孫雙姣,粟 雯,陳志良
(邵陽學(xué)院 藥學(xué)院,湖南 邵陽,422000)
在CE-ECL檢測中,目前報(bào)道的電化學(xué)發(fā)光檢測模式為:
目前,我國已商品化的CE-ECL實(shí)驗(yàn)裝置主要為西安瑞邁分析儀器有限公司、中科院長春應(yīng)用化學(xué)研究所自主研制開發(fā)的MPI-A型與MPI-B型CE-ECL檢測儀。該儀器由數(shù)控毛細(xì)管電泳高壓電源、數(shù)控電化學(xué)恒電位儀、多通道數(shù)據(jù)采集分析儀、多功能化學(xué)發(fā)光檢測儀四部分組成。電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的輸出信號由計(jì)算機(jī)記錄并放大。電極為三電極體系,包括鉑盤工作電極、Pt絲輔助電極和Ag/AgCl參比電極(飽和KCl)。
CE-ECL具有選擇好、靈敏度高,線性范圍寬、分析速度快等特點(diǎn),近十多年,該項(xiàng)技術(shù)在生化分析、環(huán)境分析、食品檢測及藥物分析等方面得到了廣泛的應(yīng)用[15],藥物分析是這幾年研究的熱點(diǎn),得到了迅速的發(fā)展。
近年來,心血管患者越來越多,該病是導(dǎo)致中老年患者突發(fā)性死亡的重要原因之一,因此有必要建立快速、高效測定心血管藥物的分析手段。異丙吡胺為廣譜抗心律失常藥,主要用于室性早搏及心動過速,尤其對伴有預(yù)激綜合癥的心動過速療效較好。2005年,Kang[16]用CE-ECL測定了異丙吡胺。鹽酸維拉帕米能選擇性擴(kuò)張冠狀動脈,增加冠脈流量,能抑制房室傳導(dǎo)和心肌興奮,臨床上用于治療陣發(fā)性心動過速。梁汝萍等[17]用CE-ECL分離測定了藥物和尿液中的鹽酸維拉帕米的含量。利多卡因是一種麻醉劑,但也是目前防治急性心肌梗死以及各種心臟病和心律失常的常用藥物,是急性心肌梗死的室性早搏,室性心動過速及室性震顫的首選藥,李昕沛等[18]用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化CE-ECL實(shí)驗(yàn)條件,測定了利多卡因藥物制劑,分析了尿液樣品。阿替洛爾、美托洛爾、艾司諾爾是β1阻滯劑,具有明顯的降壓和降心率的效果。Wang等[19]用CE-ECL測定了藥物制劑及尿液中的阿替洛爾、美托洛爾、艾司諾爾。Xia等[20]通過優(yōu)化分析條件,同時(shí)測定了阿普洛爾、普羅帕酮、醋丁洛爾、維拉帕米、阿替洛爾、美托洛爾六種心血管藥物在尿液中的含量。Liu等[21]以聚乙烯比咯烷酮為添加劑,采取場放大樣品堆積方法提高檢測的靈敏度,同時(shí)測定了阿替洛爾、艾司諾爾、比索洛爾。Sun等[22]用毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光同步測定了人血漿中鹽酸喹那普利及其代產(chǎn)物喹普利拉。
CE-CEL由于分離效果好,靈敏度高而在生物堿分析中得到了較好的應(yīng)用。粉防己堿主要存在于粉防己的根中,具有鎮(zhèn)痛消炎的作用。Chen等[23]用CE-ECL測定了小鼠血漿中粉防己堿的含量。Du等[24]建立了測定小檗堿的CE-ECL法,用于黃連和片劑中小檗堿的測定。利血平是一種吲哚型生物堿,Cao等[25]用該法測定了人體尿液中的利血平。Liu等[26]對滴鼻液中麻黃堿和偽麻黃堿的含量進(jìn)行了測定。Guo等[27]在7min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了山莨菪堿、樟柳堿的分離,以銪(Ⅲ)摻雜普魯士藍(lán)膜的鉑電極為工作電極測定了山莨菪中這兩種生物堿的含量。Zhou等[28]用該法測定了青風(fēng)藤中的青藤堿含量。Gao等[29]以離子液輔助提取樣品,用CE-ECL測定了貝母中貝母堿和浙貝乙素。Wang[30]等以PVP為分離緩沖溶液添加劑,測定了紅花石蒜堿中加蘭他敏和石蒜堿的含量。Xiang等[31]用1-丁基-3-咪唑四氟硼酸為添加劑,采取場放大進(jìn)樣量,用CE-ECL測定了檳榔中的檳榔堿。Yin等[32]用該法測定了苦參中的氧化苦參堿、槐定堿、苦參堿。Li等[33]以β-環(huán)糊精為添加劑,測定了洋金花中阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿三種生物堿。Yuan等[34]以乙腈、丙胺、乙酸,醋酸鈉和高氯酸四丁銨的混合液作電泳緩沖液,采取非水CE-ECL法分析了植物提取液中的阿托品、山莨菪堿和東莨菪堿。Sun[35]等以聚乙烯比咯烷酮為分離緩沖溶液添加劑,同步測定了紅花石蒜中加蘭他敏、多花水仙堿、石蒜倫堿和高石蒜堿。鄧光輝等[36-38]測定了博落回果實(shí)中血根堿和白屈菜紅堿的含量,金釵石斛中石斛堿的含量以及荷葉中荷葉堿與蓮子心中蓮心堿的含量。
