高東奇 李青山 張晶晶 李富博 白璐

承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院南院腫瘤科（河北承德 067000）

肺癌是全世界常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其總的發(fā)病率和死亡率居惡性腫瘤首位，并呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康［1-2］。臨床上對(duì)肺部疾病患者一般進(jìn)行影像學(xué)檢查，雖然能夠?qū)Ψ尾考膊〉脑\斷提供重要參考，但對(duì)于區(qū)分肺癌和肺良性疾病存在局限，主要是由于肺癌與肺良性疾病的早期癥狀相似，這導(dǎo)致肺癌早期診斷率較低，使患者錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)，致使肺癌患者預(yù)后不佳、死亡率升高等，故肺癌的早期診斷具有重要意義［3］。肺癌血清生物標(biāo)志物檢查是一種有效的肺癌早期診斷手段，該方法具有簡(jiǎn)單、快速、無(wú)創(chuàng)、低成本等優(yōu)點(diǎn)，但傳統(tǒng)標(biāo)志物的靈敏度和特異性存在一定局限［4］，因此尋找新的標(biāo)志物對(duì)于提高腫瘤診斷的敏感性具有極其重要的提示作用。血清骨橋蛋白（osteopontin，OPN）作為一類(lèi)具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，存在于不同的組織和細(xì)胞中，其在細(xì)胞趨化、黏附和遷移、免疫調(diào)節(jié)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、抑制細(xì)胞凋亡等過(guò)程中均發(fā)揮重要作用；細(xì)胞質(zhì)胸腺激酶（cytoplasm thymidine kinase，TK1）是DNA前體物質(zhì)合成的限速酶之一，可催化胸腺嘧啶核苷轉(zhuǎn)變成單磷酸胸腺嘧啶，與細(xì)胞增殖生長(zhǎng)有著密切的聯(lián)系；DKK1（Dickkopf?1，DKK1）已經(jīng)證實(shí)在肺癌、大腸癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌等多種腫瘤組織以及血清樣本中異常表達(dá)。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和免疫印跡增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)不同人群中血清中OPN、TK1和DKK1含量，并采用Logistic回歸和受試者工作特征曲線（ROC曲線）評(píng)價(jià)血清OPN、TK1和DKK1單獨(dú)或聯(lián)合檢測(cè)在肺癌早期診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值，及其區(qū)分肺良性疾病和肺癌的潛在價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2014年7月至2016年7月收治的80例肺癌患者（肺癌組）作為研究對(duì)象，所有肺癌患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，另選取80例肺良性疾病患者（肺良性疾病組）和60例健康人群（健康對(duì)照組）作為研究對(duì)象，所有研究對(duì)象均排除其他類(lèi)型腫瘤、心、肝、腎等重要臟器疾病，并簽署知情同意書(shū)。肺癌組男53例，女27例，年齡31～69歲，中位年齡56歲，其中小細(xì)胞肺癌12例，腺癌38例，鱗癌27例，大細(xì)胞癌3例；肺良性疾病組男51例，女32例，年齡28～71歲，中位年齡54歲，其中炎性假瘤15例，結(jié)核瘤49例，錯(cuò)構(gòu)瘤16例；健康對(duì)照組男38例，女22例，年齡27～65歲，中位年齡53歲，組別間性別比、年齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法 所有靜脈血樣本均于早晨空腹抽取，將血清于-20℃冰箱中保存待用，所有肺癌或肺良性疾病患者血液樣本均于治療前采集。ELISA法檢測(cè)血清OPN、DKK1含量，ELISA試劑盒由武漢伊萊瑞特生物科技有限公司提供，免疫印跡增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)TK1含量，試劑盒由華瑞同康生物技術(shù)有限公司提供，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以中位數(shù)及四分位數(shù)［M（P25，P75）］表示，兩組間比較采用Mann?WhitneyU檢驗(yàn)。采用Logistic回歸模型計(jì)算個(gè)體預(yù)測(cè)概率值作為聯(lián)合診斷新變量，并建立ROC曲線，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清OPN、TK1和DKK1含量的比較 健康對(duì)照組和肺良性疾病組血清中OPN、TK1和DKK1含量差異無(wú)顯著性（P＞0.05）；與健康對(duì)照組或肺良性疾病組比較，肺癌患者血清中OPN、TK1和DKK1含量均顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 OPN、TK1和DKK1的Logistic回歸分析 對(duì)肺良性疾病組和肺癌組結(jié)果進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果表明，血清OPN、TK1和DKK1含量均與肺癌發(fā)生密切相關(guān)（P＜0.05），分析結(jié)果見(jiàn)表2。使用SPSS軟件聯(lián)合三者建立二元Logistic回歸模型，并聯(lián)合三者生成新變量—預(yù)測(cè)概率值，作為三者聯(lián)合區(qū)分肺良性疾病和肺癌的診斷指標(biāo)。

