彭偉如　馮奕習(xí)　梁晶晶

【摘要】 目的：探討脂聯(lián)素（Adiponectin，ADPN）聯(lián)合瘦素（Leptin，LP）在結(jié)直腸癌高危人群中的診斷價(jià)值。方法：選取2016年6月-2017年4月本院收治的結(jié)直腸癌患者50例作為A組，于同期另選取50例健康體檢者作為B組，測(cè)定兩組血清ADPN和LP水平，應(yīng)用受試者工作特征（Receiver Operating Characteristic curve，ROC）曲線分析血清ADPN和LP對(duì)結(jié)直腸癌的診斷效能。結(jié)果：A組血清ADPN水平明顯低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A組血清LP水平明顯高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；ROC曲線顯示，兩項(xiàng)聯(lián)合對(duì)結(jié)直腸癌的敏感度和特異度最高，約登指數(shù)和曲線下面積最大。結(jié)論：聯(lián)合檢測(cè)脂聯(lián)素聯(lián)合瘦素有助于提高結(jié)直腸癌的檢出率。

【關(guān)鍵詞】 脂聯(lián)素； 瘦素； 結(jié)直腸癌； 腫瘤標(biāo)志物

【Abstract】 Objective：To discuss the diagnosis value of combining Adiponectin（ADPN） and Leptin（LP） in high risk population with colorectal cancer.Method：A total of 50 patients with colorectal cancer from June 2016 to April 2017 were selected as A group，and 50 cases of health examiner were selected as B group.The serum levels of ADPN and LP were detected.ROC curve was used to analyze the evaluate the diagnostic efficiency of ADPN combined with LP measured in the study subjects.Result：Serum levels of ADPN in A group was lower than that of B group（P<0.05）.Serum levels of LP in A group was higher than that of B group（P<0.05）.ROC curve showed：the sensitivity，specificity，Youden index and AUC of ADPN+LP was the highest.Conclusion：The combined screening of ADPN and LP can significantly improve the detection rate of colorectal cancer.

【Key words】 Adiponectin； Leptin； Colorectal cancer； Tumor marker

First-authors address：The Hospital of Traditional Chinese Medicine in Dongguan City，Dongguan 523000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.21.033

一項(xiàng)關(guān)于結(jié)直腸癌TNM分期的臨床研究顯示，結(jié)直腸癌是高度異質(zhì)性的腫瘤，患者生存及預(yù)后與分期與所在臨床分期或病理分期密切相關(guān)[1]。早期結(jié)直腸癌往往能夠通過(guò)外科手術(shù)根治，而進(jìn)展期或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌一般預(yù)后較差[2-4]。由于結(jié)直腸癌起病隱匿、高危人群疾病預(yù)防知識(shí)不足等原因，有50%～70%的結(jié)直腸癌患者新診斷時(shí)已是進(jìn)展期甚至晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)間[5-7]。因此，一種適合用于結(jié)直腸癌早期篩查的診斷試驗(yàn)或能降低結(jié)直腸癌的進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)和減輕公共衛(wèi)生負(fù)擔(dān)?，F(xiàn)階段，內(nèi)窺鏡檢查、影像學(xué)檢查、脫落細(xì)胞學(xué)檢查及CA199等血清腫瘤標(biāo)志物檢查均不符合簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、靈敏度高及早期診斷等要求[8-9]。為此，本院開(kāi)展此項(xiàng)研究，旨在探討脂聯(lián)素（Adiponectin，ADPN）聯(lián)合瘦素（Leptin，LP）在結(jié)直腸癌高危人群中的診斷價(jià)值，為結(jié)直腸癌診斷提供科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年6月-2017年4月本院收治的結(jié)直腸癌患者50例作為A組，年齡37～75歲，平均（61.42±9.40）歲；體質(zhì)指數(shù)（BMI）19～29 kg/m2，

平均（25.31±2.49）kg/m2；男27例，女23例。于同期另選取50例健康體檢者作為B組，其中年齡35～73歲，平均（57.28±9.76）歲；BMI 20～28 kg/m2，平均（24.50±1.92）kg/m2；男27例，女23例。

