梁藍月　聶秀霞　王榮侃

【摘要】 目的：分析不同方法測定復方曲安奈德水楊酸搽劑中醋酸曲安奈德含量的效果，以及醋酸曲安奈德含量和搽劑質(zhì)量標準的相關性。方法：收集3個批次復方曲安奈德水楊酸搽劑樣品，分別使用分光光度法及高效液相色譜法對其中的醋酸曲安奈德含量進行測量，并對兩種方法測量的醋酸曲安奈德含量進行對比分析。結果：分光光度法的平均測得量、平均回收率、RSD（相對標準偏差）與高效液相色譜法比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。同時兩種方法對樣品的檢測結果均在規(guī)定范圍內(nèi)。結論：在對復方曲安奈德水楊酸搽劑中醋酸曲安奈德含量進行測定過程中，通過分光光度法以及高效液相色譜法均能夠起到一定效果。分光光度法操作簡單快速，但專屬性不強，而高效液相色譜法相對關物質(zhì)測定更加準確可靠，因此有更高使用價值。同時也可作為對復方曲安奈德水楊酸搽劑質(zhì)量控制的方法。

【關鍵詞】 復方曲安奈德水楊酸搽劑； 分光光度法； 高效液相色譜法

Determination of Triamcinolone Acetonide in Compound Triamcinolone Acetonide Salicylic Acid Liniment by Different Methods and Its Correlation with Liniment Quality Standards/LIANG Lanyue，NIE Xiuxia，WANG Rongkan，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（19）：0-027

【Abstract】 Objective：To analyze the effect of different methods on the determination of triamcinolone acetonide in compound triamcinolone salicylate salicylic acid liniment and the correlation between triamcinolone acetonide and liniment quality standard.Method：A total of 3 batches of compound triamcinolone acetonide salicylic acid liniment samples were collected and their contents of triamcinolone acetonide were measured by spectrophotometry and high performance liquid chromatography respectively.The contents of triamcinolone acetonideof two methods were comparatively analyzed.Result：There were no significant difference in the average measured value，average recovery，RSD between the two methods（P>0.05）.At the same time，the test results of the two methods were within the specified range.Conclusion：In the determination of triamcinolone acetonide in compound triamcinolone acetonide salicylic acid liniment，spectrophotometry and high performance liquid chromatography can all play a certain role.Spectrophotometry is simple and fast， but its specificity is not strong， and high performance liquid chromatography is more accurate and reliable than the relative substance determination， so it has higher use value.At the same time it can also be used as compound triamcinolone salicylic acid liniment quality control methods.

【Key words】 Compound triamcinolone acetonide salicylic acid liniment； Spectrophotometry； High performance liquid chromatography

First-authors address：Zhongshan Second Peoples Hospital，Zhongshan 528447，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.19.007

復方曲安奈德水楊酸搽劑是臨床較常見藥物，對手癬、體癬、足癬、股癬等皮膚類疾病均可起到較好臨床療效[1]。對于復方曲安奈德水楊酸搽劑而言，其中的主要成分為水楊酸、氯霉素和醋酸曲安奈德。此幾種藥物分別為單一制劑時，對含量的測定方法主要有永停滴定法及比色法等。但在將兩種藥物混合后，這些方法已經(jīng)無法起到較為準確有效的檢測效果。因此，更加準確可靠的醋酸曲安奈德測定方法非常重要[2]。有研究顯示，分光光度法及高效液相色譜法均為測定藥物有效成分的主要手段，但兩種檢測方法的特性不同，其結果可能也會出現(xiàn)差異[3-4]。為了分析測定醋酸曲安奈德含量的有效方法，本文對此兩種測定方進行了對比分析，并且分析了醋酸曲安奈德含量及與搽劑質(zhì)量標準的相關性，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 研究儀器 本研究中使用美國安捷倫科技有限公司生產(chǎn)的Agilent 1200高效液相色譜儀、日本島津制作所生產(chǎn)的UV-260紫外分光光度儀、日本日立U3000型紫外分光光度儀、瑞士梅特勒托利AE204十萬分之一電子分析天平。

1.1.2 研究試劑 本研究使用復方曲安奈德水楊酸搽劑（本院制劑部自制，批號：20171101、20171115、20171201）作為樣品；醋酸曲安奈德工作對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號：100125-201404）；對照品為中國食品藥品檢定研究院提供的醋酸曲安奈德（批號：100125-201404）和曲安奈德（批號：100055）。其中醋酸曲安奈德含量為97.8%。將甲醇作為色譜純，將10%的氫氧化四甲基銨溶液作為分析純，實驗用水為雙蒸水。

