邵峰，步曉筠，楊潔，劉建成

(寧夏血液中心，寧夏 銀川 750000)

Rh血型系統(tǒng)是人類紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中最為重要的基于蛋白的血型系統(tǒng)，在已知血型系統(tǒng)中，它表達(dá)的抗原數(shù)量最多，分子機(jī)制也最復(fù)雜，現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)51種抗原，其中常見涉及臨床問題的Rh血型抗原主要是D，C，c，E，e這 5種。Rh陰性分布在人種間存在顯著差異，我國Rh陰性分布少數(shù)民族與漢族間也存在民族間差異，[1-4]此前針對(duì)回族的研究較少。研究者對(duì)寧夏回族自治區(qū)初篩確認(rèn)為Rh陰性的獻(xiàn)血者的血清學(xué)表型與不規(guī)則抗體進(jìn)行了回顧性分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年1月1日至2016年12月31日寧夏血液中心的初次無償獻(xiàn)血者共135159例。

1.2 儀器與試劑 Hemotype全自動(dòng)血型分析儀（意大利GSM公司），KA-2200型離心機(jī)（日本Kubota公司）；單克隆IgM和IgG抗-D混合劑（英國Millipore公司、加拿大Dominion Biologicals limited公司），IgG抗-D試劑、直接抗人球蛋白試劑、抗C、抗c、抗 E、抗e、抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清、篩選細(xì)胞、譜細(xì)胞試劑(上海血液生物醫(yī)藥公司)。

1.3 方法

1.3.1 Rh陰性初篩試驗(yàn) 使用英國Millipore單克隆IgM和IgG抗-D混合劑進(jìn)行鹽水微板初篩。

1.3.2 Rh陰性確認(rèn)試驗(yàn) 使用英國Millipore公司和加拿大Dominion Biologicals limited公司的單克隆IgM和IgG抗-D混合劑以及上海血液生物醫(yī)藥公司IgG抗-D試劑3種不同抗-D試劑，對(duì)初篩陰性者的受檢紅細(xì)胞進(jìn)行間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT)，同時(shí)做陰陽對(duì)照。觀察結(jié)果如果均陰性就確認(rèn)判定為Rh陰性。

1.3.3 Rh血清學(xué)表型鑒定 分別用抗C，抗c，抗E和抗e試劑對(duì)Rh陰性標(biāo)本進(jìn)行生理鹽水試管法血清學(xué)分型。

1.3.4 抗體篩查與鑒定 受檢血清用篩選細(xì)胞(3個(gè)篩選細(xì)胞)與自身細(xì)胞作為一組，通過鹽水法進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測，抗體篩選陽性時(shí)再用譜細(xì)胞與自身細(xì)胞為一組進(jìn)一步鑒定其特異性。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，基因頻率計(jì)算方法采用陸瓊[5]推導(dǎo)的公式計(jì)算進(jìn)行Hardy-Weinberg吻合度檢驗(yàn)，通過基因單體型計(jì)算出各個(gè)表現(xiàn)型的理論值，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。P＞0.05為期望值與觀察值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Rh陰性檢出比例 135159例標(biāo)本中共初篩511例，檢出D變異型54例(0.04%)，確認(rèn)Rh陰性457例(0.34%)，寧夏漢族標(biāo)本108835份中確認(rèn)為Rh陰性316例（0.29%），寧夏回族標(biāo)本22511例中確認(rèn)為Rh陰性122例（0.54%）。

2.2 Rh陰性獻(xiàn)血者中回族及漢族Rh陰性表型分布 寧夏漢族與寧夏回族Rh陰性各表型分布進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)卡方檢驗(yàn)，均無顯著性差異（P＞0.05）。漢族陰性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度檢驗(yàn)結(jié)果，觀察值與理論值經(jīng) χ2檢驗(yàn)，P＜0.05，證明調(diào)查數(shù)據(jù)不符合Hardy-Weinberg平衡?；刈尻幮员硇头植技癏ardy-Weinberg吻合度檢驗(yàn)結(jié)果，觀察值與理論值經(jīng)χ2檢驗(yàn)，P＞0.05，證明調(diào)查數(shù)據(jù)符合Hardy-Weinberg平衡，見表1及表2。

2.3 單倍型基因頻率分布情況 寧夏漢族單倍型基因頻率分布情況與國內(nèi)其他地區(qū)類似，寧夏回族單倍型基因頻率dce高于漢族，介于漢族與白種人之間。

2.4 血清不規(guī)則抗體篩查結(jié)果 457例Rh陰性獻(xiàn)血者血清中檢出含有不規(guī)則抗體的7例(1.5%)，其中5例為IgG類抗D抗體，1例為IgG類抗D抗體合并抗C抗體，1例特異性不明確；檢出不規(guī)則抗體的Rh陰性獻(xiàn)血者其中4例為dccee血清學(xué)表型，2例為dCcee血清學(xué)表型，1例為dccEe血清學(xué)表型。對(duì)檢出不規(guī)則抗體的獻(xiàn)血者隨訪調(diào)查，均為女性且均有妊娠史，其中3例合并輸血史。

