屈云萍 李哲 王嬌 李菲 楊斯斯 劉鐵軍

摘要：為提高乳香揮發(fā)油在制劑中的穩(wěn)定性，對(duì)舒筋通絡(luò)顆粒中乳香揮發(fā)油的提取及其包合工藝進(jìn)行了研究。選擇浸泡時(shí)間（A）、藥材粒徑（B）、加水量（C）、提取時(shí)間（D）為考察因素，采用L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)化乳香揮發(fā)油的提取工藝，通過正交試驗(yàn)，對(duì)飽和水溶液法和膠體磨法兩種包合方式進(jìn)行了工藝研究。結(jié)果表明：影響因素的優(yōu)化組合為A1B1C1D3，其中加水量和提取時(shí)間對(duì)收率具有極顯著性影響，包合時(shí)間、揮發(fā)油和β-環(huán)糊精比例、包合溫度對(duì)飽和水溶液法有極顯著性影響；研磨時(shí)間、揮發(fā)油和β-環(huán)糊精比例對(duì)膠體磨法有極顯著性影響。從生產(chǎn)角度考慮，包合乳香揮發(fā)油采用膠體磨法較飽和水溶液法更具有優(yōu)勢(shì)。

關(guān)鍵詞：中藥藥劑學(xué)；乳香揮發(fā)油；提取；包合；飽和水溶液法；膠體磨法；正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

中圖分類號(hào)：R943文獻(xiàn)標(biāo)志碼：Adoi： 10.7535/hbgykj.2018yx04012

舒筋通絡(luò)顆粒是由骨碎補(bǔ)、牛膝、川芎、天麻、黃芪、威靈仙、地龍、葛根和乳香制成的中藥顆粒，系神威藥業(yè)集團(tuán)獨(dú)家上市的新藥，已被2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》收錄[1]，具有補(bǔ)肝益腎、活血舒筋之功效，適于治療頸椎病之肝腎陰虛、氣滯血瘀證，頭暈、頭痛、脹痛或刺痛，耳聾、耳鳴，頸項(xiàng)僵直，頸、肩、背疼痛，肢體麻木，倦怠乏力，腰膝酸軟，口唇色暗，舌質(zhì)暗紅或有瘀斑等，對(duì)治療神經(jīng)根型、椎動(dòng)脈型和脊髓型頸椎病亦有療效[2-4]。乳香為方中的要藥，主要起活血化痰、消腫止痛、祛腐生肌的功效[1]，乙酸辛酯是乳香揮發(fā)油的主要成分[5-7]，其留存在藥品中的量越多，效果越好。

植物中提取揮發(fā)油的方法主要有壓榨法、溶劑回流浸取法、微波輔助法、超臨界流體萃取法、水蒸氣蒸餾法、水酶法等[8-11]。本研究采用水蒸氣蒸餾法，以揮發(fā)油得率為考核指標(biāo)，優(yōu)選乳香揮發(fā)油提取工藝。為提高揮發(fā)油在制劑中的穩(wěn)定性，采用β-環(huán)糊精包合，并以包合率及包合物得率為考核指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選包合工藝，比較包合方式的各自優(yōu)勢(shì)。

1主要儀器與試藥

METTLER-RLC-210.4電子分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司提供；電熱真空干燥機(jī)，貴陽新奇微波工業(yè)有限責(zé)任公司提供；配液小罐，浙江蒼南縣立甌石化設(shè)備有限公司提供；DFY-00型粉碎機(jī)，浙江溫嶺市大德中藥材器械廠提供。

乳香藥材，經(jīng)河北省藥品檢驗(yàn)研究院中藥師孫寶惠主任鑒定為木蘭科八角茴香正品；β-環(huán)糊精，安徽山河藥用輔料股份有限公司提供。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1舒筋通絡(luò)顆粒制備工藝

將乳香以外的藥材按規(guī)定提取，干燥成浸膏粉，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，以β-環(huán)糊精包合，將包合物與浸膏粉、輔料、矯味劑混勻，制粒即得。

