張秋旭，張潤厚，史曉雪，李 剛，高愛琴

(內蒙古農(nóng)業(yè)大學動物科學學院，呼和浩特 010018)

羊肉中多飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid, PUFA)含量受日糧組成影響較大，由于舍飼肉羊短期育肥過程需攝取高比例的精料，導致羊肉中飽和脂肪酸(saturated fatty acid, SFA)和n-6 PUFA含量高于放牧肉羊[1]，而高SFA/PUFA和n-6 PUFA/n-3 PUFA將增加人們罹患心血管疾病的風險[2-3]。根據(jù)以往研究發(fā)現(xiàn)，提高反芻動物肌肉中CLA的水平主要歸結于日糧中不飽和脂肪酸(unsaturated fatty acid, UFA)的含量，UFA在瘤胃中的氫化程度以及組織中SCD酶的活力這3個方面。對亞麻油進行過瘤胃保護處理可減少瘤胃對UFA的氫化作用，由于肉中CLA主要來自日糧CLA沉積、瘤胃氫化菌對亞油酸(linoleic acid, LA)和α-亞麻酸(alpha～Linolenic acid ALA)的異構化以及其前體物反-11十八碳二烯酸(t-11 C18:2, TVA)在組織中的去飽和作用[4]，因此日糧UFA的過瘤胃保護在減少氫化作用同時使其壁材具備一定的緩釋作用，利用氫化菌對日糧脂肪酸的異構化使更多的CLA沉積于動物產(chǎn)品中[5]。微膠囊脂末過瘤胃效果介于未保護油脂和整粒油籽之間，且具有一定的緩釋作用，是過瘤胃脂肪中增加PUFA，尤其是CLA含量較好的添加方式[6]，但是目前還未見亞麻油微膠囊在反芻動物生產(chǎn)方面的應用報道，對其作用效果也并不明確。

n-3 PUFA包含ALA、二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid, DHA)。研究發(fā)現(xiàn)，n-3 PUFA可直接作用于胞內信號通路，激活包含過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferators activated receptorPPAR)、固醇調節(jié)元件結合蛋白(sterol regulatory element binding proteins,SREBP)在內的多種轉錄因子發(fā)揮作用[7]。亞麻籽中n-3 PUFA含量豐富，可上調肌肉中PPARγmRNA的表達。PPARγ參加脂代謝的調節(jié)及脂肪細胞的分化，激活PPARγ過表達可上調SREBP1、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase，LPL)、硬脂酰輔酶A去飽和酶(stearoyl-CoA desaturase, SCD)等脂肪相關基因的表達，從而上調脂肪酸去飽和系數(shù)，使UFA和PUFA含量增加[8-9]。n-3 PUFA可通過抑制細胞核內SREBP1豐度而降低脂肪合成基因的表達,研究表明，n-3 PUFA加速SREBP1 mRNA的降解，減少脂質生成，有益于細胞內能量平衡，減輕胰島素抵抗[10]。SREBP1可激活與脂類和膽固醇合成與轉運相關的基因，其靶基因主要包括SCD、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)、乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)。

本研究以不同形式的亞麻油(亞麻油、亞麻油微膠囊脂末、亞麻籽)為試驗材料，在相同油脂添加量下，初步比較研究其對肉羊生產(chǎn)性能、肌肉營養(yǎng)成分、肉品質及脂肪酸含量的影響，并根據(jù)脂肪代謝相關調節(jié)因子(PPARγ、SREBP1)及關鍵酶(LPL、FAS、ACC、SCD)mRNA在綿羊背最長肌中表達量的變化，探討亞麻油不同添加形式對肌肉中脂類代謝的影響，以期為亞麻油微膠囊脂末在生產(chǎn)富含PUFA羊肉的應用中提供基礎依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

亞麻油微膠囊脂末由大連醫(yī)諾生物有限公司提供，壁材為大豆蛋白、麥芽糊精和亞麻籽膠混合物，芯材為亞麻油，含油率50%。亞麻籽、亞麻油由呼和浩特土默特左旗榨油廠提供。

1.2 試驗動物與飼養(yǎng)管理

選擇24只日齡((100±10) d)和體重((27±2.17) kg)相近的健康杜泊(♂)×小尾寒羊(♀)雜交F2代公羔，隨機分為4組，每組6只。羔羊進欄前統(tǒng)一進行疫苗注射及驅蟲，單欄飼養(yǎng)，每日早晚飼喂，自由飲水，記錄采食量。試驗共計50 d，預試期15 d，正試期35 d。

