李燕君，譚梅，張鳳萍，呂曉華，*

（1.四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院，四川成都610041；2.格爾木云朵枸杞有限責(zé)任公司，青海格爾木816099）

視疲勞指以眼部癥狀為基礎(chǔ)，由眼或全身、精神（心理）等因素而引起的一系列疲勞綜合征，臨床表現(xiàn)為視物模糊、眼干澀、酸脹、流淚等癥狀[1]。隨著各種電子視頻產(chǎn)品的推廣普及，目前視疲勞在各年齡人群中愈來(lái)愈常見。枸杞和沙棘藥食兼用的歷史悠久，既是食品又是藥品。枸杞富含枸杞多糖、黃酮、葉黃素、玉米黃素，沙棘富含維生素A、維生素C、維生素E及黃酮類物質(zhì)，可望成為開發(fā)緩解視疲勞保健食品的優(yōu)選原料[2-3]。目前，雖已有研究表明枸杞、沙棘對(duì)改善視力、緩解視疲勞有較大作用，但該方面的系統(tǒng)研究較少，本文通過人體試飲試驗(yàn)評(píng)價(jià)枸杞沙棘濃漿的緩解視疲勞作用，為青海地區(qū)枸杞和沙棘資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品

枸杞沙棘濃漿由格爾木云朵枸杞有限責(zé)任公司提供，人體推薦劑量為75 g/d。參照GB 5009.12-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測(cè)定》、GB 5009.11-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中總砷及無(wú)機(jī)砷的測(cè)定》、GB 4789.2-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》、GB 4789.4-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》、GB 4789.10-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品中鉛、砷、菌落總數(shù)、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌。

1.2 研究對(duì)象

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)

1）年齡在20歲～80歲；2）每天用眼時(shí)間超過6 h；3）具有一定的閱讀能力，自愿且知情同意參加本研究者；4）能遵從研究方案，試驗(yàn)期間能堅(jiān)持飲用枸杞沙棘濃漿。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

1）患有外傷性、感染性眼部疾患，進(jìn)行眼部手術(shù)不足3個(gè)月者；2）患有角膜、晶體、玻璃體、眼底病變等內(nèi)外眼疾患者；3）患有肝、腎、造血、心腦血管等系統(tǒng)疾病者；4）妊娠或哺乳期婦女、對(duì)枸杞、沙棘類產(chǎn)品過敏者；5）近期正在服用或服用過與緩解視疲勞功能有關(guān)的物品，影響到對(duì)結(jié)果的判定者；6）長(zhǎng)期服用或使用有助于視力改善的藥物、保健食品或其他治療方法，且目前尚未結(jié)束者；7）試驗(yàn)期間，不能堅(jiān)持飲用受試樣品，或資料不全影響觀察結(jié)果者。

1.3 主要儀器和試劑

1.3.1 主要儀器

BC-5380型全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀：邁瑞南京生物技術(shù)有限公司；奧林巴斯AU400全自動(dòng)生化儀：日本奧林巴斯集團(tuán)；百勝DU 6型彩色超聲診斷儀：意大利百勝（深圳）醫(yī)療設(shè)備有限公司；PhilipsSonos 5500型彩色多普勒超聲診斷儀：荷蘭皇家飛利浦電子公司；ECG-9620P2三導(dǎo)自動(dòng)分析心電圖儀：上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司；Waters2695型高效液相色譜儀：美國(guó)Waters公司。

1.3.2 主要試劑

血細(xì)胞分析用稀釋液、血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)哼~瑞南京生物技術(shù)有限公司；葡萄糖測(cè)定試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)160991）、高密度脂蛋白膽固醇試劑盒：中生北控生物科技（北京）有限公司；總膽固醇試劑盒、甘油三酯試劑盒：北京柏定生物工程有限公司；β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品：Sigma公司。

1.4 研究?jī)?nèi)容

1.4.1 功效成分檢測(cè)

參照GB 5009.86-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中抗壞血酸的測(cè)定》、GB 5009.83-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中胡蘿卜素的測(cè)定》、GB 5009.82-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素A、D、E的測(cè)定》、NY/T 1676-2008《食用菌中粗多糖含量的測(cè)定》、GB/T 20574-2006《蜂膠中總黃酮含量的測(cè)定方法分光光度比色法》等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)枸杞沙棘濃漿中的維生素C、β-胡蘿卜素、α-生育酚、粗多糖、總黃酮、玉米黃素、葉黃素含量。