2.2乳香揮發(fā)油提取工藝條件的優(yōu)化

2.2.1正交試驗(yàn)

影響揮發(fā)油提取的主要因素有浸泡時(shí)間、藥材粒徑、加水量、提取時(shí)間等。本研究采用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，選擇浸泡時(shí)間（A）、藥材粒徑（B）、加水量（C）、提取時(shí)間（D）為考察的4個(gè)因素[12]，以揮發(fā)油收率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)化提取工藝。因素與水平見表1，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

2.2.2正交試驗(yàn)結(jié)果分析

在設(shè)計(jì)的因素水平范圍內(nèi)，從方差分析結(jié)果可知各因素對(duì)結(jié)果的影響順序?yàn)镈>C>A>B。其中，加水量（C）、提取時(shí)間（D）具有極顯著性影響，浸泡時(shí)間（A）、藥材粒徑（B）無顯著性影響。綜合考慮后確定舒筋通絡(luò)顆粒中乳香油提取工藝水平的最優(yōu)組合為A1B1C1D3。

2.2.3工藝驗(yàn)證

按優(yōu)化后的工藝條件，提取6 批（每批藥材量50 kg）乳香揮發(fā)油，收率分別為1.4%，1.5%，1.4%，1.4%，1.5%和1.5%，均值為99.72%，RSD值為0084%（n=6） 。結(jié)果均在預(yù)測(cè)范圍內(nèi)，重現(xiàn)性良好，證明優(yōu)化工藝條件可行。

2.3乳香揮發(fā)油包合工藝

2.3.1包合物的制備

常用的揮發(fā)油包合方式有2種[13-14]：飽和水溶液法和膠體磨法。

1）飽和水溶液法取稱量好的β-環(huán)糊精，用純化水?dāng)嚢韬蠹尤氲脚湟盒」拗?，加熱至?guī)定溫度，同時(shí)開啟攪拌槳持續(xù)攪拌，溶液呈透明狀時(shí)停止加熱。待溶液溫度降至規(guī)定溫度，將用等量95%（體積分?jǐn)?shù)，下同）乙醇稀釋后的乳香油緩緩加入到β-環(huán)糊精溶液中，邊加邊攪拌，到達(dá)規(guī)定時(shí)間后放出，置冷庫(kù)冷藏24 h，用約0.074 mm（200目）的濾布過濾，濾渣用水洗滌后再用乙醚洗滌至無乳香油味，置于烘箱中于60 ℃以下干燥，粉碎即得。

2）膠體磨法取一定量的β-環(huán)糊精，加入一定量的水，攪拌，加入到膠體磨中研磨至規(guī)定時(shí)間，緩慢加入乳香油，研磨至規(guī)定時(shí)間，低溫冷藏24 h，用約0074 mm（200目）的濾布過濾，將濾渣用水洗滌后再用乙醚洗滌至無乳香油味，置于烘箱中于60 ℃以下干燥，粉碎即得。

2.3.2空白回收率的測(cè)定

包合物包合完成、冷藏過夜后，需用無水乙醇或其他有機(jī)試劑將未包合的揮發(fā)油洗去，抽濾，然后得到的就是包有揮發(fā)油的包合物。將此包合物干燥后，放入揮發(fā)油提取器，提取出來的油就是被包合的油。取1 mL揮發(fā)油，在該揮發(fā)油提取器中進(jìn)行測(cè)定，按式（1）計(jì)算空白回收率：

空白回收率=實(shí)際收油量投油量×100%。（1）

2.3.3包合率及包合物得率的測(cè)定

將所得干燥包合物精確稱定，置于1 000 mL圓底燒瓶中，加入400 mL蒸餾水，分別按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版“揮發(fā)油測(cè)定法”提取揮發(fā)油，至揮發(fā)油體積不再增加為止，讀取體積，計(jì)算揮發(fā)油包合率和包合物得率，分別見式（2）和式（3）：

