李永生，陳家強(qiáng)，謝筱穎，陳凱婷

(佛山市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東佛山 528000)

梅毒是臨床上常見的一種慢性、系統(tǒng)性性疾病，由梅毒螺旋體感染所致，I期者主要累及生殖器皮膚，Ⅱ期者可累及軀干皮膚，Ⅲ期者可累及多個(gè)臟器，不同臨床分期的治療方法存在差異[1]。目前，梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(toluidine red unheated serum test，TRUST)是臨床上診斷梅毒最常用方法之一，且具有良好的診斷效能，而其滴度在不同臨床分期中雖存在差異，但其對臨床分期的效能低[2]。而有研究表明，C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)是機(jī)體內(nèi)常見的一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，在機(jī)體受感染或組織損傷時(shí)，其血液水平可急劇上升，并與疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[3]。對此，本研究通過對梅毒患者進(jìn)行TRUST滴度、血清CRP水平檢測，探討二者與患者臨床分期的關(guān)系，為指導(dǎo)臨床治療提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2013年12月～2016年12月本院確診的梅毒患者200例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床癥狀、病史、實(shí)驗(yàn)室、血尿常規(guī)、血清學(xué)等檢查證實(shí)為梅毒[4]；②年齡18～70歲，TRUST滴度陽性且在1∶2及其以上；③患者或其家屬簽署知情同意書；④無精神病病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期、哺乳期女性或有腫瘤者；②檢查前1個(gè)月內(nèi)無抗炎、抗感染、免疫、糖皮質(zhì)激素等治療史；③有心、肝、腎等嚴(yán)重性疾病和高血壓、糖尿病等；④拒絕或中途退出本次研究。本次研究經(jīng)本院倫理委員會審批且通過，依據(jù)臨床分期分為I期組(n=90例)、Ⅱ期組(n=70例)和Ⅲ期組(n=40例)，所有資料來源均真實(shí)可靠，其中I期組：年齡19～62歲，BMI值19.45～30.82 kg/m2，Ⅱ期組：年齡20～63歲，BMI值19.32～30.91kg/m2，Ⅲ期組：年齡21～64歲，BMI值19.37～30.75kg/m2，三組患者在年齡、BMI，性別、婚姻上比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 三組一般資料比較

1.2 試劑和儀器 TRUST試劑盒購自上海榮盛生物技術(shù)有限公司，CRP試劑盒購自上?？迫A生物工程股份公司，全自動加樣儀購自瑞士帝肯公司，75-2型微量攪拌儀購自上海醫(yī)用分析儀器廠，日立7800全自動生化分析儀購自上海曼普生物科技有限公司。

1.3 方法 ①檢測方法，所有患者給予TRUST檢查，即抽取左上臂靜脈血3 ml置入無菌試管中，行常規(guī)血清分離(3 000 r/min，12 min，離心半徑8 cm)后，通過全自動加樣儀吸取50 μl血清樣本放在直徑為18 mm圓圈的卡片圓圈中央并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)，吸取TRUST抗原液輕輕搖勻后用9號針頭(60滴/ml)加一滴抗原并置于75-2型微量攪拌儀上旋轉(zhuǎn)8 min(100±2 r/min)后在亮光下觀察結(jié)果；再取50 μl血清樣本通過日立7800全自動生化分析儀采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清CRP水平，統(tǒng)計(jì)分析所有患者TRUST滴度、臨床分期、血清CRP水平；②評估標(biāo)準(zhǔn)，TRUST滴度標(biāo)準(zhǔn)[5]為，圓圈內(nèi)僅見甲苯胺紅顆粒集中于中央一點(diǎn)或均勻分散(未產(chǎn)生凝集反應(yīng))為陰性，圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的黑色絮狀物且液體渾濁(產(chǎn)生凝集反應(yīng))為陽性，并記錄其擴(kuò)散情況(主要記錄1∶2～1∶32)，CRP正常值為0～10 mg/L[6]。

2 結(jié)果

2.1 三組TRUST滴度、血清CRP水平比較 見表2。

表2 三組TRUST滴度、血清CRP水平比較

注：與I期組比較aP<0.05；b與Ⅱ期組比較P<0.005。

在TRUST滴度分布方面，I期組和Ⅲ期組主要分布在1∶4和1∶8，Ⅱ期組主要分布在1∶8和1∶16，I期Ⅱ期Ⅲ期組平均值為1∶(6.87±3.41)，1∶(11.97±3.78)，1∶(7.54±3.52)，三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=16.571，13.247；t=8.948，6.060；F=22.142，35.576，均P<0.05)，但I(xiàn)期組和Ⅲ期組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，TRUST滴度與患者臨床分期呈“∩”型分布關(guān)系；在血清CRP水平方面，Ⅱ期組明顯高于Ⅲ期組和I期組，I期組明顯高于Ⅲ期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=29.546，22.213，40.171，F(xiàn)=68.790，均P<0.05)，三組均大于正常臨界值(10 mg/L)，但Ⅲ期組接近正常臨界值，血清CRP水平與患者臨床分期呈“∩”型分布關(guān)系。

