徐仿敏 姜兆林 劉凌云 魏萬(wàn)里

（1 江陰市公安局物證鑒定室 江蘇 江陰 214431；2 中國(guó)刑事警察學(xué)院法化學(xué)系 遼寧 沈陽(yáng) 110035；3 無(wú)錫市公安局物證鑒定所 江蘇 無(wú)錫 214401）

1 引言

新精神活性物質(zhì)是指未被《1961年麻醉品單一公約》或《1971年精神藥物公約》管制，但以單體純凈物或制劑的形式濫用，會(huì)對(duì)公眾健康帶來威脅的物質(zhì)[1]。近幾年，新精神活性物質(zhì)問題在全球范圍內(nèi)發(fā)展迅猛，根據(jù)聯(lián)合國(guó)毒品與犯罪問題辦公室最新監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，2009～2016年，全球103個(gè)國(guó)家和地區(qū)共報(bào)告出現(xiàn)739種不同的新精神活性物質(zhì)，主要包括合成大麻素類、合成卡西酮類、新苯二氮卓類、苯乙胺類、哌嗪類等[2]，其中以合成大麻素類、合成卡西酮類和新苯二氮卓類為主，大約占全部新精神活性物質(zhì)的70%以上[3]。目前，我國(guó)國(guó)內(nèi)出現(xiàn)的新精神活性物質(zhì)主要包括合成大麻素類[4-6]、卡西酮類[7-8]、新苯二氮卓類[9]、哌嗪類[10]這幾類。

近幾年，在非法藥物市場(chǎng)上出現(xiàn)一些新的苯二氮卓類藥物，該類藥物與傳統(tǒng)的苯二氮卓類藥物結(jié)構(gòu)類似，具有相似的藥理作用，但沒有被任何國(guó)家批準(zhǔn)作為藥物來使用。這些物質(zhì)主要以片劑、膠囊、粉劑的形式銷售，目前出現(xiàn)的新的苯二氮卓類藥物主要包括氯硝唑侖（clonazolam）、2’-氯地西泮（diclazepam）、依替唑侖（etizolam）、氟溴馬唑侖（flubromazolam）等[2]。

2’-氯地西泮，英文名稱Diclazepam，2'-chlorodiazepam，又稱Ro 5-3448，化學(xué)名稱：7-氯-5-（2-氯苯基）-1，3-二氫-1-甲基-2H-1，4-苯并二氮雜卓-2-酮，分子式：C16H12Cl2N2O，分子量：319，它的化學(xué)結(jié)構(gòu)與地西泮類似，具有抗焦慮、抗驚厥、鎮(zhèn)靜和肌肉松弛等作用[11-12]，其藥效是地西泮的4～8倍[13]。2’-氯地西泮在20世紀(jì)60年代被首次合成[14]，歐洲藥物與毒癮監(jiān)測(cè)中心于2013年發(fā)現(xiàn)其首次出現(xiàn)在非法藥物市場(chǎng)[15]。英國(guó)已于2017年將2’-氯地西泮列為C類毒品進(jìn)行管制[16]，而在我國(guó)還未被列入管制范圍之內(nèi)，也未見相關(guān)研究文獻(xiàn)報(bào)道。

本文采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）、傅立葉變換紅外光譜法（FT-IR）和核磁共振波譜法（NMR）聯(lián)用技術(shù)對(duì)案件中繳獲的新精神活性物質(zhì)進(jìn)行定性檢驗(yàn)。通過與國(guó)際繳獲毒品分析科學(xué)工作組織（SWGDRUG）提供的譜庫(kù)進(jìn)行檢索比對(duì)，并用1H NMR 譜圖對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行進(jìn)一步的確證，確定新精神活性物質(zhì)為2’-氯地西泮。該方法簡(jiǎn)單且實(shí)用，已成功應(yīng)用于實(shí)際案件的檢驗(yàn)工作，并取得較為滿意的結(jié)果。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

賽默飛Trace1310-ISQ LT氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀；Nicolet IS50傅立葉變換紅外光譜儀；甲醇（色譜純，購(gòu)于Sigma公司）；布魯克AVANCE 300MHz核磁共振波譜儀。

