耿 穎

(湖南省腦科醫(yī)院,湖南 長沙 410007)

胃癌是臨床上的常見疾病，患者預(yù)后較差。雖然近年來胃癌的發(fā)生率呈一定下降趨勢，但是仍是全世界第4大惡性腫瘤，致死率高居惡性腫瘤第2位[1]。胃癌發(fā)生和發(fā)展分子機(jī)制尚不確切，各學(xué)者也試圖尋求胃癌惡性程度、轉(zhuǎn)移性的預(yù)測指標(biāo)，并試圖尋求治療靶點(diǎn)[2]。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是一種非組蛋白，是高遷移率族的成員，是一種炎性因子，可能參與“炎性鏈”反應(yīng)來引起腫瘤發(fā)生和發(fā)展。受體晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)與腫瘤發(fā)生和發(fā)展存在較大關(guān)系，可以參與腫瘤發(fā)生和發(fā)展[3]。HMGB1還可以通過與RAGE受體結(jié)合，參與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和生物學(xué)行為[4]。本研究旨在分析胃癌組織中HMGB1和RAGE蛋白的表達(dá)情況，并觀察其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，為臨床治療尋求新靶點(diǎn)提供依據(jù)。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2013年6月—2016年6月我院收治擬行手術(shù)治療的胃癌患者230例，均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)為胃癌，均擬行手術(shù)治療術(shù)前未經(jīng)任何放療和化療，均自愿參加。排除存在免疫系統(tǒng)疾病者，嚴(yán)重?fù)p傷者，其他系統(tǒng)惡性腫瘤者。其中男121例，女109例；年齡35～85(63.21±1.52)歲。

1.2方法 取癌組織及癌旁≥7 cm正常組織分別納入研究組和對照組，以4%甲醛固定，石蠟包埋。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測2組組織中HMGB1和RAGE蛋白表達(dá)水平，進(jìn)行防脫蠟處理后將片撈出，于60 ℃溫度下烤片30 min，應(yīng)用二甲苯和乙醇脫蠟，將切片放置于3%H2O2中滅活內(nèi)源性過氧化物酶，將切片放置于枸緣酸緩沖液中水浴，使其自然冷卻。加入一抗于4 ℃環(huán)境中孵育過夜，加入二抗孵育30 min，最后進(jìn)行蘇木精染色。

1.3結(jié)果判斷 應(yīng)用Olympus光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果，HMGB1蛋白以細(xì)胞核表達(dá)為主，RAGE蛋白以細(xì)胞質(zhì)表達(dá)為主，呈棕黃色表示陽性信號(hào)。陽性由染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占百分比共同決定，染色強(qiáng)度可以分為無色、淡黃色、棕黃色和棕褐色，分別計(jì)為0分，1分，2分和3分；陽性細(xì)胞所占百分比≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。最后評分為兩者之和。評分≥2分為陽性，≤1分為陰性[5]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以%表示，應(yīng)用經(jīng)2檢驗(yàn);HMGB1和RAGE的相關(guān)性應(yīng)用Spearman相關(guān)分析法分析。P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.12組HMGB1和RAGE表達(dá)比較 研究組HMGB1和RAGE陽性表達(dá)率顯著高于對照組(P均<0.05)。見表1。

表1 2組HMGB1和RAGE陽性表達(dá)率比較 例(%)

2.2臨床病理參數(shù)關(guān)系 HMGB1表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，RAGE表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見表2和表3。

2.3相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析顯示：HMGB1和RAGE表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.629，P<0.009)。

