楊天俊 陳彥良 劉文舒 郭小澤 唐艷強(qiáng) 劉玉廷 黎徳兵 李思明*

(1.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，南昌 330200;2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，成都 611130)

魚類因消化道較短，消化酶活力低，對(duì)飼料蛋白質(zhì)利用率低[1]，易導(dǎo)致水體氨氮含量過高，制約魚類生長和引發(fā)魚類疾病。為降低水體環(huán)境中的氮磷含量，預(yù)防魚類爆發(fā)疾病，實(shí)際養(yǎng)殖過程中在保證飼料營養(yǎng)均衡的條件下，普遍采取減少飼料蛋白質(zhì)水平和適量提高脂肪水平的策略[2]，這種養(yǎng)殖策略可達(dá)到促進(jìn)魚體生長、保護(hù)養(yǎng)殖水域的目的[3]。正常情況下，草魚飼料脂肪需求水平為3%～6%[4]，當(dāng)飼料脂肪水平過高時(shí)易致使魚體脂肪蓄積過量，肝胰臟等組織受到損傷，反而導(dǎo)致魚體生長緩慢，飼料系數(shù)上升[5-8]，養(yǎng)殖效益下降。

草魚攝食量大，對(duì)高脂飼料利用能力低，攝食高脂飼料極易使魚體脂肪沉積過多，機(jī)體脂質(zhì)代謝發(fā)生紊亂[9]。有報(bào)道指出，忍冬屬或杜仲屬中草藥植物中提取的綠原酸(chlorogenic acid，CGA)具有抗菌、消炎、抗氧化的特性[10-12]。亦有大量研究報(bào)道CGA具有促生長，降脂糖等效用[13-15]。CGA作為飼料添加劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能[16]及對(duì)草魚肌肉品質(zhì)的影響[17]已有文獻(xiàn)報(bào)道，但CGA對(duì)魚類脂質(zhì)代謝的研究尚未見報(bào)道。為此，本試驗(yàn)擬在高脂飼料(粗脂肪含量約為9.00%)中添加不同水平CGA，研究CGA對(duì)草魚生長性能和脂質(zhì)代謝的影響，旨在探索解決由高脂飼料引起魚脂肪蓄積過多而致魚體生長緩慢、脂質(zhì)代謝紊亂等問題，為CGA應(yīng)用于草魚等水生動(dòng)物養(yǎng)殖和開發(fā)新型水產(chǎn)添加劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

由于草魚脂肪需要水平范圍為3%～6%，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)飼料中豆油添加水平為8%(飼料粗脂肪含量約為9.00%)。CGA(購自Sigma公司，純度≥95%)添加水平參考張純[18]、王蕓等[19]對(duì)建鯉、凡納濱對(duì)蝦的研究報(bào)道，分別在基礎(chǔ)飼料中添加0(C)、200(200CGA)、400(400CGA)、600 mg/kg CGA(600CGA)，以微晶纖維素為填充物調(diào)節(jié)各飼料總量一致。飼料原料粉碎后經(jīng)60目篩篩出粉料，過篩粉料逐級(jí)混勻，豆油在所有粉料混勻之后添加，待豆油混勻之后，加入適量蒸餾水拌勻，以小型制粒機(jī)制作直徑為1～2 mm的粒狀飼料，制備的飼料顆粒于陰涼干燥處配合風(fēng)扇風(fēng)干48 h，然后密封于自封袋中，-20 ℃條件下貯存?zhèn)溆谩Ｔ囼?yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %

1)每千克維生素預(yù)混料含有 Contained the following per kg of the vitamin premix:VA 350 000 IU,VD3450 000 IU,VE 20 g,VK37.5 g，VB110 g，VB210 g，VB612 g，VB1220 mg，煙酰胺nicotinamide 40 mg，葉酸folic acid 3 g，泛酸鈣calcium pantothenate 30 g，生物素biotin 100 mg，VC 60 g，肌醇inositol 60 g。
2)每千克礦物質(zhì)預(yù)混料含有 Contained the following per kg of the mineral premix：NaH2PO4100 g，KH2PO4215 g，Ca(H2PO4)2·2H2O 265 g，CaCO3105 g，乳酸鈣 Ca-lactate 165 g，MgSO4·7H2O 100 g，AlCl3·2H2O 12 g，ZnSO4·7H2O 5.11 g，檸檬酸鐵 Fe-citrate 0.61 g，MnSO4·4H2O 1.43 g，KI 0.58 g，CuCl20.51 g，CoCl2·6H2O 1.76 g，KCl 28 g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)所用草魚由江西省水產(chǎn)研究所提供，魚苗運(yùn)抵江西省農(nóng)科院畜牧研究所經(jīng)高錳酸鉀消毒及水溫適應(yīng)后放養(yǎng)于室內(nèi)循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)，該系統(tǒng)含20個(gè)直徑100 cm，高80 cm的圓形養(yǎng)殖桶，可進(jìn)行水溫控制，養(yǎng)殖用水氨氮含量小于0.05 mg/L，pH為7.5左右，溶氧含量大于5 mg/L。養(yǎng)殖過程中24 h曝氣增氧，預(yù)試期10 d，之后選取活力強(qiáng)體質(zhì)優(yōu)大小為(7.53±0.30) g草魚360尾，隨機(jī)分為4組，分別飼喂1種上述試驗(yàn)飼料，每組3重復(fù)，每重復(fù)30尾，每個(gè)重復(fù)的30尾放養(yǎng)于1個(gè)養(yǎng)殖桶。每日09:00和16:00按分組進(jìn)行投喂，日投喂量為草魚體重的5%～7%，每周換水以及虹吸排污2～3次，每次換水約為養(yǎng)殖桶水體總量的1/3。正試期于2016年8月24日開始，2016年11月8日結(jié)束，為期11周。

1.3 樣本采集

正試期結(jié)束前24 h停止投喂，對(duì)整池的草魚進(jìn)行稱重計(jì)數(shù)，每組魚隨機(jī)選取18尾(每重復(fù)6尾)進(jìn)行體長、體寬的測量，置于解剖盤中完整取其內(nèi)臟，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗凈，經(jīng)由濾紙吸干后稱重。再每組隨機(jī)抽取6尾魚進(jìn)行全魚的常規(guī)營養(yǎng)成分測定，所抽取的全魚樣本整理編號(hào)后貯存于-80 ℃中保存待測。

每組魚隨機(jī)取18尾(每重復(fù)6尾)試驗(yàn)魚，麻醉后用量程為1或2 mL的一次性注射器進(jìn)行尾部靜脈采血，于4 ℃條件下自然凝固，過夜，冷凍離心機(jī)3 500 r/min離心15 min，采集血清置于-20 ℃中保存待測，草魚血液采集完畢后置于解剖盤中，打開腹腔，完整取出內(nèi)臟，分離出肝胰臟并用PBS洗凈，濾紙除去表面水分，于-80 ℃環(huán)境下貯存待測。

1.4 制備肝胰臟勻漿液

肝胰臟勻漿液的制備：保存于-80 ℃條件下的肝胰臟樣本逐級(jí)解凍(-20、4 ℃)后[20]，取出肝胰臟樣本并精確稱重，在量程為20 mL的玻璃勻漿器中按照肝胰臟重量精準(zhǔn)地加入9倍體積溫度為4 ℃的0.68%生理鹽水，冰浴條件下緩慢研磨3～5 min，勻漿液在低溫冷凍離心機(jī)中3 000 r/min離心10 min，用潔凈的、消毒過的棉簽清除勻漿液表層脂質(zhì)，小心吸取離心后上清液，分裝編號(hào)，于-80 ℃條件下儲(chǔ)存待測。

1.5 肝胰臟透射電鏡切片

取出草魚肝胰臟，用PBS沖洗3遍，切取1 mm左右的肝胰臟于2.5%戊二醛固定4 h以上，然后用PBS漂洗2次，每次1 h，再經(jīng)1%鋨酸固定1 h，PBS漂洗2次，每次5 min，后乙醇脫水。樣本用1,2-環(huán)氧丙烷漂洗2次，每次漂洗10 min，環(huán)氧丙烷與環(huán)氧樹脂(1∶1)混勻后，將樣本浸沒其中，靜置1 h后包埋在帶標(biāo)簽紙的模型中，放置過夜后放入60 ℃烘箱48 h，然后切片(透射電鏡50～60 nm)，染色(透射電鏡:1%鈾染色10 min)，最后進(jìn)行圖片采集和分析(每組9個(gè)樣本)。