1.3 試驗設計及日糧營養(yǎng)水平

采用單因子完全隨機設計，分別飼喂4種日糧，基礎日糧由全混合顆粒料組成，精粗比6∶4。對照組(CON)飼喂基礎日糧，試驗組分別在飼喂基礎日糧的同時添加含油量為4%的亞麻油(LO)、亞麻油微膠囊脂末粉(LOM)和亞麻籽炒粒(L)，添加量分別為精料的4%、8%和10%。玉米及亞麻餅作為補充日糧中的能量和蛋白原料，4種日糧為等能等氮水平。各組日糧的原料組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗日糧和添加油脂的脂肪酸組成采用氣相色譜法(PE，Clarus 680, Perkin Elmer)進行測定，見表2。

1.4 屠宰及樣品的采集

飼養(yǎng)試驗結束后所有羊只統(tǒng)一屠宰，宰前禁食24 h，禁水2 h，采集200 g左右背最長肌用于進行營養(yǎng)成分及肉品質檢測；另取少量背肌置于液氮，-80 ℃冰箱保存，用于脂肪酸含量的測定及脂肪代謝相關酶基因mRNA表達量的分析。

1.5 測定指標及方法

1.5.1 生產(chǎn)性能的測定 記錄試驗初始體重和終末體重，計算平均日增重(average daily gain, ADG)、干物質采食量(dry matter intake, DMI)和料肉比(feed-gain ratio, FGR)。

1.5.2 肉中營養(yǎng)成分與肉品質指標的測定 采用烘干法、凱氏定氮法、索氏提取法和高溫灰化法分別測定肉中干物質、粗蛋白、粗脂肪及粗灰分含量；用梅特勒-托利多(GB-T11165) pH計測定背最長肌45 min和24 h的pH，并立即測定滴水損失、蒸煮損失；利用C-LM3B型嫩度計和全自動壓肉儀測定背肌剪切力和系水力。

表1試驗日糧組成和營養(yǎng)水平(風干基礎)

Table1Thecompositionandnutrientlevelsofexperimentaldiets(air-drybasis)

%

①. 預混料為每千克日糧提供：VA 400 000 IU，VD 30 000 IU，VE 3 000 IU，鐵3 000 mg，銅490 mg，錳1 750 mg，硒22.5 mg，碘55 mg，鋅2 000 mg，鈷25 mg；②. 代謝能為計算值，其余為實測值

①. The premix provided the following for per kg of diet：VA 400 000 IU, VD 30 000 IU, VE 3 000 IU, Fe 3 000 mg, Cu 490 mg, Mn 1 750 mg, Se 22.5 mg, I 55 mg, Zn 2 000 mg, Co 25 mg;②. The metabolizable energy is calculated value, the others are measured values

1.5.3 脂肪酸含量的測定 肌肉樣品的預處理：用氯仿/甲醇(3∶1)溶液超聲抽提肌肉10 min，離心機離心(1 800 r·min-110 min)收集脂肪，氮氣吹干；加入3 mL 6% KOH的甲醇溶液，室溫過夜(密封)，加入2 mL正己烷，搖勻，震蕩離心，棄上層萃取液，剩下水相液體轉移至帶蓋玻璃管中氮氣吹干，加入約2 mL BF3-MeOH，充入氮氣后密閉，90 ℃ 加熱2 h，冷卻，加入約1 mL NaCl溶液(5%)，用2 mL正己烷萃取3次，并轉移到2 mL進樣瓶中，氮氣吹干，待分析。采用氣相色譜法測定背最長肌中主要脂肪酸的組成和含量。氣相色譜條件：氣相色譜儀(Thermo Fisher)；色譜柱：TG-5 MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；進樣口溫度290 ℃；進樣量1 μL。

1.5.4 基因表達量的分析 利用Trizol提取試劑(TaKaRa，Japan)從肉中提取總RNA，OD260 nm/OD280 nm值為1.8～2.1的樣品用于反轉錄反應，瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA完整度。采用Prime ScriptTMRT Reagent Kit with gDNA Eraser(TaKaRa，Japan)反轉錄試劑盒于PCR儀中合成cDNA，反應條件：37 ℃轉錄反應15 min，85 ℃反轉錄酶失活5 s，4 ℃時結束，-80 ℃冰箱保存。參考GenBank提供的綿羊引物序列，由北京六合華大基因科技有限公司合成。引物序列見表3。

