhì)少、影響因素小的優(yōu)點(diǎn),但可供選擇的反應(yīng)有限,同時(shí)需要額外的儀器設(shè)備,導(dǎo)致了峰展寬、分辨率低等問(wèn)題。相比前兩種衍生化方法,柱前衍生化可選擇的衍生化反應(yīng)和試劑較多,反應(yīng)條件可控,不需要額外設(shè)備,故應(yīng)用最廣。但在柱前衍生化中,無(wú)論萃取前衍生化還是萃取后衍生化,均涉及對(duì)樣品的大量操作以及有機(jī)試劑的消耗,增加了樣品前處理時(shí)間。

原位衍生化將萃取和衍生化過(guò)程在樣品基質(zhì)中同步進(jìn)行,因此耗時(shí)短、效率高,有效地提高了分析方法的靈敏度和選擇性[3]。同時(shí),原位衍生化可以與固相微萃取、液相微萃取等技術(shù)聯(lián)用,減少操作和有機(jī)溶劑的消耗,使樣品前處理技術(shù)向更高效、更環(huán)保的方向發(fā)展。原位衍生化反應(yīng)一般在水介質(zhì)中進(jìn)行,可分析極性小分子或其他難以檢測(cè)的極性物質(zhì);水介質(zhì)下的衍生不僅有助于減少或消除有機(jī)溶劑的使用,而且衍生化產(chǎn)物一般不需要預(yù)提取,減少了操作步驟;與色譜等分析檢測(cè)技術(shù)聯(lián)用易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化和在線化[4]。目前有關(guān)原位衍生化技術(shù)的綜述性文章較少。2013年,Ferreira等[2]綜述了原位衍生化技術(shù)在氣相色譜分析中的應(yīng)用。2016年,Baghdady等[5]重點(diǎn)介紹了原位衍生技術(shù)在增強(qiáng)LC-MS生物分析靈敏度方面的應(yīng)用。國(guó)內(nèi)有關(guān)原位衍生化的綜述尚未見(jiàn)報(bào)道。本文介紹了原位衍生化反應(yīng)類型和代表性衍生試劑,綜述了近年來(lái)原位衍生化技術(shù)在LC和LC-MS分析中的應(yīng)用進(jìn)展。

1　原位衍生化反應(yīng)的類型

原位衍生化反應(yīng)主要分為?；磻?yīng)、硅烷化反應(yīng)、烷基化反應(yīng)、希夫堿反應(yīng)、腙化反應(yīng)和親和反應(yīng),涉及胺類、醛酮類、醇類、酚類、羧酸和巰基化合物。表1列舉了原位衍生化反應(yīng)類型及其常用試劑。

?；磻?yīng)一般在堿性條件下進(jìn)行,溫度適中、時(shí)間較短、產(chǎn)量高且試劑成本低,羥基、羧基或氨基化合物的衍生化反應(yīng)多屬于此類反應(yīng)。該衍生物具有生色基團(tuán),可以增加LC-UV或LC-FLD的檢測(cè)靈敏度;或提供更多的離子化質(zhì)譜信息,從而增強(qiáng)LC-MS的檢測(cè)靈敏度。一般而言,酰氯類試劑的普適性較好,可以與胺類、醇類、酚類或者羧酸等多類物質(zhì)反應(yīng);而酸類、酯類等衍生化試劑的專屬性相對(duì)較好,僅與羥基化合物或羧酸類物質(zhì)等一類物質(zhì)反應(yīng)。這些衍生化反應(yīng)需要注意試劑的水解、衍生化產(chǎn)物不穩(wěn)定等問(wèn)題,借助液-液微萃取[9]等方法,可以將衍生物從水溶液中分離以提高產(chǎn)物的穩(wěn)定性。

硅烷化反應(yīng)是有機(jī)物的活潑氫與硅烷化試劑的反應(yīng),因硅烷化試劑在水中穩(wěn)定性差,應(yīng)用較少。但結(jié)合分散液-液微萃取(dispersive liquid-liquid microextraction, DLLME)等技術(shù),可以使衍生物的提取速度比分解速度快,從而緩解穩(wěn)定性差的問(wèn)題,拓展其應(yīng)用范圍。