2.3 ROC曲線分析結(jié)果 ROC曲線結(jié)果表明，血清OPN、TK1和DKK1均具有一定的肺癌診斷價(jià)值（P＜0.05），具有區(qū)分肺良性疾病和肺癌的能力，三者的診斷價(jià)值由高到低依次為DKKA、TK1和OPN，但三者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；以最大Youden指數(shù)作為準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，TK1的靈敏度較低，但其特異性最高，OPN和DKK1對(duì)應(yīng)的靈敏度和特異性比較接近。當(dāng)以三者聯(lián)合生成的預(yù)測(cè)概率值作為新診斷指標(biāo)時(shí)，三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)應(yīng)的ROC曲線下面積達(dá)0.906（0.860，0.951），顯著高于三者單獨(dú)檢測(cè)的診斷價(jià)值（P＜0.05），且同時(shí)提高靈敏度和特異性。見(jiàn)表3和圖1。

表2 OPN、TK1和DKK1的Logistic回歸分析Tab.2 Logistic regression analysis of OPN，TK1 and DKK1

表3 各肺癌診斷指標(biāo)的ROC曲線結(jié)果分析Tab.3 The diagnostic indicators of lung cancer ROC curve analysis

圖1 各肺癌診斷指標(biāo)的ROC曲線圖Fig.1 ROC curve of lung cancer diagnostic indicators

3 討論

目前肺癌確診的金標(biāo)準(zhǔn)為病理學(xué)檢查，但由于檢查設(shè)備受限、創(chuàng)傷大、成本高、患者順應(yīng)性差等缺陷，很難大范圍推廣應(yīng)用，導(dǎo)致肺癌患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)多為中晚期，致使我國(guó)肺癌死亡率始終居高不下，因此，適合大范圍應(yīng)用的血清生物標(biāo)志物檢查成為一種早期診斷肺癌的重要手段［5］。