表2試驗日糧及添加油脂的脂肪酸組成

Table2Fattyacidscompositionofdietsandlipidsupplements

脂肪酸Fatty acid試驗日糧/(g·kg-1DM)Diet添加油脂(占總脂肪酸的百分比)Lipid supplement (percentage of total fatty acid)CONLOLOML亞麻油Linseed oil亞麻油微膠囊Linseed oil microcapsule亞麻籽Linseed棕櫚酸C16:04.637.998.057.945.605.275.50硬脂酸C18:00.691.241.281.263.902.663.48油酸C18:1n9c8.8915.5115.6215.4722.2216.7119.54亞油酸C18:2n6c15.2426.2726.3926.0917.1015.6315.00ALA C18:3n30.772.032.812.9049.6058.9955.97總脂肪酸TFA①30.2153.0454.1553.66---不飽和脂肪酸UFA24.9043.8144.8244.4688.9291.3290.51飽和脂肪酸SFA5.319.239.339.209.507.938.98UFA/SFA4.694.754.804.839.3611.5210.08多不飽和脂肪酸PUFA16.0128.3129.2029.0066.7074.6170.97n-615.2426.2726.3926.0917.1015.6315.00n-3 0.772.032.812.9049.6058.9955.97n-6/n-3 19.7412.929.388.980.340.260.27

①. 添加油脂中的總脂肪酸(TFA)含量為100%

①.The total fatty acid content in the added oil is 100%

表3熒光定量引物信息

Table3Theinformationsofprimersforreal-timequantitativePCR

基因Gene引物序列(5'→3')Primer sequenceGenBank登錄號GenBank accession No.產(chǎn)物長度/bpLengthFASF:CACAACCCAAACCCCAAGAR:GAGCCACCGAAGCCAAAXM_015098375.1116ACCF:GAAAATCCACAACGCCAACCR:CCTCCACCTCCACAAACCANM_001009256.180LPLF:CCCAGCAGCATTATCCAGTGTR:TTCATCCGCCATCCAGTTCNM_001009394.186SCDF:GTGGGAAACAAGGCAGGAAGR:GAGTCAGGAGAGAAAGGGAGCANM_001009254.182PPARγF:CACAGGCCGAGAAGGAAAAGR:TTGGTCAGCGGGAAGGAXM_015102092.1133SREBP1F:CGACACCACCAGCATCAACR:GCCAGGAGAAGCACCAXM_015098336.1138GAPDHF:GGTCGGAGTGAACGGATTTGR:TGGCAACGATGTCCACTTTGNM_00128974683

采用SYBR Premix Ex TaqTMⅡ(TaKaRa，Japan)進行實時熒光定量PCR擴增的檢測。反應體系為25 μL：SYBR Premix Ex TaqTMⅡ12.5 μL，上、下游引物各1 μL，cDNA模板2 μL和無酶水8.5 μL。以GADPH基因為內參基因。實時熒光定量的反應程序：95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃退火 30 s，40個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法進行基因相對定量分析。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2007進行初步整理后，采用SAS 9.2 GLM模型進行分析，并進行Duncan氏多重比較檢驗，所有指標以每只肉羊為統(tǒng)計單位。結果以“平均值±標準差”表示，以P<0.05為差異顯著性判斷標準。

2 結 果

2.1 亞麻油不同添加形式對肉羊生產(chǎn)性能的影響

由表4可見，試驗開始時各組體重接近，結束時體重差異顯著(P<0.05)，與對照組相比LOM顯著提高7.94%，為40.78 kg(P<0.05)；與其他試驗組相比，LO組顯著降低ADG水平(P<0.05)，為0.25 kg·d-1，LOM組最高，為0.34 kg·d-1；各組羔羊DMI接近(P>0.05)，亞麻油不同添加形式對FGR沒有顯著影響(P>0.05)，但LO組FGR高于其他組，影響羔羊的飼料報酬。

表4亞麻油不同添加形式對肉羊生產(chǎn)性能的影響

Table4Effectsofsupplementationofdifferentformsoflinseedoilongrowthperformanceofmuttonsheep

