梁榮珍　王太成

[摘要] 目的 探討生長分化因子-15（GDF-15）基因rs1058587多態(tài)性與急性心肌梗死（AMI）的關(guān)系。 方法 選取2016年3月～2017年1月海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科確診AMI患者120例為AMI組，同期選取健康對象120例為健康組。采用聚合酶鏈反應(yīng)PCR技術(shù)檢測兩組的GDF-15基因rs1058587位點(diǎn)基因型、等位基因頻率，并探討其與患者并發(fā)AMI的關(guān)系。 結(jié)果 AMI組的GDF-15基因rs1058587位點(diǎn)的CC、CG、GG基因型與健康組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；AMI組的GDF-15基因rs1058587位點(diǎn)等位基因G頻率顯著高于健康組（P < 0.05）；采用多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示：高密度脂蛋白膽固醇降低、低密度脂蛋白膽固醇升高、血清脂蛋白（a）升高、尿微量白蛋升高、GDF-15基因rs1058587位點(diǎn)的等位基因G是并發(fā)AMI的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P < 0.05）。 結(jié)論 GDF-15基因rs1058587多態(tài)性與人群發(fā)生AMI具有密切的關(guān)系。

[關(guān)鍵詞] 生長分化因子-15基因；rs1058587位點(diǎn)；急性心肌梗死

[中圖分類號] R541.4 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）04（b）-0067-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between rs1058587 polymorphism of GDF-15 gene and acute myocardial infarction （AMI）. Methods From January 2016 to January 2017， 120 patients with AMI of Cardiovascular Medicine Department in the Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University were selected as AMI group. In the same period， 120 healthy subjects were selected as health group. The two groups were used by polymerase chain reaction PCR GDF-15 gene rs1058587 locus genotypes， allele frequencies， and explore its relationship with patients with concurrent AMI. Results The genotypes of CC， CG and GG at rs1058587 of GDF-15 gene in AMI group were compared with health group， the difference was statistically significant （P < 0.05）. The frequency of G allele of rs1058587 in GDF-15 gene in AMI group was higher than health group （P < 0.05）. The results of Logistic multifactor regression analysis showed that the decrease of high-density lipoprotein cholesterol and the rise of Low density lipoprotein cholesterol， serum lipoprotein （a）， minim white egg， the allele G at rs1058587 in GDF-15 gene were the independent risk factor for concurrent AMI （P < 0.05）. Conclusion Rs1058587 polymorphism of GDF-15 gene is closely related to AMI occurrence in population.

[Key words] Growth-differentiation factor-15 gene； Rs1058587 locus； Acute myocardial infarction

近年來我國冠心病等心血管疾病發(fā)病率常處于高位，冠心病患者常伴發(fā)急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI），AMI是冠心病的一種急性事件，患者常出現(xiàn)冠脈血流閉塞。有研究發(fā)現(xiàn)AMI患者側(cè)支血管形成對心?；颊撸ㄌ貏e是發(fā)病4～12 h的AMI患者）的梗死面積大小具有明顯的調(diào)節(jié)作用，此外側(cè)枝循環(huán)的完善對于保持AMI相關(guān)區(qū)域心肌的活性，保護(hù)心肌功能，改善患者的臨床預(yù)后具有重要作用[1]。故而，探尋AMI時(shí)側(cè)枝循環(huán)的形成相關(guān)因子研究已成為目前臨床和生物學(xué)研究的重要方向。

