史小方　李健　趙勝霞　趙章光　孫建輝　霍海如　李小芹　李洪梅

[摘要] 目的 考察三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑對(duì)脂溢性脫發(fā)動(dòng)物模型的治療作用和抗炎作用。 方法 采用SPF級(jí)雄性Wistar大鼠60只、美國(guó)癌癥研究所（ICR）小鼠60只連續(xù)60 d皮下注射丙酸睪酮注射液，造成實(shí)驗(yàn)性脂溢性脫發(fā)模型。按體重區(qū)組隨機(jī)將大鼠和小鼠分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高（0.290 g生藥/mL）、中（0.145 g生藥/mL）、低（0.073 g生藥/mL）劑量組和米諾地爾酊組（0.05 g/mL），每組10只，測(cè)量毛發(fā)長(zhǎng)度，并對(duì)皮膚毛囊及皮脂腺進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。采用SPF級(jí)雄性C57BL/6小鼠50只，按體重區(qū)組隨機(jī)分為空白對(duì)照組，三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高（0.290 g生藥/mL）、中（0.145 g生藥/mL）、低（0.073 g生藥/mL）劑量組和米諾地爾酊組（0.05 g/mL），每組10只，觀察小鼠毛發(fā)從休止期進(jìn)入生長(zhǎng)期的時(shí)間、進(jìn)入生長(zhǎng)期到長(zhǎng)出皮表的時(shí)間以及毛發(fā)生長(zhǎng)長(zhǎng)度。采用醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高模型和巴豆油致小鼠耳腫脹模型研究三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑的抗炎作用。分別選取SPF級(jí)雄性ICR小鼠50只，按體重區(qū)組隨機(jī)分為模型對(duì)照組，三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高（0.290 g生藥/mL）、中（0.145 g生藥/mL）、低（0.073 g生藥/mL）劑量組和云南白藥酊組，每組10只，測(cè)定腹腔液吸光度和耳腫脹值。 結(jié)果 三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中、低劑量組大鼠在給藥第15、30、45、60天的毛發(fā)長(zhǎng)度均長(zhǎng)于模型對(duì)照組（P < 0.05）；三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組大鼠皮膚真皮組織細(xì)胞及皮下毛囊、皮脂腺病變程度明顯低于模型對(duì)照組（P < 0.05）；三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組大鼠皮膚損傷毛囊數(shù)明顯少于模型對(duì)照組（P < 0.05）。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組小鼠在給藥第15、30、45天的毛發(fā)長(zhǎng)度長(zhǎng)于模型對(duì)照組（P < 0.05）；三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組小鼠皮膚損傷毛囊數(shù)顯著低于模型對(duì)照組（P < 0.01）；三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高劑量組小鼠皮膚真皮組織細(xì)胞及皮下毛囊、皮脂腺病變程度明顯低于模型對(duì)照組（P < 0.05）。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組小鼠毛囊從休止期到生長(zhǎng)期時(shí)間、從進(jìn)入生長(zhǎng)期到長(zhǎng)出皮表時(shí)間較空白對(duì)照組明顯縮短（P < 0.05）；給藥第4天和第7天毛發(fā)長(zhǎng)度明顯高于大于空白對(duì)照組（P < 0.05）。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高劑量組小鼠腹腔液吸光度值明顯低于模型對(duì)照組（P < 0.05）。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組小鼠耳腫脹值顯著低于模型對(duì)照組（P < 0.01）。 結(jié)論 三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑對(duì)脂溢性脫發(fā)具有促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)和抗炎的作用。

[關(guān)鍵詞] 三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑；脂溢性脫發(fā)；抗炎作用

[中圖分類號(hào)] R322.995 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）11（b）-0016-08