1.4.2 人體試飲試驗(yàn)

根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)選取試飲志愿者43人，其中男性21人，女性22人，（50.1±29.9）歲。試飲志愿者本人簽署知情同意書，按75 g/d飲用枸杞沙棘濃漿，連續(xù)60 d。

1.4.2.1 安全性指標(biāo)

1）血、尿常規(guī)檢查，體格檢查。

2）肝、腎功能檢查。

3）胸透或X光片、心電圖、腹部B超檢查（于試食前檢查一次）。

1.4.2.2 功效性指標(biāo)（于試食開始及結(jié)束時(shí)檢查）

1）視疲勞問卷調(diào)查：癥狀詢問、用眼情況。

2）視力檢查（近視、遠(yuǎn)視、散光等）。

3）明視持久度。觀察“品”字圖，測(cè)定時(shí)間設(shè)為3 min，觀察到“品”字的時(shí)長(zhǎng)即為明視時(shí)間。

1.5 功效判定標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1 癥狀改善有效率

眼酸痛、眼脹、畏光、視物模糊、眼干澀、異物感、流淚，全身不適等8種癥狀中有3種改善，且其他癥狀無(wú)惡化即判定癥狀改善。

1.5.2 癥狀平均積分

根據(jù)調(diào)查問卷計(jì)算每位志愿者試飲前后的癥狀積分。

1.5.3 明視持久度

試飲者自身比較，明視持久度差異有顯著性（P＜0.01），且平均明視持久度提高大于等于10%為有效。

1.5.4 視力改善率

以試飲后較試飲前提高兩行為改善，并以此為參考指標(biāo)。參考指標(biāo)不作為對(duì)緩解視疲勞功能是否有效的判定標(biāo)準(zhǔn)。

1.5.5 結(jié)果判定

試飲者自身比較，癥狀改善且癥狀總積分差異有顯著性（P＜0.01），及明視持久度差異有顯著性（P＜0.01），且平均明視持久度提高≥10%，可判定該受試物具有緩解視疲勞功能。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用PEMS for Windows 3.1統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，以表示。試驗(yàn)采用自身前后對(duì)照的配對(duì)設(shè)計(jì)，各指標(biāo)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.01。

2 結(jié)果與分析

2.1 枸杞沙棘濃漿的理化和微生物指標(biāo)

枸杞沙棘濃漿的食品安全性指標(biāo)見表1。

表1 枸杞沙棘濃漿的食品安全性指標(biāo)Table 1 Food safety index of goji berry and sea buckthorn concentration

如表1所示，枸杞沙棘濃漿樣品鉛、砷、菌落總數(shù)、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌等理化和微生物指標(biāo)均在限量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。

2.2 枸杞沙棘濃漿的功效成分含量

枸杞沙棘濃漿的功效成分含量見表2。

表2 枸杞沙棘濃漿的功效成分含量Table 2 Functional component content of goji berry and sea buckthorn concentration

如表2所示，枸杞沙棘濃漿樣品中維生素C、β-胡蘿卜素、α-生育酚、粗多糖、總黃酮、玉米黃素和葉黃素等成分含量較高。

2.3 枸杞沙棘濃漿對(duì)志愿者視疲勞癥狀的影響

枸杞沙棘濃漿對(duì)志愿者視疲勞癥狀和視疲勞癥狀積分的影響見表3和表4。

表3 枸杞沙棘濃漿對(duì)志愿者視疲勞癥狀的影響Table 3 Effects of goji berry and sea buckthorn concentration on visual fatigue symptoms of volunteers

表4 枸杞沙棘濃漿對(duì)志愿者視疲勞癥狀積分的影響（n=43）（±s）Table 4 Effects of goji berry and sea buckthorn concentration on visual fatigue symptom score of volunteers（n=43）（±s）

表4 枸杞沙棘濃漿對(duì)志愿者視疲勞癥狀積分的影響（n=43）（±s）Table 4 Effects of goji berry and sea buckthorn concentration on visual fatigue symptom score of volunteers（n=43）（±s）

