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孢子絲菌病患者外周血Th1與Th17比例與疾病關(guān)系

2018-09-27 12:33:38孫銘徽閆百靈周明偉
關(guān)鍵詞:絲菌淋巴管亞群

陳 鳳,孫銘徽,閆百靈,周明偉*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 皮膚科,吉林 長(zhǎng)春130033;2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 急診內(nèi)科)

孢子絲菌病是由孢子絲菌復(fù)合體引起的人和其它哺乳動(dòng)物的皮膚、皮下組織、黏膜和局部淋巴管的急性或慢性炎癥,偶可播散至全身引起系統(tǒng)性損害[1]。固定型與皮膚淋巴管型是最常見的類型。細(xì)胞免疫被認(rèn)為是機(jī)體抵抗真菌感染的主要方式。典型的效應(yīng)細(xì)胞為Th1,Th2以及Th17細(xì)胞[1]。本研究通過檢測(cè)孢子絲菌病患者外周血中的Th1,Th2以及Th17細(xì)胞亞群在淋巴細(xì)胞中的比例,觀察其與疾病的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1病例資料收集吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院皮膚科2014年9月至2017年3月就診的患者?;颊呒{入標(biāo)準(zhǔn):(1)根據(jù)患者主訴,典型的皮損改變,組織培養(yǎng)出典型的孢子絲菌,形態(tài)轉(zhuǎn)換實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性,病理表現(xiàn)為化膿性肉芽腫性反應(yīng),明確診斷為孢子絲菌病患者;(2)病程超過3個(gè)月?;颊吲懦龢?biāo)準(zhǔn):(1)合并有其他疾病患者,比如嚴(yán)重感染,免疫抑制性疾病,肝、腎功能不全的患者或者其他疾??;(2)應(yīng)用抗真菌藥物治療的患者;(3)2個(gè)月內(nèi)使用過糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑的患者;(4)最近3個(gè)月內(nèi)罹患其它疾病的患者。根據(jù)孢子絲菌病患者臨床表現(xiàn),分為固定型與皮膚淋巴管型(未見播散型與皮膚外型);根據(jù)患者發(fā)病至就診時(shí)間,孢子絲菌病患者分為亞急性期(病程小于6個(gè)月)以及慢性期(病程超過6個(gè)月)。

根據(jù)患者性別、年齡,為患者匹配健康對(duì)照組43例,對(duì)照組為中日聯(lián)誼醫(yī)院健康體檢中心體檢者。所有對(duì)照組的體征與生化檢查均無(wú)異常。所有對(duì)照組均無(wú)孢子絲菌病感染史。共納入96名患者,男 66人,女30人,年齡62.14±7.94歲;其中淋巴管型患者40人,男29人,女11人,年齡61.46±8.37歲;固定型患者56人,男35人,女21人,年齡62.62±6.78歲;無(wú)播散型患者及皮膚外孢子絲菌病患者。根據(jù)患者病程,亞急性組(病程3-6個(gè)月)患者63人,男43人,女20人,年齡63.24±6.81歲;慢性組(病程≥6個(gè)月)患者33人,男22人,女11人,年齡60.04±10.4歲;健康對(duì)照組共43名。 病例組與健康對(duì)照組在年齡分布(P=0.86)、性別(P=1.0)構(gòu)成上無(wú)明顯差異。固定型孢子絲菌病患者與皮膚淋巴管型患者在年齡分布(P=0.46)、性別(P=0.38)構(gòu)成上無(wú)明顯差異。亞急性組與慢性組在年齡分布(P=0.07)、性別(P=1.0)構(gòu)成上無(wú)明顯差異。見表1。

1.2樣本收集用肝素鈉抗凝管收集5-10 ml外周血,所有的血液均于收集24小時(shí)內(nèi)在東北師范大學(xué)生命科學(xué)院進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各細(xì)胞亞群比例。

1.3流式細(xì)胞檢測(cè)流式細(xì)胞檢測(cè)中用到的抗體有:FITC-anti-IL-4,PE-anti-IL-17,PP-anti- CD4,PE-Cy7-anti-IFN-γ以及APC-anti-CD3;檢測(cè)Th1,Th2與Th17亞群在淋巴細(xì)胞中的比例。Th1分子標(biāo)記:CD3+CD4+IFN-γ+cells,Th2分子標(biāo)記:CD3+CD4+IL-4+cells,Th17分子標(biāo)記:CD3+CD4+IL-17+cells。所有熒光抗體與同型對(duì)照抗體均購(gòu)自BD Biosciences 和 eBioscience公司。所有樣品通過Flowjo軟件分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS 20.0軟件分析處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料采用χ2統(tǒng)計(jì);計(jì)量數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,以t檢驗(yàn)分析。P<0.05 認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