[Abstract] Objective To investigate the therapeutic effect and anti-inflammatory effct of Sanshen Yangfa Sprays on the seborrheic alopecia animal model. Methods Sixty SPF male Wistar rats and sixty SPF male Institute of Cancer Research （ICR） mice were injected with testosterone propionate for 60 consecutive days， resulting in experimental seborrheic alopecia model. According to the weight block， the rats and mice were randomly divided into normal control group， model control group， high dose （0.290 g crude drug/mL）， medium dose （0.145 g crude drug/mL）， low dose （0.073 g crude drug/mL） of Sanshen Yangfa Sprays group， and Minoxidil Tincture group （0.05 g/mL）， with 10 animals in each group， the length of hair was measured， the hair follicles and sebaceous glands were examinated by pathologic histology. According to the weight block， 50 SPF male C57BL/6 mice were randomly divided into blank control group， high dose （0.290 g crude drug/mL）， medium dose （0.145 g crude drug/mL）， low dose （0.073 g crude drug/mL） of Sanshen Yangfa Sprays group， and Minoxidil Tincture group （0.05 g/mL）， with 10 mice in each group， the time of mouse hair entering the growth period from the rest period， the time from entering the growth period to growing the skin surface， and the length of hair growth were observed. The model of capillary permeability of mice induced by acetic acid and the model of mouse ear swelling induced by croton oil were used to research the anti-inflammatory effect of Sanshen Yangfa Sprays. According to weight block， 50 SPF male ICR mice were randomly divided into model control group， high dose（0.290 g crude drug/mL）， medium dose （0.145 g crude drug/mL）， low dose （0.073 g crude drug/mL） of Sanshen Yangfa Sprays group， and Yunnan Baiyao Tincture group， with 10 mice in each group， the absorbance of peritoneal fluid and value of ear swelling were measured. Results At the 15th， 30th， 45th， 60th day of drug administration， the hair length of rats in the high， medium and low dose of Sanshen Yangfa Sprays group were longer than those in the model control group （P < 0.05）； the lesion degree of dermal tissue cells， hair follicles and sebaceous glands in rats of the high and medium dose of Sanshen Yangfa Sprays group were lower than those of the model control group （P < 0.05）； the number of damaged hair follicles in the rats of the high and medium dose of Sanshen Yangfa Sprays group was lower than those of the model control group （P < 0.05）. At the 15th， 30th and 45th day of administration， the hair length of the mice of the high and medium dose of Sanshen Yangfa Sprays group were longer than those of the model control group （P < 0.05）； the number of damaged hair follicles in the mice of the high and medium dose of Sanshen Yangfa Sprays group were significantly lower than those of the model control group （P < 0.05）； the lesion degree of dermal tissue cells， hair follicles and sebaceous glands in mice of the high dose of Sanshen Yangfa Sprays group was lower than that of the model control group （P < 0.05）. The time of hair follicles from resting period to growing period， from entering growing period to growing surface of mice in high and medium dose of Sanshen Yangfa Sprays group were significantly shorter than those of blank control group （P < 0.05）； the hair length was significantly higher than that of the blank control group at the 15th， 30th， 45th day of administration （P < 0.05）. The absorbance of peritoneal fluid of mice in the high dose of Sanshen Yangfa Sprays group was significantly lower than that in the model control group （P < 0.05）. The value of ear swelling of mice in the high and medium dose of Sanshen Yangfa Sprays group was significantly lower than that in the model control group （P < 0.01）. Conclusion Sanshen Yangfa Sprays have the effect of promoting hair growth and anti-inflammatory effect on sebrrheic alopecia.

