黃娟

(濟(jì)源市人民醫(yī)院皮膚科，河南 濟(jì)源 459000)

鱗狀細(xì)胞癌簡稱鱗癌，是發(fā)生于表皮或附屬器細(xì)胞的一種惡性腫瘤[1]。由于腫瘤細(xì)胞具有失控性持續(xù)增殖的特性，細(xì)胞凋亡在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中有重要意義。從細(xì)胞凋亡角度研究腫瘤的發(fā)生是目前研究的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，bcl-2家族的表達(dá)和調(diào)控是影響細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素之一[2]。B淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）和Bax蛋白是bcl-2家族中最有代表性的抑制凋亡和促進(jìn)凋亡基因[3]。近來有研究報(bào)道，在鱗癌中發(fā)現(xiàn)Bcl-2基因的不同程度表達(dá)[4]。但是目前關(guān)于Bcl-2、Bax與鱗癌的相關(guān)性的研究較少，因此本研究探討了B淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）、Bax蛋白在皮膚鱗癌組織中的表達(dá)水平并分析其與皮膚鱗癌臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月-2017年10月我院手術(shù)后皮膚鱗癌組織標(biāo)本120例為病灶組、癌旁組織60例為對照組。病灶組，年齡32～75歲，平均54.4±15.7歲，男性56例，女性64例；病理學(xué)組織類型包括高分化36例，中分化41例，低分化43例；臨床分期I期27例，Ⅱ期44例，Ⅲ期49例；T1（腫瘤最大直徑≤2cm）11例、T2（腫瘤最大直徑＞2cm≤5cm）20 例、T3（腫瘤最大直徑＞5cm）25 例、T4（腫瘤侵及深部皮膚下的結(jié)構(gòu)，如軟骨、骨骼肌或骨）64例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的45例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的75例。癌旁組，年齡30～74歲，平均52.3±13.2歲，男性31例，女性29例；兩組患者的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ⑴術(shù)前未合并其他部位惡性腫瘤；⑵術(shù)后病理證實(shí)為皮膚鱗癌；⑶手術(shù)根治性切除腫瘤；⑷有完整規(guī)范的術(shù)后病理報(bào)告及隨訪資料；⑸術(shù)前未接受放化療；

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者；⑵未能完成隨訪者；⑶因其他部位腫瘤進(jìn)行過放化療治療者。

1.3 免疫組化染色方法 免疫組化染色采用S-P法，小鼠抗人Bcl-2、Bax單克隆抗體及羊抗小鼠多克隆抗體（二抗）試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司，抗體稀釋濃度為1:100，按中山生物技術(shù)有限公司試劑盒內(nèi)提供的步驟操作。

1.4 免疫組化判定標(biāo)準(zhǔn) 陰性對照用PBS代替一抗進(jìn)行染色，結(jié)果做為陰性；陽性對照以各抗體說明書所提供組織進(jìn)行染色，陽性顯色為棕黃色顆粒，標(biāo)準(zhǔn)光鏡下以細(xì)胞漿、膜中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色；采取二次計(jì)分法：先將染色按強(qiáng)度計(jì)分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。再將陽性細(xì)胞百分比計(jì)分，0分為陽性細(xì)胞為＜25%，1分為25%～50%，2分為51%～75%，3分為＞75%。用染色強(qiáng)度得分與細(xì)胞數(shù)得分之和作為判斷表達(dá)的結(jié)果，0分為陰性 (-)，1～2分為弱陽性 (+)，3～4 分為中等陽性 (++)，5～6 分為強(qiáng)陽性(+++)。所有病理切片均由高年資病理醫(yī)師盲法評(píng)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；P值＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組組織標(biāo)本中Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)情況比較 病灶組中Bcl-2蛋白陽性率為71.67%，明顯高于對照組的31.67%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；病灶組中Bax蛋白陽性率為57.50%，明顯低于對照組的78.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。見表 1、表 2。

表1 組織標(biāo)本中Bcl-2蛋白表達(dá)情況比較

表2 組織標(biāo)本中Bax蛋白表達(dá)情況比較

2.3 皮膚鱗癌組織標(biāo)本中的Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 Bcl-2蛋白陽性表達(dá)情況與腫瘤組織學(xué)分化程度、TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；而與年齡、性別無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Bax蛋白陽性表達(dá)情況與腫瘤組織學(xué)分化程度有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；而與腫TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡、性別無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表 3、表 4。