項目Item處理TreatmentCONLOLOMLP值P-value試驗初重/kg Initial BW26.75±1.1828.01±3.3929.10±1.6727.78±2.170.31試驗末重/kg Final BW37.78±1.15bc36.92±2.17c40.78±1.47a39.45±1.07ab0.02干物質采食量/(kg·d-1) DMI1.59±0.121.31±0.281.59±0.101.77±0.220.26平均日增重/(kg·d-1) ADG0.32±0.03a0.25±0.05b0.34±0.02a0.33±0.05a0.03料肉比FGR5.00±0.495.56±0.324.72±0.315.39±0.760.59

同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；肩標相同字母或無字母標注表示差異不顯著(P>0.05)。下表同

In the same column, values with different small letter superscripts mean significant difference(P<0.05); Values with the same or no letter superscripts mean no significant difference(P>0.05). The same as the following tables

2.2 添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉營養(yǎng)成分及肉品質的影響

由表5可見，日糧添加油脂可顯著提高肉羊肌肉中脂肪含量，試驗組均比CON組顯著提高(P<0.05)；試驗組肌肉中粗蛋白含量高于CON組，但差異不顯著(P>0.05)；添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉水分和灰分含量無顯著影響(P>0.05)。

由表6可見，與CON組相比，LOM組顯著降低了背肌的剪切力(P<0.05)，其他各組間差異不顯著(P>0.05)；總體上來看，添加不同形式亞麻油對肌肉的pH、剪切力、滴水損失、蒸煮損失、失水率的影響并不顯著(P>0.05)，但LOM組較CON組降低了滴水損失和升高了蒸煮損失。

2.3 添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉中主要脂肪酸含量的影響

表7顯示，添加不同形式亞麻油對TFA含量沒有顯著影響(P>0.05)，但試驗組TFA比CON組高20%左右；日糧沒有顯著影響C14～C18 SFA和總SFA含量(P>0.05)；試驗組對MUFA影響主要表現(xiàn)在C16:1上，亞麻籽可顯著提高C16:1含量(P<0.05)，但對C17:1、C18:1、TVA及總MUFA含量沒有明顯影響(P>0.05)，在PUFA方面，試驗組與CON組相比可顯著增加肌肉CLA、ALA、花生四烯酸(arachidonic Acid, AA)的含量(P<0.05)，其中LOM組CLA較CON、LO、L組顯著提高375%、171%和58%(P<0.05)；L、LOM組n-3 PUFA含量比CON組顯著提高151%、178%，較LO組顯著提高39%、54%(P<0.05)，但對n-6 PUFA影響并不顯著(P>0.05)；添加油脂對SFA、PUFA及PUFA/SFA含量沒有顯著影響(P>0.05)，但與CON組相比，顯著降低了n-6/n-3水平，亞麻油的添加使羊肉n-6/n-3比例符合人們對膳食脂肪酸n-6/n-3的健康需求，彌補舍飼肉羊n-6 PUFA高于n-3 PUFA的營養(yǎng)缺陷。

表5添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉營養(yǎng)成分的影響

Table5Effectsofsupplementationofdifferentformsoflinseedoilonnutrtientcontentsinmuscleofmuttonsheep

%

表6添加不同形式亞麻油對肉羊肉品質的影響

Table6Effectsofsupplementationofdifferentformsoflinseedoilonmeatqualityofmuttonsheep

項目Item處理TreatmentCONLOLOMLP值P-valuepH 45 min6.64±0.266.71±0.226.67±0.156.83±0.280.54pH 24 h5.49±0.055.58±0.115.53±0.135.48±0.150.44滴水損失/% Dripping loss5.01±0.484.78±0.724.11±1.295.64±0.900.06剪切力/N Shear force57.32±1.95a53.58±4.89ab50.49±4.77b55.36±3.03ab0.04蒸煮損失/% Cooking loss43.65±3.6343.95±0.9945.56±3.3044.27±2.030.63失水率/% Rate of loss water29.38±1.4728.62±1.3328.03±1.4127.23±1.260.08

表7添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉中主要脂肪酸含量的影響

Table 7 Effects of supplementation of different forms of linseed oil on fatty acids content in muscle of mutton sheep%