1.6 指標(biāo)測定

1.6.1 生長性能指標(biāo)測定

記錄初始體重(initial body weigh，IBW)、終末體重(final body weight，F(xiàn)BW)，飼料攝入量等數(shù)據(jù)，計(jì)算增重率(weight gain rate,WGR)、飼料系數(shù)(feed coefficient,FC)、臟體指數(shù)(viscerosomatic index,VSI)、肥滿度(condition factor,CF)、蛋白質(zhì)效率(protein efficiency ratio,PER)、成活率(survival rate,SR)，計(jì)算公式如下：

WGR(%)=[(We-Ws)/Ws]×100；FC=(We-Ws)/Wf；VSI(%)=(Wv/We)×100；CF(g/cm3)=We/L3；PER(%)=[(We-Ws)/Wp]×100；SR(%)=(ne/ns)×100。

式中：We為FBW(g)；Ws為IBW(g)；t為試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間(d)；Wf為飼料干物質(zhì)攝入量(g)；Wv為內(nèi)臟重(g)；L為體長(cm)；Wp為飼料中粗蛋白質(zhì)含量(%)；ne、ns分別為草魚養(yǎng)殖期間終末和初始魚尾數(shù)。

1.6.2 全魚營養(yǎng)成分測定

草魚全魚水分含量測定采用105 ℃恒溫烘干失重法(GB 5009.3—2010)；粗蛋白質(zhì)含量測定采用凱氏定氮法(GB 5009.5—2010)；粗脂肪含量測定采用索氏抽提法(GB 5009.4—2010)；粗灰分含量測定采用馬福爐高溫灼燒法(GB 5009.4—2010)。

1.6.3 脂質(zhì)代謝指標(biāo)測定

脂質(zhì)代謝指標(biāo)血清和肝胰臟甘油三酯(TG)、總膽固醇(T-CHO)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量及肝胰臟肝脂酶(HL)、脂蛋白脂酶(LPL)、總脂酶(TL)活力測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所，按試劑盒說明書測定脂質(zhì)代謝指標(biāo)。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，若差異顯著，進(jìn)一步進(jìn)行Duncan氏法多重比較，差異顯著水平設(shè)定為P<0.05,結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚生長性能的影響

由表2可知，各組草魚終末體長、臟體指數(shù)無顯著差異(P>0.05)；隨著CGA添加水平的提高，終末體重、增重率、蛋白質(zhì)效率均顯示出先升高后下降的趨勢，400CGA組最高，與C組差異顯著(P<0.05)，其中終末體重增加15.90%，增重率提高22.96%，蛋白質(zhì)效率提升17.75%；與C組對(duì)比，試驗(yàn)組飼料系數(shù)呈現(xiàn)集體下降，400CGA組顯著低于C組(P<0.05)，降低了14.86%；魚體肥滿度隨著CGA添加水平提高而升高，600CGA組顯著高于C組(P<0.05)；各組草魚存活率均為100%。

表2 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚生長性能的影響Table 2 Effects of chlorogenic acid supplementation in high-fat diets on growth performance of grass carp

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。
Values in the same row with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚全魚營養(yǎng)成分的影響

由表3可知，各組全魚水分含量無顯著差異(P>0.05)；400CGA組全魚粗蛋白質(zhì)含量顯著高于其他組且粗脂肪含量顯著低于其他組(P<0.05)；C組全魚粗灰分含量顯著高于400CGA組(P<0.05)。

表3 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚全魚營養(yǎng)成分的影響Table 3 Effects of chlorogenic acid supplementation in high-fat diets on conventional nutrient composition of whole body of grass carp

2.3 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚血清及肝胰臟中脂質(zhì)指標(biāo)的影響

2.3.1 血清中脂質(zhì)指標(biāo)

由表4可知，草魚血清中各組的TG含量差異不顯著(P>0.05)；C組血清T-CHO含量顯著高于200CGA、400CGA組(P<0.05)，與600CGA組差異不顯著(P>0.05)；C組血清HDL-C含量顯著低于各試驗(yàn)組(P<0.05)；C組血清LDL-C含量顯著高于400CGA、600CGA組(P<0.05)，與200CGA組差異不顯著(P>0.05)。

