周宏霞，畢樂飛，藏汝瑛

(1.威海市食品藥品檢驗檢測中心，山東 威海 264210；2.榮成出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心，山東 榮成 264300)

醬腌菜是以新鮮蔬菜為主要原料，經(jīng)不同的腌漬工藝加工而成的各種蔬菜制品的總稱。它具有特有的風(fēng)味，口味好，能增進(jìn)食欲，促進(jìn)消化液的分泌，有時為了改善其色澤會添加一些合成色素。在GB 2760-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中明確規(guī)定了醬腌菜中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、亮藍(lán)、靛藍(lán)等色素允許使用的限量。另外，不能添加如日落黃、誘惑紅、赤蘚紅等色素。目前檢測色素的標(biāo)準(zhǔn)方法有：>GB 5009.35-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》、SN/T 3540-2013《出口食品中多種禁用著色劑的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》、SN/T 3638-2013《出口食品中脂溶性著色劑的測定》、SN/T 4457-2016《出口飲料、冰淇淋等食品中11種合成著色劑的檢測 液相色譜法》，這些標(biāo)準(zhǔn)方法未提及醬腌菜的色素檢測。國內(nèi)檢測色素的文獻(xiàn)涉及到的食品種類有肉制品、飲料、糖果、冰淇淋等，而對于醬腌菜的方法研究報道很少[1-10]。因此，為了加強(qiáng)對醬腌菜的監(jiān)管，亟需建立醬腌菜中多種色素同時檢測的方法。

本文以醬腌菜為研究對象，建立了高效液相色譜法同時檢測檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、赤蘚紅6種色素的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

高效液相色譜儀配紫外檢測器 美國安捷倫公司；DL-12氮吹儀 安譜科學(xué)儀器有限公司；CM-10A真空泵 津騰實驗設(shè)備有限公司；Visiprep 24TMDL固相萃取儀 美國Supelco公司；MS3 Digital旋渦儀 德國IKA公司；Neofuge 23R臺式高速離心機(jī) 上海力申科學(xué)儀器有限公司。

甲醇(色譜純,Merk公司)；氨水、乙酸銨、檸檬酸(均為分析純，天津科密歐公司)；Cleanert○RPWAX 固相萃取柱(150 mg/6 mL,艾杰爾公司)。

標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液:檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、赤蘚紅濃度都為0.5 mg/mL(中國計量科學(xué)研究院)。

1.2 試劑配制

檸檬酸溶液：稱取20.0 g檸檬酸，加水至100 mL溶解，混勻。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

稱取樣品2.00 g于離心管中，加入10 mL 1% 氨水溶液，漩渦震蕩提取1 min，4000 r/min離心5 min，重復(fù)提取至提取液無色，合并上清液，用檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH至6左右作為凈化液。

1.3.2 樣品凈化

PWAX 固相萃取柱用 6 mL 甲醇、 6 mL水活化后，將 1.3.1中的全部樣液過柱，依次用 6 mL水、6 mL甲醇淋洗，抽干。用6 mL 2% 氨水-甲醇洗脫，洗脫液于45 ℃下氮氣吹至近干，用1 mL 50% 甲醇-水溶解，經(jīng)高速離心機(jī)(10000 r/min) 離心 5 min，直接上機(jī)測定。

1.3.3 儀器條件

色譜柱: Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；流動相:甲醇+0.02 mol/L乙酸銨溶液，梯度洗脫程序見表 1。

表1 HPLC梯度洗脫程序Table 1 Elution gradient of HPLC

2 結(jié)果與討論

2.1 固相萃取柱的選擇

目前色素凈化主要有聚酰胺小柱和PWAX 固相萃取柱，采用聚酰胺小柱，不能同時處理赤蘚紅。PWAX 固相萃取柱是一種混合型弱陰離子交換柱，赤蘚紅能與其他的色素一起凈化處理，簡化了操作步驟，經(jīng)處理后樣品中的雜質(zhì)少，且回收率能達(dá)到要求。

2.2 淋洗液的選擇

采用6 mL水(pH為4)、6 mL甲醇-甲酸(6∶4)、6 mL 水(pH值6～7)淋洗和6 mL水、6 mL 甲醇淋洗兩種方法，發(fā)現(xiàn)6 mL水、6 mL 甲醇淋洗，6種色素的回收率相對較高。

2.3 定溶液的選擇

查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)樣品中有赤蘚紅時，宜用50%甲醇水溶液定容。但是用 50%甲醇水溶液定容時，對檸檬黃的峰形產(chǎn)生較大的影響，峰形展寬。所以，如果樣品中不含赤蘚紅時，樣品宜用水溶解。

2.4 溶解液的凈化

由于濾膜對色素有不同程度的吸附作用，因此溶解液經(jīng)高速離心凈化后上儀器檢測，而不是過濾膜，這樣可以提高回收率。

2.5 流動相的梯度選擇

為了便于各個物質(zhì)能夠分離，選用0.02 mol/L乙酸銨溶液與甲醇進(jìn)行梯度洗脫。最初的0～7 min，如果采用甲醇+0.02 mol/L乙酸銨溶液(5%+95%)變化到甲醇+0.02 mol/L乙酸銨溶液(35%+65%)時，儀器的基線有凸起且明顯。不斷變化兩種流動相的比例發(fā)現(xiàn)采用甲醇+0.02 mol/L乙酸銨溶液(10%+90%)變化到甲醇+0.02 mol/L乙酸銨溶液(35%+65%)時，基線變化小，且各種物質(zhì)能有效地分離。各種物質(zhì)的色譜圖見圖1。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖Fig.1 Chromatogram of mixed standard solution

2.6 方法的相關(guān)系數(shù)和檢出限

用超純水配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.5，1，10，25，50 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列，在1.3.3色譜條件下進(jìn)樣分析，以混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)(X)、其相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)建立校準(zhǔn)曲線，得到以下6種人工合成色素的回歸方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)，方法的最低檢測限按 3倍信噪比計算，見表2。

表2 6種色素的線性方程和相關(guān)系數(shù)Table 2 Linear equation and correlation coefficient of 6 synthetic colorants

2.7 方法的精密度和回收率實驗

分別稱取同一均勻的空白樣品2.00 g，分別加入高、中、低3種不同濃度的各種色素，每個濃度做5個平行，經(jīng)提取后檢測，計算回收率和精密度，見表3。試驗表明：3種濃度下醬腌菜樣品色素的平均回收率在92.7%～98.4%之間，RSD在1.59%～4.34%之間。

表3 回收率實驗和精密度(n=5)Table 3 Recoveries and precision

續(xù) 表

3 結(jié)論

本方法選擇固相萃取-高效液相色譜法對醬腌菜中的檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、赤蘚紅6種人工合成色素進(jìn)行檢測。靈敏度高，精密度和準(zhǔn)確度良好，能滿足醬腌菜中6種人工合成色素同時檢測的需要。