2.4 添加不同形式亞麻油對綿羊肌肉中脂代謝關鍵調節(jié)因子和相關酶mRNA表達量的影響

由表8可知，不同添加形式的亞麻油可顯著影響脂代謝關鍵調節(jié)因子PPARγ和SREBP1 mRNA表達，與CON組相比，LO、LOM及L組中PPARγmRNA表達量分別上調53%、68%及36%，而SREBP1 mRNA表達量下調47%、49%、53%(P<0.05)；LOM的PPARγmRNA表達量高于LO、L組，但各處理組之間的PPARγ表達量差異并不顯著(P>0.05)，而L組SREBP1 mRNA的表達量低于LO、LOM組，各組間SREBP1 mRNA表達量差異也不顯著(P>0.05)。

表8添加不同形式亞麻油對綿羊肌肉中脂代謝關鍵調節(jié)因子基因表達的影響

Table8EffectofsupplementationofdifferentformsoflinseedoilonmRNAabundanceofkeyregulatoryfactorsinfattyacidssynthesisinthemuscleofsheep

項目Item處理TreatmentCONLOLOMLP值P-valuePPARγ1.00b1.53±0.32ab1.68±0.30a1.36±0.32ab0.048SREBP11.00a0.53±0.09b0.51±0.07b0.47±0.13b0.002

由表9可見，日糧添加亞麻油物質對肌肉FAS、SCD、LPLmRNA表達量影響顯著(P<0.05)，試驗LO、LOM、L組FAS表達量顯著低于CON組，分別下調32%、45%、41%，但試驗各組間差異并不顯著(P>0.05)，與CON組相比，試驗各組均可下調SCDmRNA的表達，其中L組最低，下調幅度達63%，與LOM組差異顯著(P<0.05)；各試驗組顯著上調LPLmRNA表達水平，其中LOM組最高，是CON組的2.7倍，但各試驗組間差異不顯著(P>0.05)；與CON組相比，添加不同形式的亞麻油并未對ACCmRNA的表達量產(chǎn)生顯著影響，但具有一定的下調趨勢(P=0.051)。

表9添加不同形式亞麻油對綿羊肌肉中脂代謝相關酶基因表達的影響

Table9EffectofsupplementationofdifferentformsoflinseedoilonmRNAabundanceoflipidmetabolismrelatedenzymesinthemuscleofsheep

項目Item處理TreatmentCONLOLOMLP值P-valueFAS1.00a0.68±0.10b0.55±0.13b0.59±0.22b0.012ACC1.000.57±0.160.44±0.180.46±0.150.051LPL1.00b2.51±0.81a2.70±0.58a2.33±0.63a0.028SCD1.00a0.53±0.10bc0.67±0.24b0.37±0.25c<0.001

3 討 論

3.1 亞麻油不同添加形式對肉羊生產(chǎn)性能的影響

目前國內外對于日糧添加油脂對反芻動物DMI的影響尚無定論，Martin等[11]在奶牛日糧中添加含油量為5.8%的亞麻籽、擠壓亞麻籽與亞麻油發(fā)現(xiàn)，天然亞麻籽對奶牛的DMI無顯著影響，而擠壓亞麻籽與亞麻油中DMI顯著降低。趙天章[4]發(fā)現(xiàn)，在巴美肉羊日糧中添加2.4%的魚油、大豆油及混合油脂對肉羊的DMI沒有顯著影響。本試驗對DMI的研究結果與其一致，不同添加形式的亞麻油對肉羊DMI無明顯影響，這可能與本試驗中使用全混合顆粒料，添加油脂的日糧適口性與對照組無明顯區(qū)別有關，而添加擠壓亞麻籽與亞麻油的全混合日糧帶有特殊的苦味，日糧適口性差致使DMI降低。日糧脂肪添加對ADG結果影響的報道并不一致，但均表明高PUFA日糧可提高日增重[12-14]。本試驗發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)包被的LO組ADG顯著低于其他組，可能是直接向日糧中添加未保護的植物油，對瘤胃發(fā)酵有一定抑制作用，影響瘤胃粗纖維降解率[15]，而導致ADG的降低，與此對應的經(jīng)過壁材、種皮保護的LOM和L組的ADG含量明顯上升，這與Gillis和許蕾蕾等[16-17]在肉牛中添加過瘤胃脂肪以及亞麻籽增加ADG的研究較為一致，過瘤胃亞麻油能夠提高能量利用率而增加肉羊日增重。