3 討 論

HMGB1會(huì)于多種惡性腫瘤細(xì)胞中過度表達(dá)，如鼻咽癌、大腸癌、肝癌、胰腺癌等，且與患者預(yù)后存在較大關(guān)系[6]。HMGB1會(huì)因定位不同而表現(xiàn)出不同的功能，但在多數(shù)細(xì)胞中，HMGB1定位于細(xì)胞核中，是DNA分子伴侶起到穩(wěn)定細(xì)胞核平衡的作用，對基因轉(zhuǎn)錄和重組均起調(diào)節(jié)作用，也能修復(fù)DNA和維持端粒長度[7]。而在細(xì)胞質(zhì)或線粒體中，HMGB1可以增加自噬作用，對凋亡具有抑制作用，也能調(diào)節(jié)線粒體的形態(tài)、功能。而細(xì)胞表面，HMGB1可以促進(jìn)突觸萌發(fā)，促進(jìn)神經(jīng)突觸增長[8]。在細(xì)胞外液中，HMGB1可以與多種受體相結(jié)合，與其他共激活物成為復(fù)合物，進(jìn)而調(diào)節(jié)炎性、增殖、代謝、凋亡等生理、病理反應(yīng)。從多種途徑參與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展[9]。因此，HMGB1是現(xiàn)階段腫瘤細(xì)胞的研究重點(diǎn)和熱點(diǎn)。且胃癌是屬于多基因疾病，不同基因在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮不同作用，針對HMGB1通路成為腫瘤靶點(diǎn)治療的新熱點(diǎn)[10]。

表2 HMGB1蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)關(guān)系 例(%)

表3 RAGE蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)關(guān)系 例(%)

晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)是還原糖和蛋白質(zhì)相結(jié)合形成的，可以通過受體實(shí)現(xiàn)多種效應(yīng)，AGEs受體復(fù)合物主要有AGE-R1、AGE-R2、AGE-R3，RAGE是清道夫受體，包含CD-36和SCR-Ⅱ，其與糖尿病并發(fā)癥存在較大關(guān)系，也與炎性反應(yīng)具有較大相關(guān)性[11]，除此之外，還參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[12]。有研究證實(shí)，HMGB1可以與RAGE相結(jié)合，此通路與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展存在相關(guān)性[13]。因此，推測HMGB1-RAGE通路和胃癌也存在較大相關(guān)性。本研究顯示，研究組HMGB1和RAGE陽性表達(dá)率均明顯高于對照組，說明胃癌組織中會(huì)出現(xiàn)HMGB1和RAGE高表達(dá)，HMGB1和RAGE高表達(dá)與胃癌有關(guān)，其原因?yàn)镠MGB1可以通過不同途徑發(fā)揮不同作用，其與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展均存在較大關(guān)系，HMGB1也可以與RAGE相結(jié)合，通過HMGB1-RAGE通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和增殖，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡[14]，因此，胃癌組織中會(huì)出現(xiàn)HMGB1和RAGE高表達(dá)。研究還顯示，HMGB1表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，RAGE表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說明HMGB1和RAGE會(huì)促進(jìn)胃癌發(fā)展，均參與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，分析其原因?yàn)镠MGB1可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長與增殖，對腫瘤細(xì)胞的浸潤和侵襲存在較大影響，而TNM分期與腫瘤細(xì)胞浸潤、侵襲存在較大關(guān)系，因此HMGB1與TNM分期有關(guān)，HMGB1可以與RAGE相結(jié)合，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，腫瘤細(xì)胞過度增殖容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[15]，因此，HMGB1和RAGE均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究還顯示，HMGB1和RAGE表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，說明HMGB1和RAGE在胃癌發(fā)生和發(fā)展中起協(xié)同作用，推測HMGB1-RAGE軸在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，且兩者之間具有相互協(xié)調(diào)、相互促進(jìn)的作用。因此，臨床上可以通過阻斷HMGB1-RAGE通路來起到阻斷腫瘤發(fā)生與發(fā)展的作用。

綜上所述，胃癌組織中會(huì)出現(xiàn)HMGB1和RAGE高表達(dá)，且HMGB1和RAGE高表達(dá)與胃癌的浸潤和轉(zhuǎn)移存在關(guān)系，兩者之間也存在正相關(guān)關(guān)系。臨床上可以通過阻斷HMGB1-RAGE通路來起到治療腫瘤的作用。