烷基化反應(yīng)是在有機(jī)分子中的C、N、O、P或S等原子上引入烴基或取代烴基的反應(yīng),常用于醇類、酚類和巰基化合物的衍生化。以巰基化合物為例,烷基化反應(yīng)增加了巰基化合物的穩(wěn)定性[45],對(duì)這些不穩(wěn)定物質(zhì)的分析有重要意義。

希夫堿反應(yīng)主要應(yīng)用于胺類物質(zhì)的衍生化檢測(cè),其衍生化試劑多為醛類試劑,代表性試劑為鄰苯二甲醛(OPA)[47]和2,3-萘二甲醛(NDA)[50]。該類反應(yīng)靈敏且迅速,可在室溫進(jìn)行,但反應(yīng)產(chǎn)物不穩(wěn)定,需盡快測(cè)定。結(jié)合衍生化與萃取技術(shù)可改善產(chǎn)物不穩(wěn)定的缺點(diǎn),尤其是開(kāi)發(fā)自動(dòng)進(jìn)樣器的在線自動(dòng)衍生化方法,如OPA在線衍生化檢測(cè)氨基酸[48],將有效降低產(chǎn)物不穩(wěn)定性對(duì)分析靈敏度的影響。

腙化反應(yīng)廣泛應(yīng)用于醛類、酮類和部分羧酸類化合物的衍生化檢測(cè)。相比其他反應(yīng),腙化反應(yīng)的衍生化試劑和產(chǎn)物在水溶液中較為穩(wěn)定,但反應(yīng)需要一定的溫度,時(shí)間較長(zhǎng)。

相比其他衍生化反應(yīng),親和反應(yīng)較為少見(jiàn),但它可以增加質(zhì)譜檢測(cè)的靈敏度,提高峰容量,有利于離子峰的確認(rèn),對(duì)酸性和兩性物質(zhì)的選擇性檢測(cè)具有優(yōu)勢(shì)。以酸性和兩性神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)的檢測(cè)為例,苯甲?；偷；苌ǖ年?yáng)離子模式質(zhì)譜檢測(cè)靈敏度較低,出現(xiàn)峰形畸變、保留力弱、低峰容量等問(wèn)題。而Lee等[58]利用甲醇進(jìn)行親和反應(yīng)后產(chǎn)生特定的正離子,不需要檢測(cè)模式的極性切換,即可對(duì)酸性和兩性離子神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行選擇性衍生化檢測(cè)。

2　原位衍生化技術(shù)在液相色譜和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析中的應(yīng)用

原位衍生化技術(shù)在生物、食物、藥物、環(huán)境和化妝品等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。根據(jù)樣品基體、待分析物的特點(diǎn)和檢測(cè)需要,可以選擇合適的衍生化試劑進(jìn)行反應(yīng),將待分析物轉(zhuǎn)化成易于分析檢測(cè)的化合物。原位衍生化技術(shù)和液液萃取、固相萃取等前處理技術(shù)結(jié)合,可以提高衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性,縮短分析時(shí)間、提高檢測(cè)靈敏度。

2.1　生物樣品分析

生物樣品包括各種體液和組織,血漿和血清是最常見(jiàn)的生物樣品。使用離線或在線原位衍生復(fù)雜基質(zhì)中的胺類、醇類、酚類、羧酸類、醛酮類和巰基化合物,不僅減少了樣品制備步驟,提高了萃取富集效率;同時(shí)增強(qiáng)了LC-MS穩(wěn)定性,具有更好的色譜分離效果和選擇性。