最新的資料顯示，AMI患者血清生長分化因子-15（growth differentiation factor-15，GDF-15）可出現(xiàn)明顯升高[2]。GDF-15是重要的心血管系統(tǒng)保護(hù)因子可參與側(cè)枝血管循環(huán)的建立過程，其形成主要受GDF-15基因的調(diào)節(jié)作用，GDF-15基因在應(yīng)激條件下被誘導(dǎo)表達(dá)并在人體內(nèi)執(zhí)行廣泛的保護(hù)功能，而人群GDF-15的生物學(xué)活性和表達(dá)水平存在差異，并與疾病的發(fā)生、嚴(yán)重程度和預(yù)后具有明顯相關(guān)性[3]。本研究深入探討了GDF-15基因rs1058587多態(tài)性與AMI的關(guān)系，旨在為AMI患者的預(yù)防和預(yù)后提供新的思路。現(xiàn)將報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2016年3月～2017年1月海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科確診AMI患者120例為AMI組，同期選取健康對象120例為健康組。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者年齡≤79歲；②符合冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)心血管病分會(huì)制訂的《冠心病診斷與治療指南》2014年版中的標(biāo)準(zhǔn)[4]；③冠脈造影檢查確診患者病情；④健康對象為體檢結(jié)果健康的自愿者；⑤本研究納入對象均為海南省?？谑斜镜貪h族人群；⑥本研究獲得患者及家屬的知情同意，以及醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肺、肝、腎功能障礙；②合并凝血功能障礙性疾病；③患者結(jié)締組織疾病、免疫性疾?。虎馨橛袗盒阅[瘤或具有放化療史；⑤心肌病、心瓣膜病史。

1.3 方法

參考梁振洋等[5]具體序列和擴(kuò)增條件設(shè)計(jì)GDF-15基因引物，上有引物：CTTGCTGTGTGACCCCCTA？鄄GT；下游引物：GTTCCAGACCTTCTCCTTAATGG。擴(kuò)增體系：DNA模板1 μL，10*Buffer 1.5 μL，MgCL21.5 μL，dNTP0.3 μL，上下游引文0.15 μL混合，0.3 μLTaq酶，補(bǔ)水至15 μL。擴(kuò)增條件：3 min，94℃；15 s，94℃；15 s，54℃；30 s，72℃，共計(jì)35個(gè)循環(huán)，結(jié)束后立即冰浴測序。

1.4 觀察指標(biāo)

取所有患者清晨靜脈血5 mL，離心后取血清，全自動(dòng)生化分析儀檢測對比兩組的血清脂蛋白（a）[Lp（a）]、尿微量白蛋白（MAU）、血清膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、空腹血糖（FPG）水平。全自動(dòng)血壓計(jì)（東軟熙康公司生產(chǎn)）檢測患者收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）的水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；多因素分析采用Logistic回歸分析法，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象的GDF-15基因rs1058587多態(tài)性比較

AMI組的GDF-15基因rs1058587位點(diǎn)的CC、CG、GG基因型與健康組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；AMI組的GDF-15基因rs1058587位點(diǎn)等位基因G頻率顯著高于健康組（P < 0.05）。見表1。

2.2 兩組研究對象一般資料比較

AMI組的年齡、性別、BMI、吸煙、TC、TG、FPG、血肌酐、尿酸、SBP、DBP與健康組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；AMI組的Lp（a）、MAU、LDL-C高于健康組（P < 0.05），HDL-C低于健康組（P < 0.05）。見表2。

2.3 并發(fā)AMI多因素分析

采用多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示：以是否發(fā)生AMI作為因變量，血清HDL-C、LDL-C、Lp（a）、MAU水平GDF-15等位基因（等位基因C=0、等位基因G=1）作為自變量，HDL-C降低、LDL-C升高、Lp（a）升高、MAU升高、GDF-15基因rs1058587位點(diǎn)的等位基因G是并發(fā)AMI的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P < 0.05）。見表3。

3 討論

AMI大多是在冠狀動(dòng)脈病變的基礎(chǔ)上發(fā)病是急性心肌缺血性壞死，主要由冠狀動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊糜爛、破裂而繼發(fā)形成血栓導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈血供急劇減少甚至中斷，相應(yīng)的心肌出現(xiàn)急性、嚴(yán)重的缺血而壞死[6-7]。AMI的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，主要有胸骨后持續(xù)性劇烈疼痛、心律失常、休克或心力衰竭等癥狀。冠心病患者絕大多數(shù)都存在患病危險(xiǎn)因素，但部分患者雖然有同等的危險(xiǎn)因素但并不罹患冠心病，部分冠心病患者雖然冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重，甚至逐漸發(fā)展成缺血性心肌病，但并不伴發(fā)AMI，對其原因的研究目前國內(nèi)較為缺乏[7-8]。

