何易雯 ，付傳香 ，惠愛玲 ，吳澤宇 ，許 坤 ，張文成

（1.合肥工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，農(nóng)產(chǎn)品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥230009；2.安徽德信佳生物醫(yī)藥有限公司，安徽阜陽236000）

東莨菪堿是一種托品烷類生物堿，具有散瞳、解痙、抗膽堿、麻醉、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜等作用。天然東莨菪堿的制備主要以洋金花為原料，其有效形態(tài)為左旋手性體，在制備及儲(chǔ)存過程中易消旋生成D，L-東莨菪堿，失去光學(xué)活性，因此，對(duì)東莨菪堿的旋光穩(wěn)定性進(jìn)行研究，據(jù)此開發(fā)出提高其旋光穩(wěn)定性的措施，從而為東莨菪堿的提取純化及儲(chǔ)存提供依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)選取制備及儲(chǔ)存過程中易控制的酸堿度、溫度及光照度三種因素為主要研究對(duì)象，以比旋光度的變化為指標(biāo)，探究這三種因素對(duì)東莨菪堿旋光活性的影響。

1 材料與儀器

1.1 材料與試劑

蒸餾水（1.5L，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）；鹽酸（500 mL，AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；氫氧化鈉（500 mL，AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；乙腈（4 L，HPLC，美國(guó) Sigma-Aldrich公司）；醋酸銨（500 mL，AR，廣東汕頭市西隴化工廠）；三乙胺（500 mL，AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；四氫呋喃（500 mL，HPLC，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；冰醋酸（500 mL，AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；東莨菪堿（≥98%，5 g，上海依赫生物科技有限公司）。

1.2 主要儀器

WZZ-2S數(shù)字式自動(dòng)旋光儀（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；WD-A藥物穩(wěn)定性檢查儀（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）；HH-1數(shù)顯恒溫磁力攪拌水浴鍋（常州國(guó)宇儀器制造有限公司），Agilent 1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 東莨菪堿在不同酸堿度溶液中的旋光穩(wěn)定性

取10份東莨菪堿，每份約30 mg，精密稱定，用10 mL pH 值分別為 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 的水溶液進(jìn)行溶解，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH，溶解后立即進(jìn)行旋光度測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)三次，記錄初始旋光度值并計(jì)算比旋光度。然后將樣品溶液置于藥物穩(wěn)定性檢查儀內(nèi)，25℃下避光保存24 h，每隔1 h取出測(cè)定一次旋光度值，記錄比旋光度值的變化，對(duì)旋光度值發(fā)生改變的樣品進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，分析其是否有新物質(zhì)生成。

2.2 東莨菪堿在不同溫度下的旋光穩(wěn)定性

取5份東莨菪堿，每份約30 mg，精密稱定，分別用10 mL的蒸餾水進(jìn)行溶解，溶解后溶液立即進(jìn)行旋光度測(cè)定，記錄初始旋光度值并計(jì)算比旋光度。然后將樣品溶液放入水浴鍋內(nèi)分別在 20℃、40℃、60℃、80℃、100℃下避光保存24 h，每份樣品均每隔1 h取出測(cè)定一次旋光度值，記錄比旋光度值的變化，對(duì)旋光度值發(fā)生改變的樣品進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，分析其是否有新物質(zhì)生成。

2.3 東莨菪堿在不同光照度下的旋光穩(wěn)定性

取7份東莨菪堿，每份約30 mg，精密稱定，分別用10 mL的蒸餾水進(jìn)行溶解，溶解后溶液立即進(jìn)行旋光度測(cè)定，記錄初始旋光度值并計(jì)算比旋光度。然后將樣品溶液置于藥物穩(wěn)定性檢查儀內(nèi)分別在避光和光照度為1000、3000、5000 及 7000 lx條件下于 25℃保存 24 h，每隔1 h取出測(cè)定一次旋光度值，記錄比旋光度值的變化，對(duì)旋光度值發(fā)生改變的樣品進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，分析其是否有新物質(zhì)生成。

