王 云， 謝維娜， 廖園燕， 丁曉東， 李 靜

(安徽科技學(xué)院 動物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 233100)

長期便秘的犬通常表現(xiàn)精神不安，毛發(fā)粗糙、脾氣暴躁，甚至發(fā)生自體中毒或繼發(fā)其他疾病[1]。《華佗神方》中描述華佗通便神方為“止補其真陰，使精足以生血，血足以潤腸，大便自出”，通過潤腸理氣、生津補氣血的方式使機體排便正常。但是給犬灌服中藥湯劑或者是給予中藥丸劑，都存在一定困難。直腸給藥屬于中醫(yī)特殊給藥法，是藥提取物或細(xì)粉與適宜基質(zhì)混合后可制成供腔道給藥的固體栓劑[2]，本試驗將傳統(tǒng)的華佗通便方湯劑改變劑型制成直腸給藥栓劑，不僅克服犬口服給藥的困難，亦具有直達病灶，作用時間長，刺激小，血液吸收效果顯著、避免肝臟首過作用等栓劑優(yōu)勢。本研究旨在探討華佗通便栓劑對犬血液細(xì)胞的影響，為寵物治療開發(fā)新藥新劑型和在中藥治療犬便秘方面提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與飼養(yǎng)管理

健康成年中華田園犬12只，雌雄各半，籠養(yǎng)，進行免疫和驅(qū)蟲。皮下注射犬五聯(lián)疫苗進行免疫(吉林省五星動物保健藥廠，批號：20180209)；伊維菌素注射液0.1 mL/kg肌肉注射進行驅(qū)蟲(安徽天安生物科技股份有限公司，批號：20160416)。試驗犬飼喂鼎新牌全犬期天然營養(yǎng)膳食配方犬糧(營養(yǎng)成分為粗蛋白≥28%，粗纖維≤4.5%，粗脂肪≥16%，鈣≥1.1%，粗灰分≤9%，磷≥0.9%，亞油酸≥1.4%，水分≤10%)(保定寵康寵物飼料制造有限公司)，每天早晚各飼喂一次，自由飲水。

1.2 華佗通便栓劑的制備

華佗通便神方組成：熟地黃30 g、玄參30 g、當(dāng)歸30 g、川芎15 g、火麻仁3 g、大黃3 g、紅花0.3 g、桃仁10 個，以上中藥飲片均采購于安徽省皖亳大藥房。按華佗通便神方配比五倍重量稱取中藥，取藥材10 倍重量蒸餾水浸泡2 h，煎煮，沸騰后文火繼續(xù)煎煮20 min，過濾，再加藥材10 倍重量蒸餾水二次煎煮至沸騰后文火20 min，過濾。合并兩次濾液，干燥濃縮比例為中藥材∶浸膏=4∶1。栓劑配方:復(fù)方中藥浸膏∶蒸餾水∶明膠∶甘油∶硬脂酸=1∶1∶2∶7∶1。工藝流程：采用熱熔法。水浴溫度80 ℃，液體石蠟潤滑模具孔，倒入模具后冷凝15 min，切溢，取得。按照中國藥典標(biāo)準(zhǔn)(2015版)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對華佗通便栓劑進行外觀形狀評價、融變時限評價和重量差異評價[3]?？瞻姿▌┎患又兴帲话瓷鲜霰壤没|(zhì)同法制成。制成的栓劑長約2.6 cm，重量在1.6～1.7 g之間。經(jīng)外觀形狀、融變時限和重量檢驗進行質(zhì)量檢驗，所有華佗通便栓劑和空白栓劑均符合栓劑質(zhì)量要求。

1.3 試驗藥品與試劑

明膠(化學(xué)純)；丙三醇(分析純)；羧甲基纖維素鈉(粘度3 000～5 000 mpas)；硬脂酸；以上試劑均購于上海麥克林生化科技有限公司。液體石蠟(化學(xué)純,國藥集團化學(xué)試劑有限公司)。