表4 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚血清中脂質(zhì)指標(biāo)的影響Table 4 Effects of chlorogenic acid supplementation in high-fat diets on lipid indicators in serum of grass carp mol/L

2.3.2 肝胰臟中脂質(zhì)指標(biāo)

由表5可知，C組肝胰臟中TG、T-CHO含量顯著高于其余各組(P<0.05)，400CGA、600CGA組肝胰臟中HDL-C含量顯著高于C組(P<0.05)，但C組與200CGA組差異不顯著(P>0.05)；C組肝胰臟中LDL-C含量顯著高于其余各組(P<0.05)。

表5 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚肝胰臟中脂質(zhì)指標(biāo)的影響Table 5 Effects of chlorogenic acid supplementation in high-fat diets on lipid indicators in hepatopancreas of grass carp mol/mg prot

2.4 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚肝胰臟中脂質(zhì)代謝酶活力的影響

由表6可知，試驗(yàn)組肝胰臟中HL活力顯著高于C組(P<0.05)；400CGA組肝胰臟中LPL活力顯著高于C組(P<0.05)；試驗(yàn)組肝胰臟中TL活力均顯著高于C組(P<0.05)。

表6 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚肝胰臟中脂質(zhì)代謝酶活力的影響Table 6 Effects of chlorogenic acid supplementation in high-fat diets on lipid metabolism enzyme activities in hepatopancreas of grass carp U/mg prot

2.5 高脂飼料中添加CGA對(duì)肝胰臟細(xì)胞中脂質(zhì)沉積的影響

組織切片中肝胰臟細(xì)胞脂質(zhì)經(jīng)鋨酸還原后呈黑色，見圖1。由圖可知，C組脂滴分布密集，數(shù)量較多，且體積較大，大量脂質(zhì)沉積于肝胰臟細(xì)胞中；與C組相比，試驗(yàn)組脂滴的體積都明顯變小，且脂滴的分布也較稀疏，脂質(zhì)沉積變少，尤以400CGA、600CGA組明顯；進(jìn)一步比較400CGA和600CGA組可看出，400CGA組中肝胰臟中脂滴數(shù)量、大小、分布密度均小于600CGA組。

圖1 透射電鏡下肝胰臟細(xì)胞中脂質(zhì)沉積情況(標(biāo)尺：5 μm)Fig.1 Lipid deposition in hepatopancreas under transmission electron microscope (scale： 5 μm)

3 討 論

3.1 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚生長性能的影響

CGA作為脂類物質(zhì)，在胃和小腸中以原型的方式被吸收，進(jìn)入血液后發(fā)揮其抗氧化和降脂等作用[21-22]。目前，CGA對(duì)畜禽的促生長、抗氧化、降脂、降糖等作用已被廣泛關(guān)注，且CGA作為飼料新型添加劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用研究已有零星報(bào)道。肖洋[23]報(bào)道飼料中添加200 mg/kg CGA能夠提高中華鱉生長性能；張純[18]研究表明，建鯉飼料中添加200 mg/kg CGA顯著提高了建鯉魚體的增重率，且CGA對(duì)腸道發(fā)育具有促進(jìn)作用，建鯉生長性能改善可能與此有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與C組對(duì)比，添加400 mg/kg CGA顯著提高了草魚終末體重、增重率和蛋白質(zhì)效率，其中草魚終末體重增加15.90%，增重率提高22.96%，蛋白質(zhì)效率提升17.75%，飼料系數(shù)顯著降低了14.86%；肥滿度隨著CGA添加水平提高呈現(xiàn)緩慢提升趨勢，添加600 mg/kg CGA顯著提高了肥滿度。由以上試驗(yàn)結(jié)果可知，400 mg/kg CGA的添加使草魚生長性能得到提高，可較好促進(jìn)草魚生長。本試驗(yàn)與上述相關(guān)研究結(jié)果在獲得較好生長性能的添加水平上不盡相同，分析原因可能與魚的種類、飼養(yǎng)周期、飼料中營養(yǎng)成分含量以及CGA來源等有關(guān)。

