朱艷紅 王明新

【摘 要】 目的：采用HPLC-MS/MS測定珠蘇木丸中川楝素含量的方法。方法：采用WatersXBridge C18色譜柱（2.1mm×100mm，2.5μm），以乙腈-0.01%甲酸溶液（31∶[KG-*3/5]69）為流動相；質(zhì)譜使用電噴霧電離源（ESI）負(fù)離子模式，多反應(yīng)檢測（MRM）掃描方式檢測，定性離子對為m/z 573/531和m/z 573/425。結(jié)果：川楝素對照品在0.002019～0.030285μg范圍內(nèi)與兩個峰面積之和具有良好的線性關(guān)系（r=0.9998），平均加樣回收率為99.7%，RSD=0.2%（n=6）。結(jié)論：該方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確性好，可用于珠蘇木丸中川楝素的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 川楝素；珠蘇木丸；HPLC-MS/MS

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2018）16-0020-02

Abstract：Objective The content of toosendanin in Zhusumu Pill eas determined. Methods The HPLC-MS/MS analysis was performed on a column with octadecylsilance-bonded silica gel as the packing material， eluted with acetonitrile-0.01% formic acid solution （31∶69）. Negative ion mode of electrospray ionization source（ESI） by mass spectrometry， Multi-reaction detection（MRM） scanning method， qualitative ion pair is m/z 573/531 and m/z 573/425. Results There was a good linear relationship between 0.002019～0.030285μg in the injection volume of toosendanin（r=0.9998）， with the average recoveries were 99.7% and the RSD was 0.2%（n=9）. Conclusion The method is stable and accurate.It could be used for the quality control of Zhusumu Pill.

Keywords：Toosendanin；Zhusumu Pill；HPLC-MS/MS

珠蘇木丸是呼倫貝爾市人民醫(yī)院制劑，由川楝子、公丁香、建蓮子、紫檀香、水牛角濃縮粉、人工牛黃、麥冬、木香、訶子、川楝子、梔子、甘松十味藥組成的復(fù)方制劑。具有清肝熱，除“亞瑪”病，解毒的功效，用于肝熱胸膈，配毒癥，“亞瑪”病，腰腎損傷，尿頻，尿血，尤其對血熱引起的眼病有效。川楝子為該方中主要成份之一，對本方的臨床療效有重要作用，以川楝子中主要有效成分川楝素為定量監(jiān)控指標(biāo)可有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。本研究采用HPLC-MS/MS法測定其中川楝素的含量，方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確性好，可作為質(zhì)量控制的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LCMS-8030液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（島津公司）。

1.2 材料 川楝素（批號：111842-201503，含量96.8%，中國食品藥品檢定研究院），珠蘇木丸（批號：20171208、20170606、20170612，呼倫貝爾市人民醫(yī)院制劑室）。甲醇為色譜純，水為高純水，乙腈為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：WatersXBridge C18柱（100mm×2.1mm，2.5μm）；流動相：乙腈-0.01%甲酸溶液（31∶69）；進(jìn)樣量：5μL。

2.2 質(zhì)譜條件 離子源：電噴霧電離源（ESI）；掃描方式：負(fù)離子模式；檢測方式：多反應(yīng)檢測（MRM）掃描方式檢測；DL溫度：250℃；加熱塊溫度：400℃；載氣流速：3L/min；碎裂電壓：-17.0V；定性離子對為m/z 573/531和m/z 573/425。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取川楝素對照品適量，加甲醇制成每1mL含川楝素0.02019mg/mL，精密量取5mL對照品貯備液，置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。

2.3.2 供試品溶液 取珠蘇木丸，研細(xì)（過三號篩），取粉末1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 陰性對照溶液 按照珠蘇木丸的制備工藝制備不含川楝子的陰性對照樣品，并按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性對照溶液。

2.4 專屬性試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各5μL進(jìn)行測定，結(jié)果：陰性對照色譜在川楝素兩個峰保留時間處無干擾。結(jié)果如圖1所示。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取配制好的對照品溶液1、3、5、7、10、15μL分別進(jìn)樣。以兩個峰面積之和為縱坐標(biāo)，以對照品進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為Y=55411545.7X-285.89，r=0.9998，川楝素進(jìn)樣量在0.002019～0.030285μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下的對照品溶液5μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測得川楝素兩個峰面積之和平均值為556976.5，RSD為0.5%，表明儀器的精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品（20171208）珠蘇木丸供試品6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，進(jìn)行測定含量。結(jié)果川楝素含量的平均值（n=6）為57.6μg/g，RSD為0.4%，表明實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號（20171208）珠蘇木丸供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，24h按上述色譜條件測定，測得川楝素峰面積的RSD（n=6）0.8%。結(jié)果表明供試品溶液室溫放置24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品約0.8g，共6份，分別精密加入一定量的川楝素對照品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，測定含量，并計算回收率。結(jié)果見表1。川楝素平均回收率（n=6）為99.7%。

2.10 樣品測定 取珠蘇木丸，按上述供試品溶液制備方法制備，并按上述色譜測定，結(jié)果見表2。

3 討論

參考《中國藥典》2015年版一部川楝子的含量測定方法中的樣品提取及色譜條件對珠蘇木丸中川楝素進(jìn)行分析，運(yùn)用HPLC-MS/MS尋找出定量離子進(jìn)行含量測定，此方法樣品前處理簡單、回收率高、專性強(qiáng)，可作為珠蘇木丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，能夠有效控制樣品的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1]馬永青，劉曉明，劉永利.UPLC-MS/MS法測定舒肝丸中川楝素的含量[J].藥物分析雜志，2017，37（3）：545-549.

[2]周英，王慧娟，郭東貴，等.川楝子化學(xué)成分的研究（Ⅰ）[J].中草藥，2010，41（9）：1421-1423.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：42.

[4]李豐，朱訓(xùn)，陳敏，等.川楝子化學(xué)成分研究[J].中藥材， 2010， 33（6）：910-912.

（收稿日期：2018-06-06 編輯：程鵬飛）