比旋光度值計(jì)算公式：[α]=100α/L*C

式中：α-旋光度；L-旋光管長(zhǎng)度，dm；C-溶液的濃度，g/100 mL。

3 結(jié)果與分析

3.1 東莨菪堿在不同酸堿度溶液中的旋光穩(wěn)定性

東莨菪堿在不同酸堿度溶液中的比旋光度變化結(jié)果如表1所示，從表1數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，東莨菪堿在蒸餾水（pH=7）中的初始旋光度值為-25.8°，其較之正常的[α]庫-28°（水）明顯減小，說明市售東莨菪堿純品中已有部分消旋體產(chǎn)生；而東莨菪堿在堿性溶液中的初始旋光度值與在蒸餾水中的初始旋光度值相比又有顯著減小，且隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，旋光度值只在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，不再產(chǎn)生明顯改變，說明東莨菪堿在堿性溶液中旋光度的變化是迅速完成的，但是，與目前報(bào)道中提到的東莨菪堿在稀堿中更易消旋不同的是，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，東莨菪堿在強(qiáng)堿中的比旋光度變化較之弱堿更大，而對(duì)堿性狀態(tài)下產(chǎn)生變旋反應(yīng)的樣品溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，溶液中產(chǎn)生了新物質(zhì)托品酸，且強(qiáng)堿中的含量比弱堿中含量更高，據(jù)此推測(cè)東莨菪堿在強(qiáng)堿中更易被強(qiáng)降解是其旋光度值變化更大的主要原因。東莨菪堿在堿液和水中的高效液相色譜對(duì)比圖如圖1所示。

由圖1可知，對(duì)于酸性溶液中的東莨菪堿，其初始比旋光度值與在蒸餾水中的初始比旋光度值相比幾乎相同，但是隨著酸性的增強(qiáng)及儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，溶液的比旋光度值會(huì)出現(xiàn)小幅度減小，對(duì)發(fā)生消旋反應(yīng)的樣品溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)溶液中也生成了托品酸，但含量非常低。

表1 東莨菪堿在不同酸堿度溶液中的比旋光度變化結(jié)果

圖1 東莨菪堿在堿液和水中的高效液相色譜對(duì)比圖

3.2 東莨菪堿在不同溫度下的旋光穩(wěn)定性

東莨菪堿在不同溫度下的比旋光度變化結(jié)果如表2所示，從表2數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，儲(chǔ)存24 h期間，溫度的變化對(duì)東莨菪堿的旋光活性影響不大，但是，當(dāng)溫度達(dá)到80℃以上時(shí)，旋光度會(huì)隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)和溫度的升高而不斷減小，最終達(dá)到平衡。對(duì)旋光度發(fā)生改變的樣品進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中也有托品酸生成。因此，在東莨菪堿的儲(chǔ)存和制備過程中，應(yīng)盡量避免在高溫環(huán)境中。

3.3 東莨菪堿在不同光照度下的旋光穩(wěn)定性

東莨菪堿在不同光照度下的比旋光度變化結(jié)果如表3所示，從表3可以發(fā)現(xiàn)，東莨菪堿在避光條件下的比旋光度值幾乎不變，而當(dāng)照度不斷升高時(shí)，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，比旋光度快速減小，且光照度越高，減小速度越快，對(duì)旋光度發(fā)生改變的樣品進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中有大量托品酸的生成。因此，在東莨菪堿的儲(chǔ)存和制備過程中，應(yīng)盡量避免強(qiáng)光照，特別是儲(chǔ)存過程中，應(yīng)用棕色瓶避光保存。

表2 東莨菪堿在不同溫度下的比旋光度變化結(jié)果

4 結(jié)論

本文主要探究了酸堿度、溫度和光照度對(duì)東莨菪堿旋光活性的影響，結(jié)果顯示：①東莨菪堿在中性偏酸性條件下相對(duì)更加穩(wěn)定，在強(qiáng)酸中也會(huì)產(chǎn)生少量變旋和降解，而在堿性條件下會(huì)快速發(fā)生變旋和降解，堿性越強(qiáng)，越容易降解；②東莨菪堿在低溫環(huán)境下較為穩(wěn)定，當(dāng)溫度超過80℃后，會(huì)產(chǎn)生快速的變旋和降解反應(yīng)；③東莨菪堿在避光條件下較為穩(wěn)定，當(dāng)光照度增加時(shí)，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，東莨菪堿會(huì)逐漸變旋和降解。

表3 東莨菪堿在不同光照度下的比旋光度變化結(jié)果

因此，在制備過程中，應(yīng)根據(jù)情況選擇對(duì)東莨菪堿旋光活性影響小的條件進(jìn)行。在儲(chǔ)存過程中，可采取用棕色瓶避光低溫保存或者轉(zhuǎn)化為東莨菪堿鹽的形式進(jìn)行儲(chǔ)存等方式提高東莨菪堿的旋光穩(wěn)定性。□