[Key words] Sanshen Yangfa Sprays； Seborrheic alopecia； Anti-inflammatory effect

脂溢性脫發(fā)（seborrheic alopecia，SA）又稱雄激素性脫發(fā)，好發(fā)于男性青壯年，目前多認(rèn)為其是一種雄激素依賴的常染色體顯性基因遺傳性禿發(fā)。其發(fā)病可能與內(nèi)分泌功能紊亂、遺傳、真菌感染和炎癥等因素有關(guān)。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑來源于臨床經(jīng)驗(yàn)方，由苦參、側(cè)柏葉、龍膽、丹參、人參等中藥制成，具有清熱燥濕、祛風(fēng)止癢、和血生發(fā)功能，臨床用于SA取得很好的療效。本研究利用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑對(duì)雄激素所致實(shí)驗(yàn)性SA模型（大鼠和小鼠）、C57BL/6小鼠毛囊生長(zhǎng)周期、醋酸致腹腔毛細(xì)血管通透性增高、巴豆油致炎性腫脹的影響，探討其治療SA的作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試樣品 三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑（北京因科瑞斯醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)：20111201）；陽性對(duì)照藥米諾地爾酊（浙江萬馬藥業(yè)有限公司，批號(hào)：110607）；云南白藥酊（云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：ZHE1301）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 美國(guó)癌癥研究所（ICR）小鼠、C57BL/6小鼠，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCKX（京）2012-0001。Wistar大鼠，由北京華阜康生物科技股份有限責(zé)任公司提供，許可證號(hào)：SCKX（京）2009-0007。均飼養(yǎng)于屏障環(huán)境，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（京）2008-0023。

1.1.3 試劑與儀器 丙酸睪酮注射液（天津金輝氨基酸有限公司，批號(hào)：110417）；巴豆油（日本株式會(huì)社）；冰醋酸（北京化工廠，批號(hào)：980219）；伊文思蘭（上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站試劑廠）。游標(biāo)卡尺（上海量具刃具廠）；AVE-854C型半自動(dòng)生化分析儀（愛威科技實(shí)業(yè)有限公司）；Sartorius BSA323S-CW電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；自動(dòng)脫水機(jī)（ASP300型）、切片機(jī)、顯微數(shù)字照像生物顯微鏡（DM2500型）均購自德國(guó)Leica儀器公司。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)雄激素所致大鼠SA的影響 選取SPF級(jí)雄性Wistar大鼠60只，按體重區(qū)組隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中、低劑量組和米諾地爾酊組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前每只大鼠選取背部4 cm×5 cm面積的區(qū)域?qū)⒚撊?，?%苦味酸溶液將脫毛區(qū)涂成黃色以確定脫毛實(shí)驗(yàn)觀察區(qū)。除正常對(duì)照組外，大鼠頸后皮下注射丙酸睪酮注射液[5 mg/（kg·d）]，每天1次，連續(xù)60 d，造成SA模型。連續(xù)皮下注射丙酸睪丸酮4周后大鼠逐漸出現(xiàn)毛發(fā)脫落，殘存毛發(fā)變得纖細(xì)、質(zhì)脆，證明雄性激素性脫發(fā)模型成功建立。造模同時(shí)涂抹給藥，高、中、低劑量（0.290、0.145、0.073 g生藥/mL）三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑和米諾地爾酊（0.05 g/mL）均按1 mL/（只·次）分別涂抹對(duì)應(yīng)藥物組大鼠背部觀察區(qū)，每日2次，給藥間隔2 h。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組涂抹賦型劑（60%乙醇溶液），1 mL/（只·次），每日2次，連續(xù)60 d。給藥每15天于每只大鼠背部觀察區(qū)拔取10根毛發(fā)，用游標(biāo)卡尺測(cè)量毛發(fā)長(zhǎng)度。給藥60 d后，取實(shí)驗(yàn)觀察區(qū)皮膚，進(jìn)行常規(guī)組織脫水、石蠟包埋、HE染色，光鏡鏡檢，觀察大鼠皮膚毛囊和皮脂腺組織病理學(xué)改變。對(duì)各組病變進(jìn)行半定量分析，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如下：皮膚真皮組織細(xì)胞和皮下毛囊、皮脂腺結(jié)構(gòu)正常記為“-”；皮膚真皮未見有增生，毛囊、皮脂腺病變局限，皮下未見有炎癥記為“±”；皮膚真皮組織未見有明顯增生，毛囊明顯囊性變，皮脂腺未見有明顯增生，皮下未見有炎癥記為“+”；皮膚真皮組織有節(jié)段性增生，不明顯，少部分毛囊有囊性變，皮脂腺有輕度增生肥大，皮下未見有明顯炎癥記為“++”；皮膚真皮組織細(xì)胞有不同程度節(jié)段性增生，部分毛囊囊性變，表現(xiàn)毛囊大小不均勻，周邊部無細(xì)胞。皮脂腺有增生，增生腺體內(nèi)細(xì)胞核較少，個(gè)別動(dòng)物皮下有輕度炎性增生記為“+++”[1-2]。