3 討論

皮膚鱗癌是白色人種中常見的的惡性腫瘤之一，多發(fā)于身體暴露部位，如頭、面、頸、手背等部位，約占發(fā)病總數(shù)的81.1%[5]。皮膚鱗癌在華人中發(fā)病率較低，但是隨著社會(huì)的發(fā)展以及人們生活方式的改變，近十年來皮膚鱗癌發(fā)病率逐年上升，成為日益關(guān)注的一個(gè)公共衛(wèi)生問題。皮膚鱗癌病因尚不明確，目前其發(fā)生可能與以下因素有關(guān)：①環(huán)境因素，例如日常曝曬與紫外線照射；②病毒感染，在皮膚基底細(xì)胞癌 (basal cell carcinoma，BCC)和鱗狀細(xì)胞癌 (squamous cell carcinoma，SCC)等皮膚癌中可檢測到人類乳頭瘤病毒[6]；③化學(xué)致癌物質(zhì)，如瀝青、焦油衍化物等長期刺激。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的程序性死亡，是細(xì)胞受內(nèi)外因素的影響誘導(dǎo)啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)的凋亡機(jī)制的結(jié)果[7]。隨著對皮膚鱗癌發(fā)病機(jī)制的研究，認(rèn)為在皮膚鱗癌發(fā)生和發(fā)展過程中，細(xì)胞凋亡抑制起著重要作用[8]。在對惡性腫瘤進(jìn)行治療時(shí)，放療和生物治療都是主要通過誘導(dǎo)凋亡從而達(dá)到治療效果。

Bcl-2家族是細(xì)胞凋亡過程中的一類調(diào)節(jié)因子，其表達(dá)和調(diào)控是影響細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素之一。此基因家族包含兩類功能相反的基因，一類是抑制凋亡的基因例如Bcl-2等，另一類是促進(jìn)細(xì)胞凋亡的基因如Bax等[9，10]。Bcl-2是首先在濾泡性B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)現(xiàn)的一個(gè)基因，是已經(jīng)被公認(rèn)的抑制凋亡的因子。過表達(dá)bcl-2抑制許多因素誘導(dǎo)的多種細(xì)胞凋亡。研究表明B淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）蛋白在皮膚腫瘤中異常表達(dá)，且與其生物學(xué)行為密切相關(guān)[11]。Bax蛋白是Bcl-2家族中研究最廣泛的促凋亡蛋白，Bax與Bcl-2可形成同二聚體，也可相互作用形成異二聚體，并且Bax是Bcl-2活性的主要調(diào)控因子。研究顯示，Bax與Bcl-2的比例決定細(xì)胞是否接受誘導(dǎo)凋亡的信號(hào)[12]。Bax蛋白在皮膚鱗癌中陽性表達(dá)低于正常組織，從正常組織到癌組織其表達(dá)有逐漸下降的趨勢[13]，這一結(jié)果表明Bax蛋白表達(dá)降低與皮膚組織惡性轉(zhuǎn)化有一定關(guān)系。Lohmann[14]等使用免疫組化法檢測凋亡相關(guān)蛋白Bax與Bcl-2在皮膚癌組織中的表達(dá)，但未詳細(xì)報(bào)道其與細(xì)胞分化與增殖的關(guān)系，本研究運(yùn)用免疫組化技術(shù)觀察皮膚鱗狀細(xì)胞癌及正常組織中Bax與Bcl-2與細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)，探討其在皮膚組織惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)程中的作用。本研究結(jié)果顯示，Bcl-2蛋白在皮膚鱗癌組織中的表達(dá)水平明顯高于對照組 (P＜0．05)；Bax在皮膚鱗癌組織中的表達(dá)水平明顯低于對照組(P＜0．05)；研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]。表明Bcl-2、Bax參與了皮膚鱗癌的凋亡過程，且在細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮重要的作用。由于Bax是Bcl-2活性的主要調(diào)控因子，因此，推測皮膚惡性腫瘤的發(fā)生與Bax基因缺失引起的Bax蛋白的表達(dá)降低有密切關(guān)系，Bax有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2蛋白的表達(dá)與患者腫瘤的組織學(xué)分化程度、臨床病理學(xué)分期、腫瘤的浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān) (P＜0．05)；Bax蛋白的表達(dá)與腫瘤的組織學(xué)分化程度有關(guān)(P＜0．05)。表明Bcl-2、Bax不同表達(dá)水平直接影響癌細(xì)胞分化與增殖，并決定其病理類型和預(yù)后，因此檢測Bax表達(dá)狀況有助于皮膚鱗癌的早期診斷和預(yù)后判斷。

表3 皮膚鱗癌Bcl-2表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

表4 皮膚癌Bcl-2表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

綜上所述，Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)情況與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，因此檢測Bcl-2、Bax表達(dá)狀況有助于皮膚鱗癌的早期診斷和預(yù)后判斷，值得進(jìn)一步臨床推廣。