高英愷　仲云　楊凡　王彬　曹艷麗31

[摘要] 目的 探討p63與CD34在LSCC早期診斷中的意義。 方法 實驗組方便選取該院2000年1月—2012年12月收治的喉鱗狀細胞癌患者手術(shù)所留取的標本72例，選取癌旁組織作為照組1，選取正常喉部組織20例作為對照組2。應(yīng)用免疫組化S-P法檢測p63及CD34在LSCC、癌旁組織與正常喉組織的表達。結(jié)果p63陽性表達在喉癌組織、癌旁組織、正常喉黏膜3組中陽性率分別為83.3%（60/72）、15.3%（11/61）、0.0%（0/20），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=85.31，P<0.01）。CD34-MVD在喉癌組織、癌旁組織、正常喉黏膜3組中分別為（25.60±5.76）、（17.80±4.69）、（9.30±2.20），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=98.19，P<0.01）。 結(jié)論p63及CD34在喉癌組織高表達，可以作為喉癌早期診斷的指標之一。p63與CD34-MVD在LSCC表達密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 喉鱗狀細胞癌；p63；CD34；早期診斷；免疫組化；病理檢查

[中圖分類號] R856.76 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2018）06（c）-0031-03

[Abstract] Objective This paper tries to explore the significance of p63 and CD34 in the early diagnosis of LSCC. Methods In the experimental group， 72 specimens from patients with laryngeal squamous cell carcinoma who were treated in the hospital from January 2000 to December 2012 were convenient selected. The adjacent tissue was selected as the control group 1， and 20 normal laryngeal tissues were selected as control group 2. Immunohistochemical S-P method was used to detect the expression of p63 and CD34 in LSCC， adjacent tissues and normal laryngeal tissues. Results The positive rates of p63 expression in laryngeal cancer tissue， paracancerous tissue， and normal laryngeal mucosa were 83.3% （60/72）， 15.3% （11/61）， and 0.0%（0/20）， respectively. The difference was statistically significant（χ2=85.31， P<0.01）. The CD34-MVD in the laryngeal cancer tissue， paracancerous tissue， and normal laryngeal mucosa were （25.60±5.76）， （17.80±4.69）， and （9.30±2.20）， respectively， with significant differences （F=98.19， P<0.01）. Conclusion The high expression of p63 and CD34 in laryngeal carcinoma can be used as one of the indicators of early diagnosis of laryngeal cancer. P63 is closely related to CD34-MVD expression in LSCC.

[Key words] Laryngeal squamous cell carcinoma； p63； CD34； Early diagnosis； Immunohistochemistry； Pathological examination

p63基因在臨近喉癌組織的不典型增生的部位有明顯的表達，提示其與喉部黏膜病變的早期階段有關(guān)；CD34表達水平與腫瘤血管生成有相關(guān)性，可促進腫瘤血管內(nèi)皮細胞增殖和惡性腫瘤生長的相關(guān)蛋白間的相互作用，促進惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移。該研究旨在探討喉鱗狀細胞癌（Laryngeal Squamous Cell Carcinoma，LSCC）組織中p63基因和CD34的表達及其與LSCC的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的意義。方便選取該院2000年1月—2012年12月收治的喉癌患者72例，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該院收治的喉癌患者所留取的標本72例，其中男67例，女5例，年齡自43～81歲，平均年齡（57.6±3.4）歲。所有患者手術(shù)前均未放療、化療以及其他抗癌治療。根據(jù)腫瘤的初始發(fā)生部位：聲門上型30例，聲門型38例，聲門下型4例。根據(jù)國際抗癌協(xié)會2002年第6版TNM分期：I期5例；II期12例；III期40例；Ⅳ期15例。根據(jù)喉鱗癌的分劃程度：高分化即G1期20例、中分化即G2期29例、低分化即G3期23例；根據(jù)術(shù)后病理：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例。選取癌腫旁切緣即癌旁組織作為照組1。選取正常喉部組織20例作為對照組2，其中：男17例，女3例，年齡：46～77歲，平均年齡為（56.8±.3.8）歲。