由于建筑施工單位普遍追求經(jīng)濟(jì)利益和施工進(jìn)度，施工單位大多并不按照建筑規(guī)范進(jìn)行施工，致使工程的技術(shù)管理無(wú)法達(dá)標(biāo)，施工質(zhì)量問(wèn)題頻頻出現(xiàn)，且無(wú)法在第一時(shí)間得以解決[3]。建筑施工技術(shù)管理問(wèn)題受到多方面影響，其中施工技術(shù)管理體制不完善起到重要作用，在施工建設(shè)中施工單位沒(méi)嚴(yán)格執(zhí)行建筑規(guī)范及相關(guān)法律法規(guī)，在工程施工中經(jīng)常出現(xiàn)違規(guī)操作，并且出現(xiàn)問(wèn)題無(wú)法及時(shí)處理。在很大程度上增加了建筑施工管理人員與施工人員的矛盾，導(dǎo)致建筑工程開(kāi)展受阻。

2.1.1胺類化合物

胺類物質(zhì)無(wú)紫外和熒光響應(yīng),采用液-液微萃取或固相微萃取的原位衍生化是分析胺類藥物和氨基酸類化合物的有效手段。鹽酸美金剛是治療中度到重度的帕金森病和阿爾茨海默病的常用藥物,Jing等[8]將丹磺酰氯(Dns-Cl)原位衍生化法和中空纖維液相微萃取結(jié)合,建立了人血漿中痕量鹽酸美金剛含量測(cè)定的高效液相色譜-熒光檢測(cè)方法。結(jié)果表明,衍生化和微萃取結(jié)合加速了萃取的傳質(zhì)過(guò)程,提高了分析方法的靈敏度,定量限為0.3 ng/mL。通過(guò)將濁點(diǎn)萃取法和OPA柱前衍生法結(jié)合,Pourghobadi等[49]開(kāi)發(fā)了人血漿樣品中胺類抗癲癇藥物加巴噴丁的高效液相色譜-紫外檢測(cè)方法。在3-巰基丙酸存在下,分別以O(shè)PA和聚乙二醇辛基苯基醚為衍生化試劑和萃取溶劑,回收率為94.5%～98.7%。該法具有低成本、安全、富集能力高、回收率高的優(yōu)點(diǎn)。Shamsipur等[26]基于氯甲酸異丁酯衍生法和分散液液微萃取技術(shù),進(jìn)行了人尿液樣品中包括肌氨酸、丙氨酸、亮氨酸和脯氨酸在內(nèi)的前列腺癌代謝標(biāo)志物的LC-MS檢測(cè)。萃取和衍生的過(guò)程可以在5 min內(nèi)完成,富集因子和回收率分別為140～155和93.8%～106%,方法快速簡(jiǎn)單、選擇性高、富集效果好。

新型原位衍生化試劑的開(kāi)發(fā)拓寬了原位衍生化的應(yīng)用。1,2-苯并-3,4-二氫咔唑-9-乙基氯甲酸(BCEOC)是You等[33]首次合成的新型熒光衍生化試劑,可快速標(biāo)記肽和氨基酸,時(shí)間短并且衍生物穩(wěn)定。Zhao等[34]將BCEOC應(yīng)用于同時(shí)衍生化大鼠腦漿中的谷氨酸、γ-氨基丁酸、多巴胺、5-羥色胺和5-羥基吲哚乙酸,建立了高效靈敏的HPLC-FLD方法。該方法靈敏度高,檢出限為0.398～1.258 nmol。

2.1.2羥基化合物

羥基化合物的衍生化反應(yīng)時(shí)間短,產(chǎn)量高且試劑成本低,應(yīng)用于血液中激素和藥物含量的檢測(cè)。Maas等[16]采用1,2-二甲基咪唑-4-磺酰氯(DMISC)衍生化人血清中的麻醉劑異丙酚,將其轉(zhuǎn)化為DMISC衍生物后進(jìn)行LC-MS/MS分析,實(shí)現(xiàn)電離和斷裂的改善,提高了檢測(cè)靈敏度,檢出限為0.95 ng/mL。Xu等[17]結(jié)合了酶水解、固相萃取和DMISC衍生化技術(shù),在10 min內(nèi)完成衍生化,并利用LC-MS/MS進(jìn)行生物標(biāo)志物1-羥基芘的監(jiān)測(cè)分析?；谶拎ぜ姿嵫苌?Zang等[36]開(kāi)發(fā)了同時(shí)檢測(cè)九個(gè)羥基雄激素及其在人血清中的綴合物的LC-MS/MS方法。衍生物吡啶甲酸酯的生成改善質(zhì)子親和力,減少基質(zhì)干擾,改善了電離效率,檢出限為1.0～2.5 ng/dL。該方法被應(yīng)用于研究雄激素二醇在雄激素生物合成中的作用和前列腺癌的診斷和治療效果追蹤。