注：*表示與試飲前比較，P＜0.01，差異顯著。

癥狀 試飲前積分 試飲后積分眼脹 1.47±0.91 0.79±0.77*眼酸痛 1.28±0.88 0.46±0.70*畏光 1.21±0.94 0.63±0.69*視物模糊 1.72±0.80 0.93±0.63*眼干澀 1.63±0.93 1.00±0.87*異物感 0.95±0.75 0.47±0.59*流淚 1.23±0.92 0.53±0.59*全身癥狀 0.30±0.60 0.09±0.29*總分 9.79±3.98 4.91±3.08*

如表3和表4所示，試飲受枸杞沙棘濃漿60天后，試飲志愿者眼酸痛、眼脹、畏光、視物模糊、眼干澀、異物感、流淚，全身不適等8種癥狀均有所改善，癥狀改善有效率為76.7%。癥狀積分顯著下降（P＜0.01）。

2.4 枸杞沙棘濃漿對(duì)志愿者明視持久度和視力的影響

枸杞沙棘濃漿對(duì)明視持久度和視力的影響見表5。

表5 枸杞沙棘濃漿對(duì)明視持久度和視力的影響（n=43）（±s）Table 5 Effects of goji berry and sea buckthorn concentration on visuognosis persistence and vision（n=43）（±s）

表5 枸杞沙棘濃漿對(duì)明視持久度和視力的影響（n=43）（±s）Table 5 Effects of goji berry and sea buckthorn concentration on visuognosis persistence and vision（n=43）（±s）

注：*表示與試飲前比較，P＜0.01，差異顯著。

項(xiàng)目 明視時(shí)間/s 明視持久度/% 左眼視力 右眼視力試飲前 118.79±19.96 65.99±11.09 4.00±0.27 3.97±0.23試飲后 137.05±16.89* 76.14±9.38* 3.98±0.29 3.95±0.28提高值 16.26 10.15

如表5所示，試飲枸杞沙棘濃漿60天后，試飲志愿者明視時(shí)間延長(zhǎng)（P＜0.01），明視持久度顯著提高（P＜0.01），平均明視持久度提高10.15%。雙眼視力無(wú)明顯變化。

2.5 枸杞沙棘濃漿對(duì)志愿者血液安全性指標(biāo)的影響

枸杞沙棘濃漿對(duì)志愿者血液安全性指標(biāo)的影響見表6。

表6 枸杞沙棘濃漿對(duì)志愿者血液安全性指標(biāo)的影響（n=43）（±s）Table 6 Effects of goji berry and sea buckthorn concentration on the blood safety indexes of volunteers（n=43）（±s）

表6 枸杞沙棘濃漿對(duì)志愿者血液安全性指標(biāo)的影響（n=43）（±s）Table 6 Effects of goji berry and sea buckthorn concentration on the blood safety indexes of volunteers（n=43）（±s）

項(xiàng)目 試飲前 試飲后紅細(xì)胞/（×1012/L）4.56±0.394.66±0.42白細(xì)胞/（×109/L）6.17±1.526.00±1.06血紅蛋白/（g/L）135.48±12.91136.12±10.33血清總蛋白/（g/L）74.58±4.0672.96±3.99血清白蛋白/（g/L）46.17±2.2646.26±3.35谷丙轉(zhuǎn)氨酶/（U/L）20.38±2.6420.00±1.99谷草轉(zhuǎn)氨酶/（U/L）21.77±7.7520.99±6.28尿素氮/（mmol/L）4.59±1.184.50±1.00肌酐/（μmol/L）74.80±17.8270.95±16.90血尿酸/（μmol/L）316.69±95.51299.54±100.64血清膽固醇/（mmol/L）4.51±0.834.47±0.56血清甘油三酯/（mmol/L）1.23±0.701.32±0.89血糖/（mmol/L）5.03±0.485.09±0.33

如表6所示，試飲前、后志愿者的血液安全性指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，且前后無(wú)顯著性差異。

3 討論

本研究采用自身對(duì)照設(shè)計(jì)，試飲志愿者按75 g/d飲用枸杞沙棘濃漿，連續(xù)60 d。結(jié)果表明：試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，試飲者視疲勞癥狀改善且癥狀總積分顯著下降，明視持久度相比試飲前顯著提高，且平均明視持久度提高10.15%。依據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)食藥監(jiān)保化[2012]107號(hào)“關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評(píng)價(jià)方法等9個(gè)保健功能評(píng)價(jià)方法的通知”，結(jié)果提示枸杞沙棘濃漿具有緩解視疲勞作用。