藥物進(jìn)入血液后,一部分與血漿蛋白呈可逆的結(jié)合狀態(tài)存在,一部分以游離的分子存在。游離藥物分子通過血液循環(huán)進(jìn)入作用部位發(fā)揮藥理作用。當(dāng)游離藥物進(jìn)入組織或被清除后,部分結(jié)合藥物與血漿蛋白解離而彌補(bǔ)游離藥物。藥物的這種可逆性結(jié)合不僅影響其代謝動力學(xué)、作用時(shí)間與強(qiáng)度,而且往往與藥物的作用機(jī)制、藥物相互作用等密切相關(guān),故研究藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合具有重要意義。Zhao等[39]最早用CE-ECL與透析平衡結(jié)合,研究了藥物與蛋白質(zhì)的相互作用,考察了通過毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離的二苯哌丙醇、普環(huán)啶及苯海索與人血清白蛋白單獨(dú)結(jié)合和共同結(jié)合情況,發(fā)現(xiàn)三個(gè)抗帕金森病的藥物在HSA爭奪相同的結(jié)合位點(diǎn)。該項(xiàng)工作表明,CE-ECL不失為一種好的研究藥物與蛋白質(zhì)結(jié)合的分析方法。鹽酸地芬尼多片可防治疾病或其他原因引起的眩暈、惡心、嘔吐,Wen等[40]用CE-ECL對鹽酸地芬尼多、枸緣酸氯米芬和利多卡因進(jìn)行了分離測定,研究了鹽酸地芬尼多與血紅蛋白的結(jié)合,并得出了結(jié)合位點(diǎn)數(shù)和結(jié)合常數(shù)。Yan等[41]用CE-ECL分離測定了磷酸氯喹,鹽酸地芬尼多和檸檬酸,研究了磷酸氯喹和人血清白蛋白的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)和結(jié)合常數(shù)。周玲玲[42]利用CE-ECL研究了丙吡胺和人血漿蛋白的結(jié)合作用,得出丙吡胺與人血漿蛋白的結(jié)合率約為90.4%。Deng等[43]將超聲微量透析與CE-ECL結(jié)合,研究了鹽酸地爾硫卓和人血清白蛋白的相互作用,得出了二者的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)和結(jié)合常數(shù)。Sun等[44]自制簡易透析裝置,將透析平衡和結(jié)合平衡進(jìn)行簡化,用CE-ECL研究了鹽酸曲美他嗪與人血清白蛋白的相互作用。Zeng等[45]對鹽酸托莫西汀進(jìn)行了CE-ECL測定,并用該法研究了該藥與牛血清白蛋白、細(xì)胞色素C以及肌紅蛋白的相互作用。Duan等[46]用CE-ECL法測定了尿液中酒石酸美托洛爾、富馬酸比索洛爾含量,并同時(shí)研究了兩種藥物與人血清白蛋白的相互作用。
藥代動力學(xué)對藥物研究開發(fā)、臨床合理用藥具有很好的指導(dǎo)作用,在藥學(xué)領(lǐng)域具有重要的意義。CE-ECL在藥物代謝動力學(xué)中的研究不多,主要為Deng實(shí)驗(yàn)室開展的研究工作,該實(shí)驗(yàn)室用CE-ECL測定了甲磺酸培氟沙星[47]、培氟沙星[48]、鹽酸普萘洛爾[49]在健康成人尿液中的藥代動力學(xué),同時(shí)還研究了鹽酸烏拉地爾在大鼠血漿中的藥代動力學(xué)[50]及四環(huán)素[51]在鯽魚肉中的藥代動力學(xué)[52]。同時(shí),Ming等[53]用CE-ECL分析測定了諾氟沙星和左氧氟沙星在尿液中的濃度,并同時(shí)研究了二者在2位成年健康人尿液中的藥代動力學(xué)。
4)在藥物分析、生化分析中的進(jìn)一步運(yùn)用。由于CE-ECL的高靈敏,高選擇和可實(shí)現(xiàn)在線檢測等特點(diǎn),CE-ECL在藥物和生物分析中的作用將更加突顯。
5)CE-ECL技術(shù)新應(yīng)用。由于CE-ECL技術(shù)在眾多領(lǐng)域的應(yīng)用所帶來的潛在價(jià)值,已引起了人們的廣泛關(guān)注,可能開發(fā)出新的應(yīng)用領(lǐng)域。
6)高通量CE-ECL分析體系的研究與開發(fā)。該技術(shù)的研究與開發(fā)將更一步提高分析效率,拓寬其應(yīng)用范圍。