2.1.3羧酸類化合物

酸類物質(zhì)的衍生化檢測(cè)較為少見(jiàn)。4-[2-(N,N-二乙基氨基)乙基氨基磺酰基]-7-(2-氨基乙基氨基)-2,1,3-苯并惡二唑(DAABD-AE)是Santa等[18]開(kāi)發(fā)的新型衍生化試劑,其衍生物具有高質(zhì)子親和力,可提供特征性離子質(zhì)譜信息。該課題組將DAABD-AE試劑成功應(yīng)用于血漿中降植烷酸、植烷酸和二十六酸等長(zhǎng)鏈脂肪酸[19]的LC-MS/MS分析,利用DAABD-AE對(duì)血漿的分析物進(jìn)行水解、提取和衍生化,以診斷戊二酸血癥和過(guò)氧化物酶體紊亂。

醛類和酮類的衍生化反應(yīng)屬于腙化反應(yīng),其檢測(cè)常與固相萃取結(jié)合。目前已開(kāi)發(fā)研制出各類新型固相萃取材料,被應(yīng)用于癌癥標(biāo)記物的檢測(cè)上。Liu等[51]合成了Fe3O4/SiO2/聚(甲基丙烯酸-co-乙二醇二甲基丙烯酸酯)磁固相萃取材料,建立了人尿中的內(nèi)源性己醛和庚醛的磁固相萃取-原位衍生-HPLC-UV測(cè)定方法。衍生化試劑DNPH吸附在材料表面后,在9 min內(nèi)完成己醛和庚醛的萃取和衍生,檢出限分別為1.7 nmol/L和2.5 nmol/L。該方法已成功應(yīng)用于測(cè)定健康人和肺癌患者尿液中內(nèi)源性的己醛和庚醛。Wu等[52]合成了天然無(wú)毒的聚多巴胺/雙醛淀粉/殼聚糖(PD/DAS/CHI)材料,并固定在聚四氟乙烯管的內(nèi)壁上。結(jié)合DNPH衍生化和管內(nèi)固相微萃取,開(kāi)發(fā)了檢測(cè)人體血液中的兩種肝癌生物標(biāo)志物己醛和2-丁酮的高效液相色譜方法。該方法在11 min內(nèi)完成衍生和富集,具有簡(jiǎn)單、快速和靈敏的優(yōu)點(diǎn),可應(yīng)用于肝癌的篩查。

2.1.5巰基化合物

巰基化合物不穩(wěn)定,易氧化,紫外、熒光或質(zhì)譜信號(hào)較差。衍生化可固定巰基,提高檢測(cè)靈敏度,改善分析方法的選擇性[60]。原位衍生化技術(shù)已廣泛應(yīng)用于巰基生物樣品的分析檢測(cè)。Takahashi等[45]開(kāi)發(fā)了檢測(cè)人血漿中氯吡格雷(一種血小板聚集抑制劑)代謝物的LC-MS/MS方法,固相萃取和衍生化的結(jié)合穩(wěn)定了血液中巰基代謝產(chǎn)物,防止了樣品基質(zhì)對(duì)檢測(cè)的干擾。檢測(cè)的范圍為0.5～250 ng/mL,線性良好。Mompelat等[46]建立分析家禽肌肉、腎臟和血漿中頭孢噻呋的LC-MS方法,在碘乙酰胺衍生化后采用固相萃取進(jìn)行富集,方法選擇性和特異性高,檢出限為30.3 μg/kg。