3 討論

Rh陰性率及表型分布在人種間存在顯著差異，我國Rh陰性分布少數(shù)民族與漢族間也存在民族間差異。漢族標(biāo)本108835例中確認(rèn)為Rh陰性316例（0.29%），符合漢族Rh陰性分布范圍?；刈鍢?biāo)本22511例中確認(rèn)為Rh陰性122例 （0.54%），寧夏回族獻(xiàn)血者Rh陰性率高于漢族。

寧夏漢族人群的Rh陰性表現(xiàn)型dccee(58.86%)＞dCcee(28.80%)＞dccEe(4.43%)＞dCcEe(3.16%)＞dCCee(4.11%)，以 dccee 和 dCcee 為主，寧夏漢族Rh陰性表型分布與上海、深圳、石家莊地區(qū)RhD陰性人群的表型分布相似[6-8]。寧夏回族人群 RhD陰性血清學(xué)表型 dccee(66.39%)＞dCcee(23.77%)＞dccEe(4.92%)＞dCcEe(2.46%)＞dCCee(2.46%)，與寧夏漢族Rh陰性表型分布無顯著性差異，但回族Rh陰性人群dccee(66.39%)檢出頻率略高于漢族(58.86%)，體現(xiàn)出寧夏回族Rh陰性血型的分布特點(diǎn)。

表1顯示寧夏漢族Rh陰性單倍型頻率特點(diǎn)：dce(0.767203)＞dCe(0.199006)＞dcE(0.028874)＞dCE(0.006944)，寧夏漢族Rh陰性獻(xiàn)血人群中的單倍型基因頻率與上海、山東濰坊、南昌、洛陽等地區(qū)Rh陰性獻(xiàn)血者單倍型基因頻率相比較無差異[5，9-11]，體現(xiàn)出我國漢族人群Rh陰性血型分布特點(diǎn)，為進(jìn)一步探討Rh陰性血型在漢族人群遺傳學(xué)意義提供了一定的數(shù)據(jù)參考。本研究中寧夏漢族Rh陰性無償獻(xiàn)血人群中期望值與觀察值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Hardy-Weinberg吻合度不佳，考慮原因可能為寧夏漢族外來人口流入，外來基因摻入，改變?cè)袑幭臐h族群體的基因頻率。表2中顯示寧夏回族獻(xiàn)血者調(diào)查數(shù)據(jù)符合Hardy-Weinberg平衡，寧夏回族獻(xiàn)血者的基因頻率分布符合寧夏回族基因頻率分布特點(diǎn)?；刈錜h陰性單倍型頻率特點(diǎn)：dce(0.814801)＞dCe(0.155818)＞dcE (0.030191)＞dCE(0.000000)，與文獻(xiàn)報(bào)道的上海、南昌、青島、德國和高加索人的RhD陰性單倍型基因頻率分布情況比較，可以看出：寧夏漢族人群與上海、南昌、青島漢族人群相似，寧夏回族單倍型分布介于漢族與哈薩克族、德國、高加索白種人之間[5，10]。

表1 寧夏漢族Rh陰性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度檢驗(yàn)結(jié)果

表2 寧夏回族Rh陰性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度檢驗(yàn)結(jié)果

表3 各地區(qū)Rh陰性單倍型基因頻率分布情況

Rh血型系統(tǒng)抗原有很強(qiáng)的免疫原性，在缺少相應(yīng)抗原的個(gè)體中因輸血或妊娠等免疫刺激可產(chǎn)生相對(duì)應(yīng)的Rh血型抗體。本研究發(fā)現(xiàn)的不規(guī)則抗體7例均為女性，均有妊娠史，其中3例合并輸血史。隨著輸血醫(yī)學(xué)的發(fā)展，因Rh陰性患者無D抗原，對(duì)這類患者臨床上只輸Rh陰性血液，接觸E、C、c、e抗原刺激幾率增高，繼而產(chǎn)生抗體的幾率高，而輸血引起產(chǎn)生抗D者會(huì)逐漸少見。但Rh陰性患者因妊娠刺激產(chǎn)生抗D抗體幾率高于其他抗原，因而有多次輸血史和妊娠史的患者配血時(shí)應(yīng)把這些抗原作為常規(guī)檢測，為患者提供Rh系統(tǒng)相合的血液，減少輸血反應(yīng)的發(fā)生。

寧夏回族獻(xiàn)血者Rh陰性率高于漢族，寧夏回族獻(xiàn)血者Rh陰性表型分布與漢族獻(xiàn)血者間未見顯著性差異，但單倍型基因頻率呈現(xiàn)本民族特點(diǎn)。由于本研究檢測Rh確認(rèn)未進(jìn)行吸收放散實(shí)驗(yàn)，因而不能排除Del的存在導(dǎo)致觀察值數(shù)據(jù)偏高的問題。通過對(duì)寧夏Rh陰性表型及基因頻率的調(diào)查和分析，為今后稀有血型供者庫積累數(shù)據(jù)，便于科學(xué)合理用血指導(dǎo)。目前尚缺乏在國內(nèi)不同地區(qū)間不同民族間Rh陰性人群分型分布的大規(guī)模調(diào)查數(shù)據(jù)，不同地區(qū)不同民族間的分型分布差異情況，有待于進(jìn)一步研究。