1.2 方法 采用真空釆血管抽取受試者早晨空腹肘靜脈血5 mL，全血靜置120 min后，真空離心濃縮儀（德國(guó)sigma公司）分離上清液，血清移至試管中，放置于-80 ℃冰箱冷凍保存。采用固相夾心ELISA法測(cè)定受試者血清中脂聯(lián)素和瘦素水平，脂聯(lián)素和瘦素的試劑盒均購(gòu)自廣州邊金生物科技有限公司，操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，并有相應(yīng)的質(zhì)量控制措施，具體如下：（1）試劑盒準(zhǔn)備：試劑盒使用前30 min室溫下凍融；濃縮洗滌液用水浴加熱以溶解結(jié)晶；濃縮洗滌液沖兌蒸餾水（體積分?jǐn)?shù)1︰1），調(diào)配成洗滌緩沖液備用；顯色液A沖兌顯色液B（體積分?jǐn)?shù)1︰1），調(diào)配成顯色劑A、B備用。（2）操作程序：在酶標(biāo)包被板的第1、2號(hào)孔中添加100 μL標(biāo)準(zhǔn)品，繼續(xù)添加50 μL稀釋液，混勻；在第1、2號(hào)孔中各取100 μL樣品稀釋液，添加到第3、4號(hào)孔中，繼續(xù)添加50 μL稀釋液，混勻；在第3、4號(hào)孔中各取100 μL樣品稀釋液，棄掉50 μL后，再添加到第5、6號(hào)孔中，繼續(xù)往第5、6號(hào)孔中添加50 μL稀釋液，混勻；在第5、6號(hào)孔中各取50 μL樣品稀釋液，添加到第7、8號(hào)孔中，繼續(xù)往第7、8號(hào)孔中添加50 μL稀釋液，混勻；在第7、8號(hào)孔中各取50 μL樣品稀釋液，添加到第9、10號(hào)孔中，繼續(xù)往第9、10號(hào)孔中添加50 μL稀釋液，混勻，之后棄掉50 μL樣品稀釋液；第11、12號(hào)孔分別設(shè)空白對(duì)照孔（不添加樣品和酶標(biāo)試劑）；第13、14號(hào)孔分別待測(cè)樣品孔（添加50 μL樣品稀釋液）。封板后置溫育

30 min（37 ℃）。溫育后解除封板，每孔添加滿洗滌緩沖液，在靜置30 s 后棄掉，如此反復(fù)5次，拍干。標(biāo)準(zhǔn)孔中添加50 μL酶標(biāo)試劑。再次溫育、洗滌，步驟同上。在37 ℃、避光環(huán)境下，每孔各添加50 μL顯色劑A、B，混勻，靜置15 min。每孔各添加50 μL終止液，混勻，靜置15 min?？瞻讓?duì)照孔調(diào)零，450 mm波長(zhǎng)讀板（OD值）。以標(biāo)準(zhǔn)物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在笛卡爾坐標(biāo)系上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中脂聯(lián)素和瘦素質(zhì)量濃度，乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際質(zhì)量濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料若呈正態(tài)分布組間用（x±s）表示，比較采用配對(duì)資料t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。以活體組織檢查結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，應(yīng)用ROC曲線分析血清ADPN和LP對(duì)結(jié)直腸癌的診斷效能。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清ADPN和LP水平比較 A組血清ADPN水平明顯低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A組血清LP水平明顯高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 血清ADPN和LP對(duì)結(jié)直腸癌的診斷效能 以

7.6 mg/L為截點(diǎn)值，ADPN對(duì)結(jié)直腸癌的敏感度為82.0%、特異度為72.0%、AUC為76.61%、約登指數(shù)為0.54；以3.1 ng/mL為截點(diǎn)值，LP對(duì)結(jié)直腸癌的敏感度為68.0%、特異度為64.0%、AUC為65.84%、約登指數(shù)為0.32；ADPN聯(lián)合LP對(duì)結(jié)直腸癌的敏感度為88.0%、特異度為76.0%、AUC為81.28%、約登指數(shù)為0.64。見(jiàn)表2。