GDF-15是一類重要的生長分化因子，在心臟急性缺血、心肌肥厚、缺血再灌注損傷和心力衰竭等病理過程中可出現(xiàn)GDF-15快速升高，故而推測其參與心臟疾病的演變過程[9-10]。GDF-15屬于心血管系統(tǒng)的一種保護(hù)性因子，最新的文獻(xiàn)報(bào)道顯示，心臟疾病的預(yù)后與血清GDF-15升高存在密切相關(guān)性，其形成主要受GDF-15基因的調(diào)節(jié)作用，GDF-15基因在應(yīng)激條件下被誘導(dǎo)表達(dá)并在人體內(nèi)執(zhí)行廣泛的保護(hù)功能，而人群GDF-15的生物學(xué)活性和表達(dá)水平存在差異，并與疾病的發(fā)生、嚴(yán)重程度和預(yù)后具有明顯相關(guān)性[11-12]。

通過基因多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)，GDF-15基因中存在多個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點(diǎn)，但其中多數(shù)為無義SNP，只有外顯子中rsl058587、rsl059519、rSl059369位點(diǎn)對GDF-15前體蛋白的氨基酸序列的改變發(fā)揮重要作用[13-14]。其中rsl058587位點(diǎn)可改變GDF-15成熟蛋白的氨基酸序列，進(jìn)而改變GDF-15的穩(wěn)定性和蛋白活性[15-16]。本研究也深入探討了GDF-15基因rs1058587多態(tài)性與AMI的關(guān)系，旨在為AMI患者的預(yù)防和預(yù)后提供新的思路。

本研究結(jié)果提示，AMI組的GDF-15基因rs105 8587位點(diǎn)的CC、CG、GG基因型與健康組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；AMI組的GDF-15基因rs105 8587位點(diǎn)等位基因G頻率顯著高于健康組（P < 0.05）。上述結(jié)果可推測AMIGDF-15基因rs1058587位點(diǎn)與AMI發(fā)病具有重要關(guān)系，基因G可能是可能是AMI患者的危險(xiǎn)基因，其影響了GDF-15的轉(zhuǎn)錄表達(dá)活性或者蛋白的穩(wěn)定性，通過增加GDF-15的轉(zhuǎn)錄表達(dá)活性或者提高GDF-15蛋白的穩(wěn)定性來起到保護(hù)的作用。本研究多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示：HDL-C降低、LDL-C升高、Lp（a）升高、MAU升高、GDF-15基因rs1058587位點(diǎn)的等位基因G是并發(fā)AMI的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P < 0.05），上述結(jié)果提示GDF-15基因rs105 8587多態(tài)性與人群發(fā)生AMI具有密切的關(guān)系，GDF-15基因rs1058587多態(tài)性檢測可作為AMI病情發(fā)展和預(yù)后的重要指標(biāo)。

流行病學(xué)研究結(jié)果提示，rs1058587多態(tài)性不僅與左心室肥厚相關(guān)，而且與GDF-15的循環(huán)水平亦存在明顯相關(guān)性[17-18]。相關(guān)的研究發(fā)現(xiàn)GDF-15作為多種應(yīng)激下被誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白，很少參加疾病的發(fā)生過程，而是更多地參與了疾病發(fā)生后的損傷修復(fù)過程，因而疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后與GDF-15的循環(huán)水平存在顯著的相關(guān)性[19-20]。所以，基因分型聯(lián)合GDF-15水平的動(dòng)態(tài)變化作為心血管疾病的評估工具是心血管疾病領(lǐng)域的一類新方法，應(yīng)用前景較為廣闊。

綜上所述，GDF-15基因rs1058587多態(tài)性與人群發(fā)生AMI具有密切的關(guān)系，值得在臨床上推廣并深入研究。

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（收稿日期：2017-12-08 本文編輯：萬 平）