3.2 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚全魚營養(yǎng)成分的影響

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，高脂飼料中添加CGA對(duì)全魚粗脂肪、粗蛋白質(zhì)、粗灰分含量均產(chǎn)生顯著的影響，400CGA組全魚粗蛋白質(zhì)含量顯著高于其他組，說明添加400 mg/kg CGA促進(jìn)了草魚對(duì)飼料蛋白質(zhì)的利用，這一結(jié)果與朱衛(wèi)等[24]在點(diǎn)籃子魚中研究結(jié)果有所差異。羅非魚、比目魚、鱸魚研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)，飼料中所含粗脂肪含量過高時(shí)，多余的未被代謝脂肪會(huì)沉積于魚體內(nèi)[6-7,25]。本試驗(yàn)中，400CGA組全魚粗脂肪含量顯著低于其余組，表明添加400 mg/kg CGA可有效地降低魚體脂質(zhì)的沉積。CGA的添加均可降低全魚粗灰分含量，且C組顯著高于400CGA組，究其原因可能是C組缺乏CGA輔助草魚機(jī)體脂質(zhì)代謝，致使魚體脂質(zhì)沉積增加，而多余的脂質(zhì)可促進(jìn)機(jī)體對(duì)維生素A、維生素D、維生素E、維生素K的吸收，并在機(jī)體內(nèi)沉積大量的能量源物質(zhì)[26]，并且這些脂溶性維生素參與魚體多種生理生化反應(yīng)，從而增加了魚體的無機(jī)鹽沉積，導(dǎo)致了粗灰分含量增高，目前這一推測還有待論證。本試驗(yàn)中，與C組相比，添加400 mg/kg CGA對(duì)全魚粗脂肪、粗蛋白質(zhì)含量均有顯著影響，說明高脂飼料中添加400 mg/kg CGA可以有效地提高草魚的營養(yǎng)價(jià)值。

3.3 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚脂質(zhì)代謝的影響

3.3.1 血清和肝胰臟中脂質(zhì)代謝

Shimoda等[27]報(bào)道了口服CGA可減少大鼠內(nèi)臟脂肪的蓄積，降低大鼠機(jī)體脂質(zhì)含量；De Sotillo等[28]通過給予小鼠靜脈注射CGA，發(fā)現(xiàn)大鼠肝臟和血漿中的TG含量顯著下降；Frank等[29]研究也證明，在大鼠飼料中加入CGA后，降低了肝臟的T-CHO含量；張?zhí)m濤等[30]發(fā)現(xiàn)灌服20 mg/mL的CGA可顯著降低小鼠肝臟、骨骼肌TG含量；王強(qiáng)等[31]報(bào)道了金銀花提取物CGA能有效降低血清和肝臟的T-CHO的含量。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，添加CGA有效地降低了血清中T-CHO、LDL-C含量以及提高了血清中HDL-C含量，由此可知CGA的添加對(duì)血清中脂質(zhì)代謝具有良好的調(diào)節(jié)作用，且400CGA組以上3個(gè)指標(biāo)均表現(xiàn)出顯著變化，故認(rèn)為添加400 mg/kg CGA可有效調(diào)節(jié)血清中的脂質(zhì)代謝。CGA對(duì)草魚肝胰臟的降脂作用亦體現(xiàn)較為明顯，本試驗(yàn)條件下，C組草魚肝胰臟中的TG、LDL-C含量均顯著高于試驗(yàn)組，而肝胰臟中HDL-C含量則顯著低于400CGA、600CGA組，與200CGA組差異不顯著，同樣說明添加CGA可促進(jìn)肝胰臟脂質(zhì)代謝，此試驗(yàn)結(jié)果與Shimoda等[27]、De Sotillo等[28]的研究結(jié)果基本一致，均證實(shí)CGA對(duì)脂質(zhì)代謝具有較好的調(diào)節(jié)作用。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，添加400和600 mg/kg CGA均可增強(qiáng)脂質(zhì)代謝能力，根據(jù)400CGA、600CGA組試驗(yàn)結(jié)果中相關(guān)脂質(zhì)代謝指標(biāo)的含量，與C組結(jié)果對(duì)比，探討最佳添加水平。400CGA組血清中T-CHO、HDL-C、LDL-C含量的變化均達(dá)到顯著水平，故認(rèn)為添加400 mg/kg CGA對(duì)血清中脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)能力最佳。400CGA、600CGA組各項(xiàng)肝胰臟脂質(zhì)代謝指標(biāo)均顯示出與C組的顯著差異，與C組相比，400CGA組肝胰臟中TG、T-CHO、LDL-C分別降低了64.73%、47.05%、57.95%，肝胰臟中HDL-C含量提高了74.95%，600CGA組肝胰臟中TG、T-CHO、LDL-C分別降低了60.07%、41.16%、45.35%，肝胰臟中HDL-C含量提高了76.04%，由此可見，400 mg/kg CGA對(duì)肝胰臟脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于600 mg/kg CGA。綜合得出，400 mg/kg CGA的對(duì)血清和肝胰臟的脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)作用較好。

