王紅娟 李彥科 程雯

【摘 要】 目的：優(yōu)化氣血和膠囊中芍藥苷含量的測定方法。方法：色譜柱為Knauer C18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水（20∶[KG-*3/5]80），流速1.0mL/min，檢測波長230nm，柱溫35℃。結(jié)果：氣血和膠囊中芍藥苷的含量0.01701～0.3428μg濃度之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.9997，平均回收率98.58%，RSD=1.03%（n=6）。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可以作為氣血和膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

【關(guān)鍵詞】 氣血和膠囊；高效液相；芍藥苷

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2018）16-0015-03

Abstract：Objective To optimize the determination of paeoniflorin in blood and capsules. Methods The column was a Knauer C18 column. The mobile phase was acetonitrile-water （20∶[KG-*3/5]80）. The flow rate was 1.0 mL/min. The detection wavelength was 230nm and the column temperature was 35 °C. Results The content of paeoniflorin in Qixue and capsule was 0.01701～0.3428μg and the peak area showed a good linear relationship， r=0.9997， the average recovery was 98.58%， RSD was 1.03%（n=6）. Conclusion This method is simple， accurate， and highly specific. It can be used as a quality control standard for blood and capsules.

Keywords：Qi Blood and Capsule； High Performance Liquid； Paeoniflorin

氣血和膠囊是由當(dāng)歸、赤芍、川芎、桃仁、紅花、桔梗、牛膝、枳殼等15味藥物組成，具有舒肝理氣、活血止痛的功效，用于婦女月經(jīng)過少、經(jīng)期后錯(cuò)、行氣不暢、經(jīng)色暗紅有血塊、小腹或少腹疼痛、乳房脹痛、或伴有面部色素沉著[1]。本方原為散劑，為了便于服用和生產(chǎn)，因此將其改為膠囊劑，同時(shí)建立了采用高效液相色譜法測定芍藥苷含量的方法，為后期新藥開發(fā)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1100型高效液相儀（美國Agilent公司）；ISO9001型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；TDL-40B臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器公司），AS系列超聲儀（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）。

1.2 材料 芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-200630，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜純，美國Fisher公司）；乙腈（色譜純，美國Fisher公司）；水為超純手（娃哈哈純凈水）；氣血和膠囊樣品及陰性供試品（均系實(shí)驗(yàn)室自制），其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Knauer C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（20∶[KG-*3/5]80）；檢測波長230nm；柱溫：30℃，流速1.0mL/min，進(jìn)樣量20μL，理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 樣品的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的芍藥苷對(duì)照品4.2850mg置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備液；精密吸取儲(chǔ)備液1mL置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配制成對(duì)照品（17.14μg/mL）溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物0.6g精密稱量，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，離心，取上清液，精密吸取濾液5mL，水浴蒸干，殘?jiān)?mL流動(dòng)相溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液[2]。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備 按處方中藥味比例配制不含赤芍的陰性供試品，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，即可。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 精密吸取上述照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各20μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。在該系統(tǒng)條件下，供試品溶液與對(duì)照品溶液在相應(yīng)的位置上有相同的色譜峰，主峰與其它組分的分離良好，陰性供試品在相應(yīng)位置無干擾峰出現(xiàn)。如圖1所示。

2.3.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1、5、10、15、20μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄峰面積，以進(jìn)樣量（X，μg）、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=1546.59X-135.2377，r=0.9999（n=6）。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0.01701～0.3428μg范圍內(nèi)與峰面積積分線值保持良好線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液20μL，按上述色譜條件注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果測得峰面積RSD=0.97%。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一批供試品溶液各20μL，分別于0、2、4、6、8h按上述色譜條件進(jìn)行測定，RSD=0.87%，結(jié)果表明供試品溶液在制備后8h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取供試品（批號(hào)：150101）共5份，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件注入液相色譜儀，測定，計(jì)算，樣品中芍藥苷的平均含量為0.74mg/g，RSD=1.61%，結(jié)果表明本法的重現(xiàn)性良好。

2.3.6 樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批已知含量的供試品（批號(hào)：150101）6份，每份約0.6g，分別精密加入1、2、4mL的芍藥苷對(duì)照品（17.14μg/mL）儲(chǔ)備液各2份，按供試品制備與測定方法操作，結(jié)果見表1。

2.3.7 樣品測定結(jié)果 取5批氣血和膠囊，依法制備和測定，記錄芍藥苷峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表2。結(jié)果表明5批氣血和膠囊中芍藥苷的含量均大于0.20（mg/粒）。

3 討論

赤芍為氣血和膠囊處方中主要藥物之一，而芍藥苷是其主要有效成分，因此選擇芍藥苷作為控制氣血和膠囊的質(zhì)量的指標(biāo)成分，用高效液相法測定芍藥苷含量。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵在于根據(jù)具體情況有效的排除其它成分的干擾，因此本實(shí)驗(yàn)采用先超聲，過濾，蒸干，然后用流動(dòng)相溶解方法處理樣品，收得滿意效果[3]。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)經(jīng)過方法學(xué)分析的過程中，參考了中國藥典中芍藥苷的測定方法[4]，反復(fù)試驗(yàn)，最終得芍藥苷的測定方法為：乙腈-水（20∶[KG-*3/5]80）作流動(dòng)相，在流速為1.0mL/min，柱溫35℃時(shí)進(jìn)行測定，峰形分離度好，且陰性供試品在此處無干擾，這與中國藥典的測定方法不同，需要進(jìn)一步的驗(yàn)證和分析。本實(shí)驗(yàn)方法簡便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性、回收率均較好，可以用于對(duì)氣血和膠囊進(jìn)行質(zhì)量控制。同時(shí)，當(dāng)歸也是氣血和膠囊中的藥物之一，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，將進(jìn)一步測定當(dāng)歸中阿魏酸的含量，更好地完善氣血和膠囊的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

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[2]王禎旭.高效液相色譜法測定舒肝和胃丸中芍藥苷的含量[J].中國藥業(yè)，2017，26（3）：25-27.

[3]盧艷花.中藥有效成分提取分離技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：32-33.

[4]中華人民共和國藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：105.

（收稿日期：2018-06-07 編輯：程鵬飛）