3 討論

ADPN是脂肪細(xì)胞分泌的一種內(nèi)源性生物活性多肽或蛋白質(zhì)，其通過(guò)多條路徑抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖、誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[10-11]。已有循證醫(yī)學(xué)證據(jù)表明，ADPN是結(jié)直腸癌的獨(dú)立保護(hù)因素[12]。LP是一種由脂肪組織分泌的蛋白質(zhì)類(lèi)激素，其通過(guò)多條信號(hào)通路參與細(xì)胞及細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、黏著、侵襲及癌組織新生血管形成[13-16]。已有基因組學(xué)證據(jù)表明，LP的基因多態(tài)性顯著影響結(jié)直腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[17]。本研究結(jié)果顯示，A組血清ADPN水平比B組低，A組血清LP水平比B組高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示，結(jié)直腸癌患者血清ADPN低表達(dá)，結(jié)直腸癌患者血清LP高表達(dá)。應(yīng)用ROC曲線和整合區(qū)分指數(shù)評(píng)價(jià)血清標(biāo)志物對(duì)疾病的診斷價(jià)值的研究先前已有報(bào)道。因此，血清ADPN和LP或可用于結(jié)直腸癌的鑒別診斷、早期診斷及預(yù)后判斷等方面。文獻(xiàn)[18-19]也得出過(guò)類(lèi)似結(jié)果，不過(guò)受制于研究方法較為單一，故未能揭示血清ADPN和LP對(duì)結(jié)直腸癌的診斷價(jià)值?；谶@一現(xiàn)況，本研究進(jìn)一步應(yīng)用ROC曲線分析血清ADPN和LP對(duì)結(jié)直腸癌的診斷效能。

以病理檢查結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，應(yīng)用sigmaplot科學(xué)繪圖軟件繪制ROC曲線，求得ADPN對(duì)結(jié)直腸癌的最大約登指數(shù)（特異度+敏感度-1）為0.54，以最大約登指數(shù)為截點(diǎn)值，求得ADPN對(duì)結(jié)直腸癌的最佳截點(diǎn)值為7.6 mg/L，在上述截點(diǎn)值下，ADPN對(duì)結(jié)直腸癌的敏感度為82.0%、特異度為72.0%、AUC為76.61%。依照上述方法，求得LP對(duì)結(jié)直腸癌的最佳截點(diǎn)值為3.1 ng/mL，在上述截點(diǎn)值下，LP對(duì)結(jié)直腸癌的敏感度為68.0%、特異度為64.0%、AUC為65.84%、約登指數(shù)為0.32。靈敏度越高，代表該診斷試驗(yàn)漏診概率越?。惶禺惗仍礁?，代表該診斷試驗(yàn)誤診概率越?。籄UC是一項(xiàng)能夠反映診斷試驗(yàn)總體診斷效能的指標(biāo)，不像敏感度、特異度有對(duì)應(yīng)的臨床解釋?zhuān)话阏J(rèn)為AUC越大表示診斷試驗(yàn)的診斷效能約高；約登指數(shù)用于評(píng)價(jià)診斷試驗(yàn)的真實(shí)性，理想的診斷試驗(yàn)約登指數(shù)應(yīng)為1[20]。由此可見(jiàn)，血清ADPN和LP均能夠用于診斷結(jié)直腸癌，可是特異度、敏感度、真實(shí)性、診斷效能均不甚理想。聯(lián)合試驗(yàn)往往能夠提高診斷試驗(yàn)的診斷效能，為此，筆者使用整合區(qū)分指數(shù)串聯(lián)血清ADPN和LP診斷結(jié)直腸癌。本研究結(jié)果顯示，兩項(xiàng)聯(lián)合對(duì)結(jié)直腸癌的敏感度為88.0%、特異度為76.0%、AUC為81.28%、約登指數(shù)為0.64。由此可見(jiàn)，兩項(xiàng)聯(lián)合診斷結(jié)直腸癌能夠提高特異度、敏感度、真實(shí)性、診斷效能。

綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)脂聯(lián)素聯(lián)合瘦素有助于提高結(jié)直腸癌的檢出率。

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（收稿日期：2018-04-24） （本文編輯：程旭然）