3 討論

梅毒是一種由蒼白(梅毒)螺旋體引起的性傳播疾病，主要通過性途徑傳播，也可通過母嬰途徑傳播，其危害性僅次于艾滋病，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡的發(fā)生，且近年來其在我國發(fā)病率逐年增加，年齡覆蓋率廣泛，故如何有效診治梅毒具有重要的臨床價(jià)值[7]。目前，梅毒的篩查診斷方法有多種，其中TRUST是較為常用的方法，且隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展與成熟，其具有操作簡單、檢出迅速的特點(diǎn)，準(zhǔn)確率可高達(dá)90%以上[8]。徐敬軒等[9，10]研究顯示，梅毒臨床表現(xiàn)復(fù)雜，幾乎可侵犯和損傷全身各器官，在發(fā)生發(fā)展過程中，細(xì)胞免疫和體液免疫均部分參與并協(xié)同發(fā)揮抵抗再感染、保護(hù)機(jī)體等作用，但梅毒可引起不同程度的免疫抑制，提示其臨床治療應(yīng)依據(jù)病情開展。也有研究表明，梅毒螺旋體早期感染時(shí)，機(jī)體免疫功能正常，可對其作出正常的免疫反應(yīng)并予以有效清除，但未被清除的梅毒螺旋體可引起炎癥免疫反應(yīng)而損傷機(jī)體內(nèi)多組織、器官，隨著病情進(jìn)展，可能會損害免疫系統(tǒng)而造成免疫功能低下，導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制的出現(xiàn)[11，12]。而有研究表明，TRUST可通過檢測梅毒螺旋體感染人體后作出免疫應(yīng)答時(shí)所產(chǎn)生抗類脂質(zhì)抗原的抗體(反應(yīng)素)，而有效評估梅毒的感染情況，在臨床分期中也具有一定的鑒別效能[13]。而也有研究表明，C反應(yīng)蛋白是一種由肝臟合成、分泌的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，可激活補(bǔ)體和加強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬而起調(diào)理作用，在機(jī)體的天然免疫過程中發(fā)揮重要的保護(hù)作用，其水平變化可有效反映機(jī)體的炎癥免疫狀態(tài)[14，15]。

本研究通過對患者進(jìn)行TRUST滴度檢測，發(fā)現(xiàn)三組TRUST滴度分布及血清CRP水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此結(jié)果與Soeiro等[12，13]的研究結(jié)果基本相同，表明TRUST滴度與患者臨床分期有關(guān)。這可能是由于I期患者的病情較輕，其體內(nèi)梅毒螺旋體并未大量增殖，且患者機(jī)體免疫功能尚且正常，仍能夠有效對梅毒螺旋體表面的脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答并激活人體產(chǎn)生磷脂自身抗體及細(xì)胞免疫系統(tǒng)[16]，產(chǎn)生了相應(yīng)的反應(yīng)素，并激活了巨噬細(xì)胞釋放白介素-1、刺激了肝細(xì)胞產(chǎn)生CRP，故機(jī)體內(nèi)反應(yīng)素少而表現(xiàn)為TRUST滴度低、炎癥免疫反應(yīng)輕而表現(xiàn)為CRP水平低；但隨病情進(jìn)展至Ⅱ期，可能由于患者的自身免疫作用未能夠有效滅殺梅毒螺旋體而導(dǎo)致其能夠大量增殖，并引起了更劇烈的免疫應(yīng)答[17]，使反應(yīng)素的產(chǎn)生增多和炎癥免疫反應(yīng)增強(qiáng)，進(jìn)而導(dǎo)致TRUST滴度、血清CRP水平上升；而隨著Ⅲ期患者病情的加重，上述病理生理變化更嚴(yán)重，炎癥免疫反應(yīng)可能損傷機(jī)體內(nèi)多組織、器官，導(dǎo)致免疫功能受損，機(jī)體的免疫系統(tǒng)防御能力下降[18]，進(jìn)而使免疫應(yīng)答減少，導(dǎo)致反應(yīng)素產(chǎn)生下降和炎癥免疫反應(yīng)減弱，故表現(xiàn)為Ⅲ期組TRUST滴度、血清CRP水平低于Ⅱ期組。此外，研究發(fā)現(xiàn)I期組和Ⅲ期組TRUST滴度分布基本相同，表明TRUST滴度分布在患者不同臨床分期中存在重疊，這可能是由于反應(yīng)素的出現(xiàn)較慢(約3～4周)，且隨著免疫抑制現(xiàn)象的出現(xiàn)[19]，反應(yīng)素的產(chǎn)生可能會輕度下降至I期水平，導(dǎo)致其鑒別效能下降。同時(shí)，研究中I期組明顯高于Ⅲ期，且Ⅲ期組接近正常臨界值(10 mg/L)，提示血清CRP水平與患者臨床分期關(guān)系密切，這可能是Ⅲ期組患者免疫受抑制后，其炎癥免疫反應(yīng)也隨之下降，而CRP為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，其能夠迅速對該反應(yīng)作出相應(yīng)的生理變化[20]，因此其能夠有效評估患者的臨床分期。

綜上所述，TRUST滴度分布在梅毒TRUST滴度陽性患者不同臨床分期中存在重疊，而血清CRP水平與患者臨床分期關(guān)系密切，提示其對指導(dǎo)臨床治療具有重要的參考作用。