病例組外周血中Th1型細(xì)胞亞群的比例較健康對(duì)照組明顯下降(P=0.004),固定型孢子絲菌病患者與淋巴管型孢子絲菌病患者相比Th1細(xì)胞亞群的比例明顯上升(P=0.04)。亞急性組與慢性組相比,Th1型細(xì)胞亞群比例明顯升高(P=0.0003)?;颊呓M與健康對(duì)照組之間,固定型與皮膚淋巴管型患者之間,急性期與慢性期患者之間,Th2細(xì)胞亞群占淋巴細(xì)胞的比例均無(wú)明顯改變。病例組外周血中Th17型細(xì)胞亞群的比例較健康對(duì)照組明顯下降(P=0.002),固定型孢子絲菌病患者與淋巴管型孢子絲菌病患者相比,Th17細(xì)胞亞群的比例明顯上升(P=0.04)。亞急性組與慢性組相比,Th17型細(xì)胞亞群比例明顯升高(P=0.002)。見表1。

表1 病人一般情況及Th1、Th2、Th17在外周血中統(tǒng)計(jì)分析

3 討論

孢子絲菌病是一種世界范圍內(nèi)散發(fā)的深部真菌病,在部分地區(qū)可以小范圍流行[2]。Th1、Th2以及Th17型細(xì)胞免疫反應(yīng)在抵抗真菌中的作用已有很多研究,但大部分研究是在小鼠體內(nèi)或體外進(jìn)行[3],本研究中,我們利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)孢子絲菌病患者外周血中各亞群的比例變化。

孢子絲菌病患者體內(nèi)Th1與Th17細(xì)胞亞群在外周血中的比例較健康對(duì)照組明顯下降。樹突狀細(xì)胞能夠提呈孢子絲菌相關(guān)抗原,誘導(dǎo)Th1/Th17分化[4]。Th17細(xì)胞在小鼠抵抗孢子絲菌感染時(shí)起著重要作用[5]。本研究中,孢子絲菌病患者體內(nèi)外周血中Th1和Th17細(xì)胞亞群的比例較正常對(duì)照組明顯下降,且病程越長(zhǎng),比例下降越明顯。推測(cè)外周血中Th1/Th17比例下降的原因?yàn)?,由于感染的持續(xù)存在,隨著疾病時(shí)間的延長(zhǎng),出現(xiàn)T細(xì)胞耗竭,從而出現(xiàn)外周血中相應(yīng)細(xì)胞亞群的下降[6]。

患者臨床癥狀越重,Th1和Th17 細(xì)胞亞群的比例越低。患者的臨床分型(固定型與皮膚淋巴管型)與機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān),機(jī)體對(duì)感染菌的免疫功能決定了感染侵入的嚴(yán)重程度[7]。 固定型孢子絲菌病患者的免疫功能相對(duì)平衡,感染更容易控制,對(duì)感染鄰近部位的損傷較小[6]。而播散型孢子絲菌患者的免疫功能多數(shù)受到抑制,因此,有人提出,固定型孢子絲菌病的發(fā)生反應(yīng)了機(jī)體對(duì)孢子絲菌有較強(qiáng)的抵抗能力,可以在感染的早期迅速將病原體局限[8]。

病例組與健康對(duì)照組,以及病例組內(nèi)各亞群之間,Th2型細(xì)胞亞群的比例均沒有變化??紤]Th2型免疫反應(yīng)可能在機(jī)體抵抗孢子絲菌的免疫過程中不起重要作用,這與之前的報(bào)道是一致的[9]。

因此,我們推測(cè)Th1和Th17細(xì)胞亞群的比例變化是判定疾病嚴(yán)重程度與病程長(zhǎng)短的重要指標(biāo)。較低的Th1和Th17細(xì)胞亞群一般伴有相對(duì)嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)與更長(zhǎng)的病程。更重要的是,我們的研究結(jié)果為孢子絲菌病的治療提供了一個(gè)新的方向,抗真菌藥物治療聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)治療可能較單純應(yīng)用抗真菌藥物治療更加有效。

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