2.2　食品分析

食品基體復(fù)雜,待分析物的種類繁多,基質(zhì)干擾嚴(yán)重。食品樣品的制備、高效提取與凈化是主要的技術(shù)難點(diǎn)[61]。原位衍生化技術(shù)與前處理技術(shù)的結(jié)合,能簡(jiǎn)化樣品制備和分析步驟,增加萃取效果,增強(qiáng)物質(zhì)的檢測(cè)信號(hào),降低基質(zhì)對(duì)分析的干擾。

生物胺是一類具有生物活性、含氨基的低分子質(zhì)量化合物。大多數(shù)食品中都含有生物胺,主要由微生物氨基酸脫竣酶作用于氨基酸脫羧而生成[62],其過(guò)量攝入會(huì)使人體產(chǎn)生不良反應(yīng)。結(jié)合Dns-Cl原位衍生化和中空纖維液相微萃取,Saaid等[6]利用HPLC-UV檢測(cè)蝦醬和番茄醬樣品中的色胺、腐胺、尸胺、組胺、酪胺和亞精胺6種生物胺。該方法簡(jiǎn)單,萃取使用的有機(jī)溶劑少,富集因子為47～456。Fu等[10]結(jié)合快速提取和苯甲酰氯衍生化,建立了檢測(cè)魚(yú)肉中生物胺的超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜方法。該方法10 min即可獲得穩(wěn)定的生物胺衍生物,檢出限達(dá)到pg/mL水平。結(jié)合液相微萃取和苯甲酰氯衍生化,Jia等[11]開(kāi)發(fā)了測(cè)定白葡萄酒、紅酒、米酒和啤酒4種酒精飲品中生物胺的HPLC-UV方法。該方法綠色環(huán)保、成本低,檢出限為0.005～0.01 μg/mL。

食品中氨基酸含量分析也是熱點(diǎn)之一。Kwanyuen等[27]使用苯異硫氰酸酯(PITC)衍生化氨基酸,開(kāi)發(fā)了測(cè)定大豆氨基酸含量的HPLC-UV方法。與其他方法相比,具有簡(jiǎn)便成本低、自動(dòng)分析,大批量處理的優(yōu)點(diǎn)。芮鴻飛等[28]采用PITC衍生化測(cè)定黃酒中17種氨基酸和7種生物胺的含量,氨基酸和生物胺的線性范圍分別為2.0～500 mg/L和0.5～125 mg/L。該方法線性范圍廣、準(zhǔn)確性高、穩(wěn)定性好。

高氨基酸含量對(duì)其他胺類物質(zhì)的檢測(cè)造成一定干擾,原位衍生化技術(shù)與液-液微萃取的結(jié)合可解決此問(wèn)題。Chang等[47]將OPA原位衍生化和微萃取技術(shù)結(jié)合,用于測(cè)定高氨基酸含量的牛奶、啤酒等樣品中C1～C8直鏈脂肪族伯胺的含量,并采用渦旋輔助液-液微萃取(vortex-assisted liquid-liquid microextraction, VALLME)富集衍生物,檢出限為0.09～0.31 nmol。

2.3　藥物分析

藥物分析涉及藥物研發(fā)、藥物代謝、藥品質(zhì)量控制和藥物制劑分析等領(lǐng)域[63]。藥物的分子結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜,衍生化后增加分析物的質(zhì)子親和力,提高目標(biāo)物的離子化效率,產(chǎn)生特征離子產(chǎn)物,可以提高檢測(cè)靈敏度。Jalalizadeh等[21]采用2,4-二硝基氟苯(FDNB)衍生化測(cè)定粉末狀片劑樣品中鹽酸美金剛,方法檢測(cè)限為0.2 μg/mL,比9-氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)法更低,靈敏度更高。Lacroix等[12]采用4-二甲氨基偶氮苯-4′-磺酰氯(DABS-Cl)衍生化大麻素,其衍生物在正電噴霧模式下易質(zhì)子化,使信號(hào)強(qiáng)度增強(qiáng),顯著改善了檢測(cè)靈敏度,定量限為0.25～0.80 ng/mL。Michail等[54]將可溶性碳二亞胺耦合劑和2-硝基苯肼衍生化應(yīng)用于定量在藥物中的甲氨蝶呤和吲哚美辛,檢出限分為0.08 μg/mL和0.03 μg/mL。