研究證明，多種營(yíng)養(yǎng)素對(duì)緩解和改善視疲勞有較大作用[4]。本研究采用的枸杞沙棘濃漿含β-胡蘿卜素、維生素C、維生素E、葉黃素、玉米黃素等營(yíng)養(yǎng)成分，對(duì)維持眼睛健康、緩解視疲勞具有重要作用。β-胡蘿卜素是維生素A原活性最高的一種類胡蘿卜素，可在小腸上皮細(xì)胞內(nèi)吸收分解，轉(zhuǎn)化為滿足機(jī)體需要的維生素A[5]。維生素A對(duì)維持正常的視覺功能具有重要作用，其機(jī)制是：參與感光物質(zhì)視紫紅質(zhì)的合成，增強(qiáng)對(duì)弱光的感知；維持角膜上皮細(xì)胞的形態(tài)、正常增殖和分化；增加角膜相關(guān)黏蛋白的表達(dá)，保持上皮表面濕潤(rùn)，防止干澀[6-7]。在外界環(huán)境刺激下，眼部前段組織易受到氧化應(yīng)激的影響，維生素C作為眼內(nèi)重要抗氧化劑，不僅能吸收紫外光線，保護(hù)組織免受光氧化損傷，還可促進(jìn)角膜膠原蛋白的生成，防止眼部組織損傷[8]。維生素E存在于感官細(xì)胞和視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞中，通過其抗氧化作用，能避免晶狀體發(fā)生過氧化反應(yīng)[9]。葉黃素和玉米黃質(zhì)是重要的類胡蘿卜素，除了玻璃體、角膜和鞏膜外，幾乎存在于眼部所有組織中，尤其視網(wǎng)膜黃斑中的濃度最高。從飲食中攝取的葉黃素能選擇性地集中在視覺系統(tǒng)，是神經(jīng)視網(wǎng)膜和晶狀體中獨(dú)有的類胡蘿卜素。研究表明，黃斑類胡蘿卜素能吸收40%到90%的藍(lán)光（取決于濃度），保護(hù)視網(wǎng)膜免受光化學(xué)損傷，降低氧化損傷，還可防止氧化誘導(dǎo)的細(xì)胞因子增加和上調(diào)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，預(yù)防多種眼部疾病的致病性炎癥，對(duì)眼睛起到重要的保護(hù)作用[11-12]。

枸杞沙棘濃漿是以新鮮枸杞、沙棘為原料加工、濃縮而成的一種口服液體保健食品，小袋獨(dú)立包裝，人體吸收快，攜帶、服用方便，既可沖水、也可直接飲用。枸杞沙棘濃漿營(yíng)養(yǎng)豐富，且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，其主要原因是各種功效成分相互之間存在保護(hù)作用。維生素C和維生素E作為抗氧化劑，不僅能相互維持穩(wěn)定性，還能有效保護(hù)β-胡蘿卜素和葉黃素免受氧化分解，對(duì)其起到保護(hù)作用[13-14]。此外，沙棘自身有機(jī)酸含量較高，加工得到的枸杞沙棘濃漿呈酸性，有利于維生素C、維生素E和黃酮類化合物在溶劑中維持較高的穩(wěn)定性[15-17]。枸杞沙棘濃漿不含添加糖，保持枸杞、沙棘的天然營(yíng)養(yǎng)成分，不影響維生素、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)素的攝入，有助于維持各種功效成分的穩(wěn)定性[18]。枸杞沙棘濃漿營(yíng)養(yǎng)豐富、口感酸甜且飲用方便，易被消費(fèi)者接受。

因其獨(dú)特的自然資源和地理優(yōu)勢(shì)，青海地區(qū)枸杞和沙棘資源豐富，果實(shí)個(gè)體大、肉質(zhì)飽滿，果品品質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分及生物活性物質(zhì)的含量遠(yuǎn)高于其他地區(qū)[19-22]。青海地區(qū)高品質(zhì)的資源優(yōu)勢(shì)為開發(fā)緩解視疲勞保健食品提供了有利條件。