1.2 方法

診斷及分期標準：參照《中國惡性腫瘤診治規(guī)范》（2002版）及《腫瘤影像學(xué)》（2005版）診斷，腫瘤分期參照UICC2002版。試劑：鼠抗人CD34單克隆抗體；鼠抗人p63單克隆抗體；S-P試劑盒。采用免疫組織化學(xué)S-P染色法，檢測p63蛋白以及CD34-MVD表達。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。各組的MVD值采用（x±s）表示，兩組獨立樣本均數(shù)比較采用t檢驗；多組獨立樣本均數(shù)比較采用單因素分析（one-way ANOVA）；兩組率的比較采用χ2檢驗，多個樣本率之間比較采用R×C χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

p63陽性表達在喉癌組織、癌旁組織、正常喉黏膜3組中陽性率分別為83.3%（60/72）、15.3%（11/61）、0.0%（0/20），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=85.31，P<0.01）。

CD34 主要是在腫瘤組織邊緣毛細小血管染色最明顯，并在腫瘤組織的細小內(nèi)皮血管細胞胞漿中表達從而把腫瘤組織的微血管染成比較深的棕褐色，而在組織大血管中不顯色。CD34標記的MVD在喉癌組織、癌旁組織、正常喉黏膜3組中分別為（25.60±5.76）、（17.80±4.69）、（9.30±2.20），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=98.19，P<0.01）。

p63的陽性表達與LSCC的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)。CD34的陽性表達與LSCC的TNM分期、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，而與腫瘤的分化程度無明顯相關(guān)。淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移同時臨床分期為T3、T4患者的陽性表達率高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移、臨床分期為T1、T2者，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

喉鱗狀細胞癌中p63陰性者的MVD值（24.28±4.51），明顯低于p63表達陽性者MVD值（28.36±5.09），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

p63于1997年被Schmale等發(fā)現(xiàn)，主要表達于鱗狀上皮源性的惡性腫瘤[1-2]，它不僅參與調(diào)節(jié)正常鱗狀細胞的生長和分化，并在鱗癌的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮作用。陳瑋等[3]研究發(fā)現(xiàn)從正常宮頸黏膜上皮 、宮頸上皮內(nèi)瘤變到浸潤癌，p63 陽性表達率呈漸進性增高；韓晗等[4]研究宮頸鱗狀細胞癌組織中p63顯著高于正常宮頸組織。劉艷紅等[5]免疫組化染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)p63 在食管鱗癌細胞中的表達高于腫瘤周圍組織。該研究結(jié)果顯示，p63在LSCC中呈強陽性表達， 在癌旁組織和非癌組組織中呈弱陽性表達， 其陽性表達在喉癌組織、癌旁組織、正常喉黏膜3組中陽性率分別為83.3%（60/72）、15.3%（11/61）、（0/20），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。p63在喉鱗癌組織內(nèi)的表達較正常組織高，與以往在其他部位鱗癌中的研究結(jié)論[3-7]相符，提示p63在喉鱗癌的發(fā)生和發(fā)展中起癌基因作用。p63基因的表達與腫瘤分期、病理分級、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均無關(guān)，提示p63基因的表達增加是喉癌發(fā)生的早期事件。因此 p63可作為喉鱗狀細胞癌的標記物，對喉癌的早期診斷和鑒別診斷有重要的臨床意義。

腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和生長依賴于新生血管生成。微血管密度（microvessel density， MVD）是指微血管計數(shù)，其可對血管進行定量分析，并且是評價腫瘤微血管生成最可靠的指標[8]。CD34主要定位于血管內(nèi)皮的細胞質(zhì)，胞質(zhì)中有黃色或棕黃色染色為陽性。李麗暉等[9]通過免疫組化研究發(fā)現(xiàn)肝細胞癌患者的CD34 陽性表達水平顯著高于良性肝細胞性病變患者；陳秋蘭等[10]研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織CD34的陽性表達率高于癌旁組。周紅林等[11]發(fā)現(xiàn)腎細胞癌CD34標記的MVD 值高于腎正常組織。唐智等[12]研究鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌中以CD34標記微血管密度明顯高于鼻腔鼻竇正常黏膜組織。該研究發(fā)現(xiàn)CD34標記的MVD在喉癌組織、癌旁組織、正常喉黏膜3組中分別為（25.60±5.76）、（17.80±4.69）、（9.30±2.20），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。CD34的陽性表達與LSCC的TNM分期、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而與腫瘤的分化程度無明顯相關(guān)。淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移同時臨床分期為T3、T4患者的陽性表達率高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移、臨床分期為T1、T2者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

p63與CD34在LSCC的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用， 對LSCC的早期診斷和鑒別診斷有重要的臨床意義，并可作為判斷LSCC預(yù)后的一個指標。p63與CD34在喉腫瘤的發(fā)展進程中是否有協(xié)同作用有待增加樣本作進一步的研究。

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（收稿日期：2018-03-26）