2.4　環(huán)境分析

原位衍生化技術(shù)與液相微萃取方法或者固相萃取結(jié)合,提高對(duì)水體等環(huán)境樣品中目標(biāo)物的富集萃取效果,增強(qiáng)檢測(cè)的靈敏度,對(duì)水體污染物的監(jiān)測(cè)有重要意義。Wang等[50]開(kāi)發(fā)了測(cè)定瓶裝水、自來(lái)水和湖泊樣品中的痕量直鏈脂肪族伯胺的HPLC-FLD方法。在氰化物存在下,NDA衍生化脂肪族伯胺,同時(shí)采用VALLME方法富集衍生化產(chǎn)物。王曉燕等[30]采用DLLME衍生化與HPLC-FLD結(jié)合,實(shí)現(xiàn)了對(duì)環(huán)境水樣中4種酚類內(nèi)分泌干擾物的測(cè)定。方法快速高效、條件溫和、靈敏度高,約5 min能完成整個(gè)富集與衍生過(guò)程,檢出限低至0.01～0.04 nmol/L。相比OPA法,該方法熒光衍生物更穩(wěn)定、信號(hào)更強(qiáng),且富集能力更強(qiáng),富集因子為2～70。Yu等[43]開(kāi)發(fā)了測(cè)定河水中除草劑苯噻草胺及其3種代謝產(chǎn)物的LC-MS方法。該方法將N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺(MSTFA)衍生化和固相萃取結(jié)合,回收率為78.6%～101.2%,精密度好、選擇性高,有效監(jiān)測(cè)環(huán)境水體中苯噻草胺代謝產(chǎn)物殘留。

2.5　化妝品分析

化妝品是現(xiàn)代人生活的必需品之一,因其與人體皮膚直接接觸,化妝品的安全性問(wèn)題被關(guān)注。化妝品添加的重金屬、防腐劑、防曬劑、染色劑和激素等對(duì)人體健康具有潛在危害[64]。原位衍生化技術(shù)在化妝品分析檢測(cè)上,具有提高萃取效果和維持衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性的作用,已應(yīng)用于化妝品中的限用、禁用物質(zhì)的檢測(cè)?；谀z束提取和Dsn-Cl原位衍生化方法,Li等[7]開(kāi)發(fā)了檢測(cè)化妝品中的痕量二乙醇胺的HPLC-UV方法。衍生化、萃取和濃縮可在10 min內(nèi)完成,方法快速、簡(jiǎn)單有效、環(huán)保。Miralles等[9]采用苯甲酰氯衍生化苯乙醇、甲基丙二醇、苯丙醇,辛酰二醇和乙基己基甘油等5種化妝品防腐劑,并結(jié)合渦旋輔助液-液半微萃取(vortex-assisted liquid-liquid semimicroextraction, VALLsME),開(kāi)發(fā)了檢測(cè)5種防腐劑的HPLC-UV方法。采用VALLsME提高了衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性,對(duì)控制化妝品質(zhì)量有重要意義。呂春華等[53]建立了化妝品中游離甲醛的柱前衍生化-萃取阻斷反應(yīng)-HPLC測(cè)定方法。采用2,4-二硝基苯肼(DNPH)乙腈溶液-磷酸鹽緩沖液作為化妝品的提取溶液,快速衍生2 min后立即加入二氯甲烷萃取,阻斷衍生反應(yīng),有效避免甲醛緩釋劑類防腐劑分解釋放甲醛造成的干擾。該方法快速、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好,定量限為50 μg/g。

