周堯

摘 要：以無菌播種下的番茄無菌苗作為研究對(duì)象，通過采用正交試驗(yàn)的方法，對(duì)番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)以及植株的再生體系進(jìn)行詳細(xì)分析，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)探討。在構(gòu)建植株再生體系的基礎(chǔ)上，促進(jìn)了番茄植株的茁壯生長(zhǎng)。

關(guān)鍵詞：番茄；下胚軸；子葉；組織培養(yǎng)；植株；再生體系

文章編號(hào)： 1005-2690（2018）02-0100-02 中圖分類號(hào)： S641.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： B

在轉(zhuǎn)基因技術(shù)迅速發(fā)展的前提下，人們對(duì)番茄的研究也越來越多，積極促進(jìn)了改良番茄新品種更好的發(fā)展。番茄作為一種蔬菜性作物，在基因工程方面得到了很好的發(fā)展。不僅是因?yàn)榉训脑耘噙^程簡(jiǎn)單，更重要的是人們對(duì)番茄遺傳理論方面的研究較為深入[1]，這都為基因工程的穩(wěn)定發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。構(gòu)建番茄植株再生體系，促進(jìn)了番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)工作的順利進(jìn)行，并提供了可靠的參與依據(jù)，通過采取誘導(dǎo)方式來獲得再生植株，為番茄遺傳轉(zhuǎn)化提供了方便。

1 試驗(yàn)材料與條件

1.1 研究材料

本次研究選取了來自中國(guó)蔬菜花卉研究院的番茄品種，主要有美麗櫻桃番茄、中雜9號(hào)、中蔬4號(hào)、毛粉802[2]、串珠櫻桃番茄及麗春番茄等6個(gè)品種的下胚軸、葉片以及莖段作為外植體。

1.2 組織培養(yǎng)分析

將番茄無菌苗在清水中浸泡48 h，消毒3 min，使用無菌水對(duì)其進(jìn)行5次沖洗。在無菌的條件下將番茄苗接種到培養(yǎng)基上，溫度為25～30 ℃[3]，使其在黑暗的環(huán)境中發(fā)芽，并在發(fā)芽后，及時(shí)將其放入培養(yǎng)箱內(nèi)。光照16 h，光照強(qiáng)度達(dá)1 500～1 900 lx，在光照培養(yǎng)后的第6～8天就可以獲得無菌番茄苗。

1.3 除掉外植體

當(dāng)無菌番茄苗的苗齡達(dá)到10 d就可以將其下胚軸以及子葉等外植體除掉，切去葉柄和葉尖，剩余的部分為5～8 mm的切段。當(dāng)不定芽長(zhǎng)到2 cm時(shí)，及時(shí)將不定芽剪掉并用于培養(yǎng)基接種，20 d后統(tǒng)計(jì)生根結(jié)果。在此過程中需要明確：生根率=生根芽數(shù)量/幼芽數(shù)量×100%，及時(shí)觀察根的形態(tài)，并測(cè)量根長(zhǎng)度。

1.4 栽培條件及其成活率

將需要移栽的番茄苗移到自然溫度條件下放置4 d，保證植株的自然光照，第4天加入少量水，使其與空氣進(jìn)行更好的接觸。第6天取出植株，將其根部清洗干凈，然后栽入穴盤中。在移栽中要及時(shí)舍棄劣質(zhì)苗，優(yōu)先選用根系發(fā)達(dá)的試驗(yàn)苗，保證其成活率。認(rèn)真做好保濕遮陰工作，只有這樣，方可確保移栽成活率達(dá)到85%以上。20 d后，將小苗移到大田進(jìn)行栽培，能夠達(dá)到99%的成活率。

2 試驗(yàn)結(jié)果分析

2.1 激素對(duì)番茄葉莖的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，番茄下胚軸和子葉外植體的葉芽分化能力很強(qiáng)，當(dāng)苗齡達(dá)到10 d時(shí)，外植體邊緣有明顯的膨大以及彎曲現(xiàn)象，逐漸產(chǎn)生了愈傷組織。伴隨著愈傷組織一天天長(zhǎng)大，出現(xiàn)了綠色的芽點(diǎn)，隨后芽點(diǎn)分化為單葉，此時(shí)每塊愈傷產(chǎn)生了4～5個(gè)芽點(diǎn)，其葉芽分化率達(dá)100%，僅有一部分的愈傷組織能實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)生根。

2.2 無菌培養(yǎng)基對(duì)番茄種子的影響

添加過蔗糖+MS的培養(yǎng)基，種子發(fā)芽率僅為20%；僅添加蔗糖的培養(yǎng)基，其發(fā)芽率為62%；而添加瓊脂的培養(yǎng)基，其發(fā)芽率卻達(dá)到了100%。從以上數(shù)據(jù)看出，蔗糖和無機(jī)鹽對(duì)番茄種子的發(fā)芽起到了很重要的促進(jìn)作用，是番茄種子發(fā)芽的敏感要素。研究表明，種子的萌發(fā)率對(duì)培養(yǎng)基產(chǎn)生了決定性的影響，同時(shí)在添加蔗糖和無機(jī)鹽的前提下，培養(yǎng)基形成了一定滲透壓[4]，從而促進(jìn)了種子萌發(fā)。

2.3 培養(yǎng)基對(duì)植株再生的影響

只有保證了番茄苗生長(zhǎng)環(huán)境以及溫度適宜，才能實(shí)現(xiàn)番茄苗的正常分化。在培養(yǎng)基中，番茄生根可以有效形成相對(duì)粗壯的根部，這種根部植株的成果率較高。同時(shí)多次實(shí)踐也說明，優(yōu)良的培養(yǎng)基對(duì)植株生長(zhǎng)起到了很好的誘導(dǎo)效果，經(jīng)過誘導(dǎo)的培養(yǎng)基其生根率達(dá)到了82%。同時(shí)相關(guān)人員發(fā)現(xiàn)，在本次試驗(yàn)中，番茄試管苗長(zhǎng)勢(shì)良好，對(duì)其經(jīng)過組織培養(yǎng)后可以保證其生根率達(dá)100%，蔗糖、無機(jī)鹽、無機(jī)酸這種組合對(duì)番茄苗的生根更有效。

3 小結(jié)

由于不同品種對(duì)激素以及培養(yǎng)基的要求有所不同，因此要想實(shí)現(xiàn)番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)的平衡發(fā)展，一定要明確培養(yǎng)條件，同時(shí)加大對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的研究力度，充分考慮多方面因素，構(gòu)建植株再生體系，并且在誘導(dǎo)分化的情況下，成功建立番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)再生體系，從而有效提高種子成活率。

參考文獻(xiàn)：

[ 1 ] 郟艷紅，王姝，劉仲齊.番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)及植株再生的研究[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，18（01）：16-18.

[ 2 ] 賴小芳，陳偉強(qiáng)，王健康，等.番茄“7728”組織培養(yǎng)及植株再生研究[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017（04）：35-39.

[ 3 ] 薛萍，肖艷雙，徐巖，等.番茄不同基因型對(duì)植株再生能力的影響[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，62（05）：38-39.

[ 4 ] 仇燕，劉紅霄，楊松燁.番茄高效再生體系的建立[J].河北科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，33（01）：83-88.

（收稿日期：2018-01-15）