1.4 主要儀器設(shè)備

HH-3A單列單控三孔水浴鍋(常州國宇儀器制造有限公司)，LE204E/02電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)，PE-6800VET全自動動物血液細(xì)胞分析儀(深圳市普康電子有限公司)，101AS-3型不銹鋼數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司)，子彈頭型栓劑模具(SJM-10，長沙市湘勁機械設(shè)備)。

1.5 試驗方法

1.5.1 犬的分組與給藥 將12 只體重相近的中華田園犬按體重相近原則分為對照組和給藥組，每組各6 只，雌雄各半，均正常飼喂鼎新犬糧，自由飲水。給藥期7 d，每天上午10∶00，犬排糞后，對照組直腸組空白栓劑2顆，給藥組直腸給華佗通便栓2顆。每天觀察試驗犬精神狀態(tài)、糞便情況，在試驗第0、8天稱量犬體重、頸靜脈采血，采血前均禁食12 h。

1.5.2 數(shù)據(jù)分析處理 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示，采用One-way ANOVA 數(shù)據(jù)分析方法進行比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 栓劑質(zhì)量測定結(jié)果

2.1.1 外觀形狀 外觀形狀評定結(jié)果為：栓劑外觀為光潔、稍有彈性、富有光澤、完整無缺損的子彈型栓劑。華佗通便栓劑呈黑褐色，空白栓劑呈透明黃褐色。

2.1.2 融變時限 取華佗通便栓劑和空白栓劑各3粒，在室溫下放置1 h后，置(37.0±0.5) ℃下進行融變時限測定。所有栓劑融變時限均在30 min內(nèi)，符合規(guī)定融變時限要求。

2.1.3 重量差異 分別取10粒華佗通便栓劑和空白栓劑稱重，重復(fù)三次。精密稱重后，稱得每顆重量在1.6～1.7 g之間，經(jīng)過計算，重量差異均小于7.5%。

2.2 體重與狀態(tài)

2.2.1 犬的體重 試驗前后，對照組和給藥組在第0天和第8天測12只犬的體重。根據(jù)表1數(shù)據(jù)分析，對照組中，第8天同第0天對比，體重?zé)o顯著變化(P>0.05)；給藥組中，第8天同第0天對比，體重?zé)o顯著變化(P>0.05)；在第8天，對照組和給藥組對比，體重?zé)o顯著變化(P>0.05)。由此可得,華佗通便栓劑對犬體重的影響不顯著(P>0.05)。

表1 各組體重的比較(M±SD, n=6)Table 1 Comparison of body weights in each group (M±SD, n=6)

注：第0天和第8天：*P<0.05，**P<0.01；給藥組和對照組：#P<0.05，##P<0.01。下同。

Note: Day 0 and day 8:*P<0.05,**P<0.01; drug delivery group and control

group:#P<0.05,##P<0.01. The same below.

2.2.2 犬的狀態(tài) 給藥過程中，試驗組的精神狀態(tài)飽滿；外界刺激犬眼、耳、尾、四肢，迅速反應(yīng)；姿態(tài)自然，行為正常，動作協(xié)調(diào)。對照組精神狀態(tài)良好；外界刺激犬眼、耳、尾、四肢，反應(yīng)正常；姿態(tài)自然，行為正常，動作協(xié)調(diào)。給藥組糞便狀態(tài)：成型糞便，呈圓柱狀，呈黃色。前5天排便量偏多，硬度偏硬，第3天排便量較多。第6天犬糞便量減少，糞便含水量較多，第7天犬糞便稀軟不成形。對照組糞便狀態(tài)：糞便干、較硬、排便量少，糞便成型，圓柱狀，呈黃色、褐色。