2.2 分析條件

2.2.1 色譜條件

色譜柱：VF-5ms（30m×0.25mm DF=0.25）；柱溫：80℃，保持1min，20℃ /min 升至280℃，保持19min；載氣：He；流速：1.0mL/min ；進(jìn)樣口溫度：280℃ ；進(jìn)樣量1μL，分流進(jìn)樣，分流比為20。

2.2.2 質(zhì)譜條件

離子源溫度：300℃ ；傳輸線溫度：280℃ ；離子源：EI源；EI 電壓：70ev；掃描范圍：45~450amu；溶劑延遲：3.5min；全掃描模式（Full Scan）采集總離子流色譜圖。

2.2.3 紅外光譜條件

掃描范圍4000~550cm-1；掃描次數(shù)32次；分辨率4 cm-1；光圈：100；DTGS 檢測(cè)器。

2.2.4 核磁共振條件

采集參數(shù)：PROBHD 5mm PABBO BB-；PULPROG zg30；TD 65536；溶劑為氘代氯仿；NS 16；DS 2；SWH 6009.615Hz；FIDRES 0.094699Hz；AQ 5.4525952 sec；RG 203； DW 83.200 usec；DE 6.50usec；處理參數(shù)：SI 65536；SF 300.1318534 MHz；WDW EM；SSB 0；LB 0.2Hz；GB 0；PC 1.00。

2.3 樣品處理

2.3.1 GC-MS分析

案件中繳獲的未知片劑如圖1所示，研磨后，取約5mg樣品，置于15mL具塞試管中，加入10mL甲醇溶液，超聲5min，離心后，取上清液1.5mL于自動(dòng)進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)，供GC-MS分析。

2.3.2 FT-IR分析

取未知片劑10粒，研磨后用適量甲醇溶解，超聲10min，離心后吸取上清液揮干，重結(jié)晶后得到白色晶體，如圖2所示。取上述白色晶體少許，直接置于傅里葉變換紅外光譜儀的ATR附件上進(jìn)行FT-IR分析。

圖1 繳獲的未知片劑

圖2 未知樣品中提取的白色晶體

2.3.3 NMR分析

取約10mg重結(jié)晶后的白色晶體，置于核磁管中，加入1mL含有TMS的氘代氯仿，使樣品充分溶解，供核磁檢測(cè)。

3 結(jié)果與討論

3.1 GC-MS 分析

將2.3.1中的樣品溶液按照2.2所述的分析條件進(jìn)行GC-MS分析，得到空白溶劑和未知樣品的總離子流色譜圖，如圖3所示，由總離子流色譜圖可以發(fā)現(xiàn)在保留時(shí)間12.39min處出現(xiàn)色譜峰。其主要特征碎片離子（m/z）為283（基峰）、290、318、255。通過與已知質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)（Mainlib、Replib、Wiley、Nist）進(jìn)行譜庫(kù)檢索，未得到匹配結(jié)果。將質(zhì)譜圖與SWGDRUG組織提供的質(zhì)譜庫(kù)進(jìn)行檢索比對(duì)，得到檢索結(jié)果顯示與“Diclazepam”的質(zhì)譜圖匹配一致，如圖4所示。通過對(duì)Diclazepam的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析，發(fā)現(xiàn)其特征碎片離子主要是以斷裂C=O和Cl的方式進(jìn)行斷裂而得到，如圖5所示。

圖3 空白溶劑與未知樣品的總離子流色譜圖

圖4 未知樣品與SWGDRUG提供的譜庫(kù)檢索圖

圖5 2’-氯地西泮的主要斷裂方式

3.2 FT-IR分析

在2.2.3所述的儀器條件下，進(jìn)行FT-IR分析，得到未知樣品紅外光譜圖，如圖6所示。在1700～550 cm-1指紋區(qū)的特征吸收峰較為明顯，其主要特征吸收峰波數(shù)位置如表1所示。通過儀器自帶的紅外光譜圖譜庫(kù)的檢索，未找出與之相匹配的紅外光譜圖。將未知樣品的紅外光譜圖與SWGDRUG提供的Diclazepam紅外光譜圖[17]（如圖7所示）進(jìn)行比對(duì)，特征吸收峰的比對(duì)結(jié)果一致，可以確認(rèn)該未知樣品即為Diclazepam。