3.2 添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉營養(yǎng)成分及肉品質的影響

多數(shù)研究表明，動物品種、年齡對肉中營養(yǎng)成分影響較大，日糧因素對其影響并不明顯[18]。但日糧營養(yǎng)水平高時，可增加肉中肌內脂肪的含量，而其嫩度也隨之增加，Mapiye等[19]在日糧中添加15%亞麻籽可增加肉牛肌肉脂肪含量，但對水分、蛋白和灰分等營養(yǎng)物質沒有影響。本試驗與以上結果一致，添加油脂的試驗組脂肪含量高于對照組，但對其他營養(yǎng)物質沒有顯著影響。反芻動物日糧中添加亞麻籽對肉品質有一定的改善作用，李秋鳳等[20]研究表明，添加5%、10%亞麻籽可顯著提高牛肉嫩度，而對其他肉品指標沒有影響，但也有研究發(fā)現(xiàn)，添加10%亞麻籽不會對綿羊剪切力、失水率等肉質指標產(chǎn)生影響[21]，本試驗中，除LOM組的剪切力顯著低于其余各組外，不同亞麻油的添加形式對pH、蒸煮損失、失水率等肉質指標同樣沒有顯著影響。肌肉中蛋白和脂肪的含量決定羊肉的嫩度，水分含量與肉中多汁性有關，試驗各組肉中蛋白和水分含量相當，因此并不會對肉質產(chǎn)生過多影響。雖然添加油脂使肌內脂肪含量高于對照組，但各組嫩度呈現(xiàn)低于對照組的趨勢，羊肉肌肉中脂肪所占比例低于牛肉，因此添加亞麻籽對肉牛肌內脂肪影響效果更為顯著，嫩度也隨之變化，而LOM對嫩度的影響原因可能是壁材對亞麻油的保護作用而增加脂肪酸在肉中沉積效率進而增加肌肉嫩度，但具體原因還需進一步在嫩度方面的研究。

3.3 添加不同形式亞麻油對肉羊肌肉中主要脂肪酸含量的影響

人類膳食脂肪酸推薦的n-6 PUFA/n-3 PUFA應小于5，但舍飼肉羊的n-6 PUFA含量相對較高，導致肉中n-6/n-3往往高于這一范圍[22]。本試驗結果顯示，日糧添加壁材和種皮保護的亞麻油可增加肉中CLA、ALA n-3系列PUFA，但對總n-6系列含量沒有產(chǎn)生影響，肉中n-6/n-3符合膳食脂肪酸健康標準。Facciolongo等[23]研究報道稱，日糧中添加富含ALA類物質能夠增加畜產(chǎn)品中的n-3 PUFA含量，本試驗發(fā)現(xiàn)，日糧添加保護性亞麻油對提高n-3 PUFA含量，降低n-6/n-3比值具有良好的效果，直接添加亞麻油飼喂肉羊其肌肉中n-3 PUFA含量的增加幅度低于添加亞麻油微膠囊和亞麻籽，一方面由于亞麻油在運輸、儲藏過程中高UFA含量極易氧化而使PUFA量減少[24]，亞麻油與日糧添加亞麻籽為同批次籽實，但從表2日糧脂肪酸含量可以看出，經(jīng)飼料加工、飼喂后亞麻油中n-3 PUFA較亞麻籽降低達30%，針對上述問題本試驗對亞麻油進行壁材保護處理，以解決日糧亞麻油添加困難的問題；另一方面，日糧UFA在未保護下進入瘤胃中，微生物自身采用氫化脫毒方式將UFA加氫為SFA，大量功能性不飽和脂肪酸不能有效沉積在肌肉組織中[7]，雖然對UFA具有氫化反應，但并不徹底氫化中間產(chǎn)物及未經(jīng)氫化的n-6、n-3 PUFA，其仍可以沉積到肌肉中[25]，故受保護亞麻油可減少氫化，增加肉中n-3 PUFA含量，改善舍飼羊肉n-6/n-3比例以滿足人類對膳食脂肪酸的健康需求。此外Ferreira等[12,26]研究指出，增加CLA前提物TVA(C18:1T)的底物可提高羊肉中CLA含量，與本試驗日糧添加亞麻油微膠囊脂末提高羊肉肌肉n-3 PUFA含量，特別是CLA含量的結果類似，亞麻油微膠囊在瘤胃中釋放油脂的效果介于亞麻油與亞麻籽之間[27]，一部分UFA經(jīng)壁材保護避免氫化到達小腸后直接被機體吸收、代謝產(chǎn)生CLA沉積肉中，另一少部分PUFA氫化產(chǎn)生中間產(chǎn)物，在SCD等去飽和酶作用下生成CLA沉積到肌肉中[28]，故添加亞麻籽微膠囊對CLA在肉中的沉積比添加亞麻油及亞麻籽油具有更好的作用效果。