2.3 血液細(xì)胞的變化

由表2可知，對照組中，同第0天對比，白細(xì)胞總數(shù)在第8天顯著增加(P<0.05)，淋巴細(xì)胞在第8天顯著減少(P<0.05)，中性粒細(xì)胞在第8天顯著減少(P<0.05)，紅細(xì)胞總數(shù)在第8天顯著降低(P<0.05)，血紅蛋白在第8天顯著增加(P<0.05)，血小板總數(shù)在第8天極顯著增加(P<0.01)；給藥組中，同第0天對比，紅細(xì)胞總數(shù)在第8天顯著增加(P<0.05)，血紅蛋白在第8天顯著增加(P<0.05)，血小板總數(shù)在第8天極顯著增加(P<0.01)。在第0天，給藥組和對照組相比，無顯著性變化(P>0.05)；在第8天，給藥組和對照組相比，給藥組紅細(xì)胞總數(shù)顯著增加(P<0.05)，給藥組血紅蛋白顯著增加(P<0.05)。由此可見，華佗通便栓劑直腸給藥后對犬血液中的紅細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白、血小板總數(shù)有增多的影響。

表2 各組血常規(guī)檢測的部分結(jié)果比較(M±SD, n=6)Table 2 Comparison of partial results of blood routine tests in each group (M±SD, n=6)

3 結(jié)論與討論

3.1 本試驗血常規(guī)數(shù)據(jù)變化

犬血常規(guī)中，紅細(xì)胞總數(shù)(RBC)正常范圍在5.50×1012～8.50×1012/L，血紅蛋白(HGB)正常范圍在110～190 g/L，血紅蛋白含量(MCH)正常范圍在20.0～25.0 pg，血小板總數(shù)(PLT)正常范圍在117×109～460×109/L。對照組和給藥組第0天和第8天的紅細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白、血紅蛋白含量、血小板總數(shù)均在正常范圍。根據(jù)表2數(shù)據(jù)分析“華佗通便栓劑直腸給藥后對犬血液中的紅細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白、血小板總數(shù)有增多的影響”，可以得出華佗通便栓劑直腸給藥后對犬血液中的紅細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白、血小板總數(shù)的影響在正常范圍內(nèi)，呈現(xiàn)增多趨勢，即表現(xiàn)為促進血液循環(huán)。白細(xì)胞總數(shù)(WBC)正常范圍在6.0×109～17.0×109/L，淋巴細(xì)胞(LYM#)正常范圍在0.8×109～5.1×109/L，中間細(xì)胞(MID#)正常范圍在0.1×109～1.8×109/L，粒細(xì)胞(GRN#)正常范圍在2.0×109～7.8×109/L。對照組第0天和第8天、給藥組第0天和第8天的白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞、中間細(xì)胞、中性粒細(xì)胞數(shù)值均超出正常范圍，猜測試驗犬體內(nèi)存在炎癥。由于12 只試驗犬在試驗期間精神狀態(tài)、食欲等均表現(xiàn)正常，具體原因還需要進一步探索。

3.2 華佗通便神方成分分析

方中熟地黃：性平，微溫，滋陰補血，益精填髓。玄參：涼血滋陰，兼有補性，瀉火解毒。主泄腸、瀉火。當(dāng)歸：性溫，功補血活血，潤腸通便，當(dāng)歸多糖具備造血功能[4]，以及抗凝血和止血的雙重調(diào)解作用[5]；當(dāng)歸中的藁本內(nèi)酯具有抗氧化、抗凋亡、抗血栓作用[6]。熟地黃與當(dāng)歸配伍，補血養(yǎng)陰，補而不滯[7]。川穹：性溫，活血祛瘀；行氣開郁；祛風(fēng)止痛，川穹嗪在微血管擴張、血黏度降低、調(diào)節(jié)血小板功能等方面起作用[8]，降低血液黏度，改善血液流變作用，所含的阿魏酸有明顯地抗血小板聚集的功能?；鹇槿剩盒云剑糜谘摻蛱?，腸燥便秘。主要成分脂肪油使腸道潤滑，在堿性腸液的作用下生成脂肪酸，增強腸蠕動。大黃：性寒，瀉下攻積，清熱瀉火，涼血解毒，逐瘀通經(jīng)，利濕退黃。番瀉甙是大黃瀉下的主要成分，主要作用在大腸，通過增加腸蠕動和抑制腸內(nèi)水分吸收，促進排便。桃仁和紅花是常用藥對。紅花：性溫，主要功能為活血能經(jīng)；祛瘀止痛。紅花黃色素具有抗血小板聚集作用，并對ADP已聚集的血小板有明顯的解聚作用。桃仁：性平，主要功能為活血潤燥，止痛散腫，通經(jīng)。桃仁有抗凝血作用和抗血栓形成作用[9]，含有45%脂肪油，有潤滑腸道作用。