OPN作為一種分泌型磷酸化糖蛋白，具有多種生物學(xué)活性，能夠促進(jìn)細(xì)胞的趨化、黏附和遷移，與惡性腫瘤的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等過(guò)程密切相關(guān)［6］。OPN作為促進(jìn)肺癌血管生成的一種細(xì)胞因子，在肺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著極其重要的作用［7］。OPN在正常人群血液中呈低表達(dá)，但在肺癌患者外周血中高表達(dá)，并且血清OPN表達(dá)水平與肺癌患者預(yù)后不佳［8］、臨床病理特征［9］呈高度正相關(guān)，并且對(duì)肝細(xì)胞癌［10］、卵巢癌［11］等具有一定的診斷價(jià)值，有望成為一種無(wú)創(chuàng)的肺癌篩查的生物標(biāo)志物，但國(guó)內(nèi)關(guān)于其對(duì)肺癌診斷價(jià)值的研究鮮有報(bào)道。TK1是一種新型的細(xì)胞增殖特異性標(biāo)志物，與細(xì)胞分裂增殖密切相關(guān)，是DNA合成期的特殊標(biāo)志酶，與細(xì)胞增殖能力呈正相關(guān)，在健康人群血清中TK1表達(dá)極低，當(dāng)機(jī)體發(fā)生惡性腫瘤時(shí)，細(xì)胞增殖速度異常增加，TK1含量明顯升高，該特點(diǎn)為其在早期肺癌診斷中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)［12-13］。臨床研究表明，血清TK1含量升高是肺癌預(yù)后不佳的重要因素，并且在肺癌化療前期TK1含量增加與治療失敗和較差的總體生存率高度相關(guān)［14］。研究表明，血清TK1在乳腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌等患者中異常升高，對(duì)于腫瘤檢測(cè)具有較高特異性，可有效提高其他腫瘤篩查指標(biāo)的腫瘤檢出率。DKK1為一種分泌型糖蛋白，主要通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路影響細(xì)胞凋亡、腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移等，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到重要作用［15］。目前，血清DKK1檢測(cè)用于腫瘤篩查以肝細(xì)胞癌［16］和胰腺癌［17］的研究為主，有研究表明，肺癌患者血清中DKK1含量異常升高［18］，有望成為肺癌診斷的新的血清學(xué)指標(biāo)，但國(guó)內(nèi)外關(guān)于評(píng)價(jià)血清DKK1對(duì)肺癌診斷價(jià)值的研究相對(duì)較少，缺乏足夠的人體研究數(shù)據(jù)支持，因此，本研究通過(guò)比較血清DKK1在健康人群、肺良性疾病患者和肺癌患者中的含量，并對(duì)其診斷價(jià)值進(jìn)行評(píng)價(jià)，希望為應(yīng)用血清DKK1診斷肺癌提供參考。

本研究結(jié)果表明，肺癌患者血清中OPN、TK1和DKK1含量明顯高于健康人群或肺良性疾病患者，提示血清OPN、TK1和DKK1檢測(cè)具有篩查肺癌的可能性。由于健康人群和肺良性疾病患者之間各指標(biāo)差異均無(wú)顯著性，且臨床早期區(qū)分肺良性疾病和肺癌的意義重大，故本文只針對(duì)肺良性疾病和肺癌的區(qū)分展開(kāi)進(jìn)一步探討。通過(guò)Logistic回歸對(duì)肺良性疾病和肺癌患者的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果表明血清OPN、TK1和DKK1表達(dá)水平與肺癌發(fā)生關(guān)系密切，并進(jìn)一步得出三者聯(lián)合的預(yù)測(cè)概率值，作為三者聯(lián)合區(qū)分肺良性疾病和肺癌的診斷指標(biāo)。ROC曲線分析結(jié)果表明，血清OPN、TK1和DKK1單獨(dú)檢測(cè)均具有一定的肺癌診斷價(jià)值，其中TK1的特異性可高達(dá)92.77%，但靈敏度偏低，而聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值顯著高于三者單獨(dú)診斷，并能夠同時(shí)提高肺癌診斷的靈敏度和特異性，靈敏度和特異性分別達(dá)到77.5%和93.98%，這可有效降低三者單獨(dú)診斷肺癌時(shí)發(fā)生誤診或漏診的情況。綜上所述，血清OPN、TK1和DKK均可用作臨床篩查肺癌的指標(biāo)，且三者聯(lián)合檢測(cè)具有較高的臨床診斷價(jià)值，可以提高肺癌早期診斷的特異性和敏感性，對(duì)于區(qū)分肺癌和肺良性疾病具有重要價(jià)值。但是，這也是筆者早期粗淺的研究結(jié)果，目前也只是完成了對(duì)不足100例患者的檢測(cè)，還仍需要更大樣本量的數(shù)據(jù)來(lái)證實(shí)三者聯(lián)合檢測(cè)可以提高肺癌早期診斷的實(shí)用性及有效性。同時(shí)，由于受到本科室收治對(duì)象為肺病患者的局限性，未能與其他類(lèi)型腫瘤進(jìn)行對(duì)照研究，故筆者下一步將嘗試于其他腫瘤科室合作進(jìn)行深入研究。