2.6　其他分析

對(duì)映異構(gòu)體的手性鑒別已經(jīng)成為分析化學(xué)領(lǐng)域,特別是藥品、食品分析以及臨床、法醫(yī)分析的熱點(diǎn)。手性衍生化法不需專門(mén)的手性色譜分離,衍生化時(shí)間可短至10 min,且相對(duì)安全。手性原位衍生化多使用Marfey試劑與胺類化合物上發(fā)生反應(yīng)。Marfey試劑已被用于測(cè)定尿、口服液等樣品中苯丙胺類化合物的對(duì)映體組成[39]。Shu等[40]利用Marfey衍生化技術(shù),建立了測(cè)定頭發(fā)樣品中甲基苯丙胺的對(duì)映體組成的非手性的LC-MS/MS方法。該方法不需要定量每種對(duì)映異構(gòu)體,線性范圍為80～18 000 pg/mg,相關(guān)性好,可應(yīng)用于甲基苯丙胺陽(yáng)性病例的確認(rèn)。Nakanishi等[41]開(kāi)發(fā)了測(cè)定尿液中藥物3,4-亞甲二氧基甲基安非他明及其代謝產(chǎn)物對(duì)映異構(gòu)體的LC-MS/MS方法。該方法簡(jiǎn)單溫和、無(wú)需萃取,衍生化反應(yīng)30 min后可直接進(jìn)樣分析。劉浩等[42]利用非手性HPLC系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)達(dá)托霉素中8種手性氨基酸的D, L-構(gòu)型的分離測(cè)定,各氨基酸衍生物、FDAA以及反應(yīng)副產(chǎn)物之間均可得到有效分離。

3　結(jié)論與展望

本文總結(jié)了原位衍生化反應(yīng)類型和代表性衍生試劑,綜述了原位衍生化技術(shù)在液相色譜和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析中的應(yīng)用進(jìn)展。作為一種常用的柱前衍生化方法,原位衍生化可在樣品基質(zhì)中同時(shí)完成分析物的萃取和衍生化,具有高效、靈敏和選擇性好的優(yōu)點(diǎn)。近年來(lái),原位衍生化結(jié)合前處理技術(shù)廣泛用于胺類、醛酮類、醇類、酚類、羧酸和巰基化合物分析中,在生物、藥物、食品、環(huán)境、化妝品分析等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。

然而在原位衍生化過(guò)程中,為了使衍生化產(chǎn)率最大化,需大量或過(guò)量使用衍生化試劑,樣品中的反應(yīng)性基質(zhì)也干擾了衍生化過(guò)程,降低衍生化反應(yīng)的產(chǎn)率。故原位衍生化要求衍生化試劑能以高濃度加入而不引起顯著性的離子抑制,并且對(duì)目標(biāo)分析物有高選擇性、選擇性和抗基質(zhì)干擾力。此外,部分衍生化試劑能與水反應(yīng)或分解,導(dǎo)致在分析過(guò)程出現(xiàn)較大的干擾峰;部分衍生化試劑的衍生化產(chǎn)物不穩(wěn)定,也增加了分析難度,帶來(lái)了分析誤差。故原位衍生化要求衍生化試劑能在水溶液中穩(wěn)定存在,可通過(guò)與液液微萃取等技術(shù)的結(jié)合,改善或增強(qiáng)衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性,縮短了前處理的時(shí)間。但原位衍生化與萃取結(jié)合的相關(guān)技術(shù)仍涉及有機(jī)溶劑的使用,將有機(jī)溶劑用量最小化,甚至不使用有機(jī)溶劑顯得尤為重要。現(xiàn)階段已有在線原位衍生化技術(shù)的報(bào)道[59],實(shí)現(xiàn)了在線自動(dòng)化分析,但對(duì)衍生萃取富集過(guò)程的設(shè)計(jì)提出了較高要求,仍未能廣泛推廣。因此選擇性和靈敏度高的新型衍生化試劑的研制、與更有效快速、環(huán)保的前處理技術(shù)的結(jié)合和在線衍生化方法與儀器的研究是重要的發(fā)展方向。