1.2 研究方法

1.2.1 溶液制備方法 （1）曲安奈德對照溶液。首先需精密稱取曲安奈德對照品，劑量50 mg，放入50 mL的量瓶中，加入甲醇定容。將此溶液精密量取1 mL，放入到50 mL的量瓶中，并加入流動相動容，得到曲安奈德對照品溶液。（2）醋酸曲安奈德對照溶液。在制備醋酸曲安奈德對照溶液過程中，首先可精密稱取曲安奈德對照品50 mg，放入50 mL量瓶中，加入甲醇定容。將此溶液精密量取1 mL，放入到50 mL的量瓶中，加入流動相定容，得到醋酸曲安奈德對照品溶液。（3）供試品溶液。首先精密量取1 mL復方曲安奈德水楊酸搽劑，轉入到50 mL量瓶中，加入流動相，將其稀釋到刻度位置，搖勻。（4）陰性樣品溶液。按照相應處方，配置出不加入醋酸曲安奈德的空白對照溶液。（5）系統(tǒng)適用性溶液。首先精密量取對照品儲備液A和對照品儲備液B，均為0.5 mL，放置在50 mL的量瓶中。并加入流動相定容，得到混合對照品溶液。

1.2.2 測定方法 （1）分光光度法。①含量測定：需精密吸取供試品及對照品溶液，劑量1 mL。將其分別放置在具塞刻度管中，并加入無水乙醇調(diào)整劑量為10 mL。另需取10 mL無水乙醇作為空白對照，加入1 mL氯化三苯四氮唑溶液搖勻，再加入1 mL氫氧化四甲基銨溶液搖勻。在25 ℃位置放置45 min，按照分光光度法要求，在485 nm波長位置對吸收度進行測定和計算，得出本研究中3批次樣品含量。②線性關系試驗：首先需吸取醋酸曲安奈德對照溶液，劑量為0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 mL。分別將其放置在具塞刻度管中，分別加入無水乙醇，稀釋到劑量為10 mL后搖勻。使用和含量測定相同的方法，取10 mL無水乙醇作為空白對照，對其吸收度進行測量。將濃度作為橫坐標，將吸收度設定為縱坐標，進行回歸處理分析。③回收率試驗：本研究中使用添加法進行回收率試驗。使用6只50 mL量瓶，一次對其進行編號。精密吸取已經(jīng)進行過含量測定的樣品溶液，劑量5 mL，并分別放置進入量瓶中。在1號和2號量瓶中加入對照溶液2 mL，在3號和4號量瓶中加入對照溶液5 mL，在5號和6號量瓶中加入對照溶液10 mL。使用和含量測定相同的方法對回收率進行測定。④穩(wěn)定性試驗：通過測定RSD的方法對穩(wěn)定性進行分析。將醋酸曲安奈德對照溶液進行吸取，并在室溫條件下放置。在放置到0、10、20、30、40 min時對吸收度進行測量，并計算出RSD值。（2）高效液相色譜法。本研究中，高效液相色譜法的色譜條件如下：色譜柱為5 μm，250×

4.6 mm的Welch Materials Ultimate XB-C8。流動相為6：4的甲醇-水溶液，檢測波長240 nm，進樣量設定為20 μL，流速1 mL/min。①含量測定：稱取適量樣品，通過流動相將其稀釋成0.02 mg/mL溶液，稱取20 μL，加入到液相色譜儀中，對色譜圖實施全面記錄。另需精密稱取對照品，加入甲醇溶解，使用流動相稀釋成為0.02 mg/mL溶液，精密稱取1 mL，加入50 mL量瓶中，使用流動相稀釋到刻度位置搖勻。在測定完成后，需使用外標法計算峰面積，得出含量。②線性關系試驗：精密稱取對照品0.6、0.8、1.0、1.2、1.6 mL，放置在50 mL的量瓶中，使用流動相稀釋到刻度位置并搖勻。將此溶液20 μL注入到液相色譜儀中，對色譜進行記錄。將濃度作為橫坐標，將峰面積作為縱坐標，對其實施線性回歸分析。③回收率試驗：需精密量取對照品3、5、7 mL，各2份，將其放置在50 mL的量瓶中，每份需精密加入到5 mL的樣品中，使用流動相稀釋到刻度并搖勻。按照色譜條件分別量取20 μL對其進行進樣測定，計算出回收率。④穩(wěn)定性試驗：仍需使用測定RSD的方法對穩(wěn)定性進行分析。需取得對照品溶液，劑量為0.3、0.5、0.7 mL各2份，將其分別放置在50 mL的量瓶中，每份樣品均需要加入已經(jīng)準確測量過的樣品，劑量為0.5 mL，使用流動相將其稀釋到刻度并搖勻。

1.3 觀察指標 本研究完成后，需對兩種方法檢測后的平均測得量、平均回收率、RSD進行收集，并且對兩種方法的結果進行統(tǒng)計學分析。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 20.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 分光光度法檢測后的回收率、樣品含量及RSD，見表1、2。