圖6 未知樣品的紅外光譜圖

圖7 2’-氯地西泮的紅外光譜圖

3.3 H NMR分析

為進(jìn)一步驗(yàn)證該未知樣品的結(jié)構(gòu)，對(duì)其進(jìn)行了核磁共振氫譜檢測(cè)，1HNMR譜圖如圖8所示。譜圖中δ 7.26ppm是氘代氯仿的溶劑峰，未知樣品的化學(xué)位移δ、分裂峰數(shù)及歸屬情況詳見表2。通過結(jié)構(gòu)分析，進(jìn)一步證實(shí)該未知樣品為2’-氯地西泮。

表1 未知樣品與2’-氯地西泮的紅外特征吸收波數(shù)

圖8 未知樣品的1HNMR譜圖

4 討論

4.1 體內(nèi)代謝過程

Moosmann等[18]通過藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究了2’-氯地西泮的體內(nèi)代謝途徑，如圖9所示。2’-氯地西泮經(jīng)過N-去甲基化和4-羥基化代謝為地洛西泮和洛甲西泮，進(jìn)一步代謝為勞拉西泮。健康自愿者服用1mg的2’-氯地西泮，最高血濃度出現(xiàn)在服藥后3h，洛甲西泮、地洛西泮和勞拉西泮的最大濃度分別出現(xiàn)在服藥后6h、36h、99h，通過Kinetica 5.1軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，推斷出2’-氯地西泮的半衰期為42 h。在服藥后3～56h內(nèi)收集的尿液中可以檢出微量的2’-氯地西泮，尿液中的3種代謝物以葡萄糖醛酸結(jié)合的形式存在，經(jīng)過β-葡萄糖醛酸酶水解后，服藥3h至6d收集的尿液能檢出地洛西泮，11d收集的尿液能檢出洛甲西泮，19d收集的尿液能檢出勞拉西泮。這些代謝數(shù)據(jù)可以為該類案件的檢驗(yàn)提供參考。

圖9 2’-氯地西泮體內(nèi)代謝過程

4.2 案例檢驗(yàn)

2017年10月，華東某市某女被害人被犯罪嫌疑人下藥迷暈后強(qiáng)奸，醒來后仍然記憶模糊，記不清發(fā)生何事。大約距事發(fā)48h后至公安機(jī)關(guān)報(bào)案，隨后公安機(jī)關(guān)采集被害人的血液和尿液，送至筆者所在檢測(cè)單位進(jìn)行檢驗(yàn)。尿液經(jīng)過苯二氮卓類免疫檢測(cè)板初步檢測(cè)，呈現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，血液和尿液經(jīng)過固相萃取提取處理后，進(jìn)行GC-MS檢測(cè)，在被害人的血液中檢出2’-氯地西泮和地洛西泮，如圖10所示；尿液中未檢出2’-氯地西泮，檢出地洛西泮、洛甲西泮和勞拉西泮，如圖11所示。

圖10 被害人血液中2’-氯地西泮（A）和地洛西泮（B）的色譜圖和質(zhì)譜圖

圖11 被害人尿液中勞拉西泮（A）、洛甲西泮（B）和地洛西泮（C）的色譜圖和質(zhì)譜圖

5 結(jié)論

2’-氯地西泮自20世紀(jì)60年代合成以來在全球范圍內(nèi)均沒有被批準(zhǔn)作為藥物使用，因此在近幾十年中從未出現(xiàn)。然而伴隨近些年網(wǎng)絡(luò)信息化的快速發(fā)展，2’-氯地西泮在互聯(lián)網(wǎng)中被當(dāng)作“聽話水”、“乖乖水”、安眠藥進(jìn)行販賣，被一些不法分子用來實(shí)施搶劫、強(qiáng)奸等犯罪活動(dòng)，應(yīng)引起我國(guó)相關(guān)部門的充分重視。

本文建立了基于氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、傅立葉變換紅外光譜法和核磁共振波譜法聯(lián)合技術(shù)鑒別2’-氯地西泮的檢驗(yàn)方法，并對(duì)紅外特征吸收峰、質(zhì)譜的碎裂方式和核磁氫譜中質(zhì)子的歸屬進(jìn)行了初步探索，得出2’-氯地西泮的相關(guān)分析數(shù)據(jù)。該方法簡(jiǎn)便、快捷、實(shí)用，能夠?qū)π戮窕钚晕镔|(zhì)進(jìn)行定性檢驗(yàn)，具有較好的應(yīng)用前景。