3.4 添加不同形式亞麻油對綿羊肌肉中脂代謝關鍵調節(jié)因子和相關酶mRNA表達量的影響

日糧PUFA通過影響細胞膜信息傳遞途徑和激活肌肉轉錄因子PPARγ、SREBP1參與調控LPL、FAS、ACC及SCD等脂代謝相關酶基因的表達。ALA、CLA作為PPARγ的天然配體通過特異性激活PPARγ，調節(jié)線粒體與脂肪酸氧化相關基因的表達，其主要的靶基因為LPL[29]。有研究表明，日糧中補飼亞麻籽可提高背肌中PPARγ、LPL的mRNA表達水平，尤其是低比例n-6/n-3可上調PPARγmRNA的表達[30-31]，本試驗日糧添加不同形式的亞麻油發(fā)現(xiàn)，肌肉中PPARγ和LPL基因的表達水平高于對照組，并與肉中n-3的含量的變化趨勢一致。PPARγ、LPL表達上調可誘導間質細胞向脂肪細胞的分化，本試驗發(fā)現(xiàn)，試驗組肉中粗脂肪、TFA含量高于對照組，添加亞麻油對PPARγ、LPL基因的表達是一種正向反饋調節(jié)，n-3 PUFA激活PPARγ核調控因子，上調LPL酶基因表達，并促進脂肪酸的沉積，增加肉中PUFA的含量。SREBP1是主要參與脂肪合成基因轉錄的調節(jié)因子，研究表明，在脂質合成過程中PUFA尤其是CLA可抑制SREBP1的表達，并使相關代謝酶基因ACC、FAS、SCDmRNA表達水平下降，目前CLA抑制機制主要是直接阻斷SREBP1蛋白的裂解活化過程，使其無法與自身啟動子上的SRE位點結合，抑制轉錄過程，形成一個正反饋自調節(jié)系統(tǒng)，PPARγ核調控因子同樣可調控SREBP1的表達，但具體機制尚不明確[32-33]。陳娜和Urrutia等[30,34]用添加10%亞麻籽的日糧飼喂反芻動物，抑制了其背最長肌中SREBP1基因的表達，同時也下調了FAS、ACC、SCD的mRNA表達水平，與本試驗結果較為一致，本試驗中，亞麻油的不同添加形式可顯著下調SREBP1、SCD和FAS基因的表達量，而亞麻籽組的SCDmRNA表達水平低于其他兩組，其原因可能是相較于亞麻油與亞麻油微膠囊脂末，整粒亞麻籽中90%脂質直接過瘤胃后被消化道吸收，肉中CLA沉積主要來源于機體SCD酶的去飽和化[35]，而亞麻油微膠囊組的CLA一部分來源于機體內代謝，另一部分為在瘤胃中經(jīng)微生物對ALA等PUFA作異構化生成CLA前體物TVA等物質再經(jīng)組織去飽和，而絕大多數(shù)亞麻油經(jīng)瘤胃時被微生物氫化，其CLA主要來源于前提物在組織中去飽和的代謝途徑[36]。添加亞麻籽使機體組織合成CLA底物的能力高于其他兩組，故其對SCD下調酶基因的表達更為明顯，而亞麻油微膠囊脂末因瘤胃氫化產(chǎn)生CLA，雖含量高于亞麻籽組但并未抑制SCD酶的表達，推測可能相較亞麻籽其具有高SCD酶活，進而沉積CLA，具體作用機制還有待進行具體的研究。但總體上反映出添加亞麻籽微膠囊脂末可更好的提供PUFA底物，使更多CLA有效沉積于羊肉中。

4 結 論

4.1日糧添加亞麻油對肉羊生產(chǎn)性能產(chǎn)生負面影響，降低綿羊平均日增重；添加油脂可增加肌肉中脂肪含量，而亞麻油微膠囊脂末可降低剪切力，提高綿羊肌肉嫩度。

4.2添加不同形式亞麻油可提高肉羊肌肉中PUFA含量，尤其是添加亞麻籽微膠囊脂末可更好的增加功能性脂肪酸CLA的含量。

4.3日糧添加富含亞麻油物質能夠上調PPARγ、LPL基因的表達水平，并抑制SREBP1、SCD和FAS基因mRNA的表達。