3.3 試驗存在的不足

犬便秘模型建立難度大，消耗時間長，申震等采用止瀉劑復(fù)方苯乙哌啶120～150 mg/d給犬口服[10]，第90 d和120 d，平均糞便重量顯著減少，腸道推進率顯著減慢，說明便秘模型成功。由于條件所限，本試驗設(shè)計未建立犬便秘模型，而是用健康犬做為試驗動物。所以缺乏華佗通便栓劑對便秘犬的療效研究。此外，試驗用犬為中華田園犬，品種不純，個體之間存在一定的差異，試驗犬進入動物房之前僅進行了一般與系統(tǒng)檢查，未進行實驗室檢查和特殊檢查。對照組和給藥組的白細(xì)胞、中間細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞值均高出正常范圍，分析可能有個別犬患病而影響血細(xì)胞數(shù)據(jù)；對照組的第8天對比第0天，多種血細(xì)胞數(shù)據(jù)呈現(xiàn)顯著差異，一方面與血液的新陳代謝有關(guān)，另一方面也與試驗犬的數(shù)量較少，缺乏試驗重復(fù)有關(guān)。此外，未增設(shè)梯度給藥組進行對比研究。對華佗通便栓的主成分未進行測定，發(fā)揮主要作用的成分及含量不清楚，加工制作工藝仍需優(yōu)化，未進行制劑穩(wěn)定試驗。

3.4 治療便秘的中藥栓劑研究現(xiàn)狀和開發(fā)前景

栓劑克服了犬經(jīng)口給藥的危險性和困難性，直腸給藥經(jīng)腸粘膜吸收后大部分直接進入血液，減少經(jīng)口途徑消化酶對藥物的破壞，也避免一些藥物對胃黏膜的刺激，血液吸收效果佳顯著且更有規(guī)律。栓劑給藥方法簡單易行。栓劑送入動物的肛門后，可軟化腸道內(nèi)蓄積的糞便，滋潤腸道，減輕干硬糞便排出時對直腸粘膜及肛門的機械性損傷。目前查詢到國內(nèi)應(yīng)用中藥栓剤治療便秘的研究報道較少，有運用黃芪、升麻、枳殼、石榴皮等份，研末成粉，加基質(zhì)制成栓劑[11]。以紫草、魚腥草、鳳尾草、地錦草、荔枝核、五倍子為主成分制成的可治療便秘的復(fù)方紫草栓[12]。專利CN105902720A介紹了治療便秘的枳樸五仁通便栓主要采用枳實、厚樸、火麻仁、郁李仁、桃仁、杏仁、柏子仁、蘆薈、壬二酸和木質(zhì)素等[13]。專利CN1060967公開了用大黃、芒硝、蜂蜜、聚乙二醇制做肛門栓劑可治療便秘[14]，消除腹脹，發(fā)揮清潔灌腸作用。治療便秘的西藥主要以泄藥為主，毒副作用大，易胃腸產(chǎn)氣、腹脹、腸肌無力，存在依賴性，停藥后易復(fù)發(fā)。而中藥栓劑為一種供腔道給藥的外用固體制劑能夠直擊病灶部位具有良好的局部作用，為不便口服給藥的動物帶來較大的便捷。中藥栓劑治療便秘的相關(guān)研究具有較大的研究空間和廣闊的研究前景。

綜上所述，華佗通便栓通過增加糞便水分，促進血液循環(huán)而發(fā)揮治療便秘作用。