3.3.2 肝胰臟中脂質(zhì)代謝酶

LPL主要作用是分解乳糜微粒、極低密度脂蛋白和中密度脂蛋白中的TG為游離脂肪酸和甘油，以供機(jī)體組織儲(chǔ)存和氧化利用[32]。HL主要分解乳糜殘粒中的TG，并參與高密度脂蛋白的重構(gòu)、極低密度脂蛋白的代謝以及T-CHO的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的調(diào)節(jié)[33]。本試驗(yàn)中，添加CGA可有效地提高肝胰臟中脂質(zhì)代謝酶的活力，且在400CGA組與C組差異達(dá)顯著水平，與C組組對(duì)比，400CGA組肝胰臟中LPL、TL、HL活力分別提高了57.95%、74.95%、86.24%，可知添加400 mg/kg CGA可大幅提高肝胰臟脂質(zhì)代謝酶活力，且添加400 mg/kg CGA使肝胰臟中TG、T-CHO含量顯著降低，推測此結(jié)果可能是CGA添加致使肝胰臟LPL與HL活力升高，促進(jìn)肝胰臟中TG分解為游離脂肪酸，從而降低肝胰臟中TG、T-CHO含量。由此可知，添加400 mg/kg CGA可增強(qiáng)草魚肝胰臟在高脂環(huán)境下的脂質(zhì)代謝能力。

3.3.3 高脂飼料中添加CGA對(duì)草魚肝胰臟細(xì)胞中脂質(zhì)沉積的影響

鋨酸與脂質(zhì)反應(yīng)生成黑色鋨和脂質(zhì)復(fù)合物，不溶于固定過程中的二甲苯等有機(jī)溶劑，因而鋨酸染色能精確的顯示細(xì)胞中脂肪滴的大小及數(shù)量[34]。本試驗(yàn)中，肝胰臟切片鋨酸染色后經(jīng)透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，C組脂滴數(shù)量較多且脂滴體積也相對(duì)較大，脂滴密集分布于肝細(xì)胞中，表明在肝胰臟中有大量的脂質(zhì)沉積，長期飼喂高脂飼料使草魚肝胰臟產(chǎn)生了嚴(yán)重的脂質(zhì)代謝負(fù)擔(dān)，若不能及時(shí)降解肝胰臟中的脂質(zhì)，易使脂質(zhì)大量沉積在肝胰臟組織中，造成營養(yǎng)性脂肪肝等疾病，影響肝臟正常生理功能[35]。與C組相比，試驗(yàn)組脂滴體積都明顯較小，且分布較稀疏，說明高脂飼料中添加CGA降低了肝胰臟中脂質(zhì)含量，減少脂肪沉積，尤其以400CGA和600CGA組最為明顯。進(jìn)一步觀察比較，400CGA組中肝胰臟中脂滴數(shù)量、體積大小、分布密度均小于600CGA組，可知400CGA組肝胰臟脂質(zhì)沉積少于600CGA組，CGA添加水平為400 mg/kg時(shí)肝胰臟脂質(zhì)代謝能力優(yōu)于添加水平為600 mg/kg時(shí)。由此可以說明，高脂飼料中CGA添加水平為400mg/kg時(shí)能促進(jìn)肝胰臟脂質(zhì)代謝。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，草魚幼魚階段的高脂飼料中添加CGA 400 mg/kg可增強(qiáng)草魚脂質(zhì)代謝能力，促進(jìn)草魚生長。