揮發(fā)油包合率=實(shí)際收油量投油量×空白回收率×100%，（2）

包合物得率=包合物質(zhì)量β-環(huán)糊精量+投油量×100%。（3）

2.3.4綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)Y

揮發(fā)油包合的越多，留存在產(chǎn)品中發(fā)揮療效就越好，因此將包合率占比定為60%、包合物得率占比定為40%。

Y=包合率×60%+包合物得率×40%。

2.4兩種包合方法最佳工藝的確定

取“2.2.3”工藝驗(yàn)證提取的6批乳香揮發(fā)油，確定兩種包合方法的最佳工藝，按“2.3.1”所述方法進(jìn)行包合。

2.4.1飽和水溶液法包合最佳工藝

影響飽和水溶液法包合的主要因素有揮發(fā)油和β-環(huán)糊精比例（A）、包合溫度[15-16]（B）、包合時(shí)間（C）和加油速率（D）等，通過L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，因素與水平見表4，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表5，方差分析結(jié)果見表6。

從方差分析結(jié)果可知，各因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響順序?yàn)镃>A>B>D。其中，包合時(shí)間（因素C）、揮發(fā)油和β-環(huán)糊精比例（因素A）、包合溫度（因素B）具有極顯著性影響，加油速率（因素D）無顯著性影響。綜合考慮，確定飽和水溶液法包合工藝水平的最優(yōu)組合為A1B1C3D1，即揮發(fā)油和β-環(huán)糊精比例（體積質(zhì)量比，下同）為1∶10，包合溫度為35 ℃，包合時(shí)間為4 h，加油速率為40 mL/min。

2.4.2膠體磨法包合最佳工藝

影響膠體磨法包合的主要因素有揮發(fā)油和β-環(huán)糊精比例（因素A）、加水量（因素B）、研磨時(shí)間（因素C）等，通過L4（23）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，方差分析結(jié)果見表7。

由方差分析結(jié)果得出，影響膠體磨法包合乳香油的因素順序?yàn)镃>A>B，其中研磨時(shí)間（因素C）、揮發(fā)油和β-環(huán)糊精比例（因素A）影響極顯著，加水量（因素B）無顯著性影響。綜合考慮，確定膠體磨法包合工藝水平的最優(yōu)條件：即揮發(fā)油和β-環(huán)糊精比例為1∶3，加水量為3倍，研磨時(shí)間為30 min。

2.5兩種包合方法最優(yōu)工藝驗(yàn)證

用正交試驗(yàn)得出的包合乳香油的最優(yōu)工藝參數(shù)進(jìn)行包合，每種方法各3批，具體試驗(yàn)所用物料、包合時(shí)間及包合物綜合評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)見表8。

由驗(yàn)證數(shù)據(jù)不難看出，兩種包合方法得率差別不大，但膠體磨法的包合率較飽和水溶液法要高一些。另外，從經(jīng)濟(jì)角度考慮，膠體磨法所使用的物料要少很多，且包合時(shí)間較飽和水溶液法大大縮短，因此，考慮到企業(yè)生產(chǎn)成本問題，建議選用膠體磨法[17-18]。

3結(jié)語

1）通過正交試驗(yàn)，對(duì)舒筋通絡(luò)顆粒中的乳香提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，采用水蒸氣蒸餾法提取，加水量和提取時(shí)間對(duì)乳香揮發(fā)油收率具有極顯著性影響，浸泡時(shí)間和藥材粒徑并無顯著性影響。

2）通過比較兩種包合方法的工藝條件可知，膠體磨法比飽和水溶液法使用的β-環(huán)糊精量少，包合時(shí)間短，工藝簡(jiǎn)便，且包合物得率及揮發(fā)油的利用率綜合評(píng)定較高。膠體磨法包合乳香揮發(fā)油工藝具有節(jié)約、簡(jiǎn)便、高效、質(zhì)優(yōu)等優(yōu)點(diǎn)。

3）本次試驗(yàn)未對(duì)包合物進(jìn)行成分檢測(cè)確認(rèn)，后續(xù)工作將持續(xù)開展兩種不同包合方式對(duì)乳香揮發(fā)油成分的檢測(cè)研究。

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