2.2 高效液相色譜法檢測后的回收率、樣品含量及RSD，見表3、4。

2.3 兩種方法檢測效果比較 本研究顯示，分光光度法的平均測得量、平均回收率、RSD與高效液相色譜法比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表5。

2.4 醋酸曲安奈德含量和搽劑質(zhì)量標準的相關性 通過分光光度法檢查后顯示，得出醋酸曲安奈德的回歸方程為A=26.375C-0.002 801，r=0.999 9。而在實施高效液相色譜法檢查后顯示，醋酸曲安奈德的線性方程為：A=3.651 8×104C+20.824，r=0.999。通過分析顯示，在試驗過程中醋酸曲安奈德和峰面積呈現(xiàn)出較好的線性關系。其結果說明醋酸曲安奈德含量和搽劑質(zhì)量標準有著顯著相關性。

3 討論

復方曲安奈德水楊酸搽劑是臨床較常見的藥物類型，其中的主要成分為水楊酸、氯霉素、醋酸曲安奈德等。通過使用復方曲安奈德水楊酸搽劑，可對各類皮膚疾病起到較好治療效果，例如手癬、足癬、股癬或是體癬等[5-6]。復方曲安奈德水楊酸搽劑中的水楊酸為膠質(zhì)溶解軟化劑，有抗菌、去除角質(zhì)層的作用，可改善患者臨床癥狀。而醋酸曲安奈德屬于皮質(zhì)類固醇，又被稱為醋酸曲安縮松。在臨床治療時，能夠起到抗炎、抗瘙癢及收縮血管等效果[7]。尤其是抗炎作用強而持久。對于常見的皮炎等皮膚類疾病，通過涂抹的方式即能夠被皮膚吸收[8]。由此可見，保證到復方曲安奈德水楊酸搽劑中的有效成分醋酸曲安奈德含量滿足要求非常重要。

當前在對復方曲安奈德水楊酸搽劑中的醋酸曲安奈德進行測定過程中，其主要方法有兩種，即分光光度法和高效液相色譜法。

分光光度法的主要原理為對被測物質(zhì)在特定波長，或是一定波長范圍內(nèi)對光的吸收度，從而對這一物質(zhì)進行定量和定性分析的方法[9]。而在對復方曲安奈德水楊酸搽劑中的醋酸曲安奈德含量測定時，通過分光光度法也能夠取得較好效果[10]。

高效液相色譜法又被稱為高壓液相色譜、高分力度液相色譜和高速液相色譜。在實際的檢測中，需以液體作為流動相，使用高壓輸液系統(tǒng)將溶液等流動相裝入到固定相的色譜柱中，在色譜柱中，各類成分被分離后可進入到檢測器中接受檢測，從而完成對各種物質(zhì)的檢測[11-13]。由于其特點，也可對各類化學物質(zhì)起到更準確的檢測效果，因而在對復方曲安奈德水楊酸搽劑中的醋酸曲安奈德進行檢測時，通過高效液相色譜法可取得較好效果[14-17]。

本研究即分析了測定復方曲安奈德水楊酸搽劑中，醋酸曲安奈德含量的有效方法。通過本研究顯示，使用分光光度法及高效液相色譜法，均能夠較好測量醋酸曲安奈德的含量。兩種方法檢測后的平均測得量、平均回收率、RSD，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。而在以往的研究中也對檢測醋酸曲安奈德含量的方法進行了分析。在Navin等[18]研究中，分析了使用高效液相色譜法測定紫杉醇、地塞米松等物質(zhì)在基質(zhì)中的含量。通過其研究顯示，使用高效液相色譜法，能夠較好地對這些物質(zhì)的含量進行測定。而在曾建亭[19]研究中，則分析了使用高效液相色譜法對醋酸曲安奈德硫軟膏中的醋酸曲安奈德含量的測定效果。在其研究中顯示，通過使用高效液相色譜法能夠?qū)Υ姿崆材蔚潞科鸬捷^好的檢測效果。在張詠梅等[20]研究中，分析了高效液相色譜法測量復方曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德含量的效果。通過其研究顯示，高效液相色譜法有著靈敏度高和專屬性強等特點，可對復方曲安奈德乳膏中曲安奈德含量進行有效測量。對這些研究結果進行分析后發(fā)現(xiàn)，其均能夠說明使用高效液相色譜法可對醋酸曲安奈德的測量起到較好效果，其結果也和本研究類似。

綜上所述，雖然高效液相色譜法和分光光度法均可對醋酸曲安奈德含量進行測定，相比高效液相色譜法，分光光度法的操作雖然簡便，其檢測時間也更短，但容易在實際的檢測中出現(xiàn)偏差。由此可見，若條件允許，應盡可能使用高效液相色譜法對醋酸曲安奈德含量進行測定。

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（收稿日期：2018-04-18） （本文編輯：張帥）