1.2.2 對(duì)雄激素所致小鼠SA的影響 選取SPF級(jí)雄性ICR小鼠60只，按體重區(qū)組隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中、低劑量組和米諾地爾酊組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前每只小鼠選取背部3 cm×4 cm面積的區(qū)域?qū)⒚撊?，?%苦味酸溶液涂成黃色以確定脫毛實(shí)驗(yàn)觀察區(qū)。除正常對(duì)照組外，小鼠頸后皮下注射丙酸睪酮注射液[1 mg/（kg·d）]，每天1次，連續(xù)60 d，造成SA模型。造模15 d后開始涂抹給藥，高、中、低劑量（0.290、0.145、0.073 g生藥/mL）三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑和米諾地爾酊（0.05 g/mL）按0.5 mL/（只·次）分別涂抹對(duì)應(yīng)藥物組小鼠背部觀察區(qū)，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組涂抹賦型劑（60%乙醇溶液），0.5 mL/（只·次）。各組每天給藥2次，連續(xù)45 d。給藥后每15天于每只小鼠背部觀察區(qū)拔取10根毛發(fā)，用游標(biāo)卡尺測(cè)量毛發(fā)長(zhǎng)度。給藥60 d后，取實(shí)驗(yàn)觀察區(qū)皮膚，進(jìn)行常規(guī)組織脫水、石蠟包埋、HE染色，光鏡鏡檢，觀察小鼠皮膚毛囊和皮脂腺組織病理學(xué)改變。對(duì)各組病變進(jìn)行半定量分析，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如下：皮膚真皮皮下毛囊、皮脂腺正常記為“-”；皮膚真皮未見增生，皮下毛囊、皮脂腺病變局限記為“±”；皮膚真皮未見有明顯增生，皮下毛囊未見有退行性病變記為“+”；皮膚真皮有輕度增生，少部分毛囊有囊性變，皮脂腺增多記為“++”；皮膚真皮有不同程度增厚，皮下有輕度炎癥，皮下毛囊有炎性變，皮脂腺增多，增生皮脂腺細(xì)胞核少見記為“+++”[2]。

1.2.3 對(duì)C57BL/6小鼠毛發(fā)生長(zhǎng)周期的影響 選取SPF級(jí)雄性C57BL/6小鼠50只，按體重區(qū)組隨機(jī)分為空白對(duì)照組，三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中、低劑量組和米諾地爾酊組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前每只小鼠選取背部3 cm×4 cm面積的區(qū)域?qū)⒚撊?。脫毛?天開始涂抹給藥，高、中、低劑量（0.290、0.145、0.073 g生藥/mL）三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑和米諾地爾酊（0.05 g/mL）按0.5 mL/（只·次）分別涂抹對(duì)應(yīng)藥物組小鼠背部脫毛區(qū)，對(duì)照組涂抹賦型劑（60%乙醇溶液），0.5 mL/（只·次）。各組每日給藥2次，連續(xù)19 d。每天觀察小鼠皮膚顏色變化，分別記錄每只小鼠背部脫毛區(qū)皮膚顏色（粉色）從用藥到開始變黑和開始長(zhǎng)毛的時(shí)間。以皮膚顏色從用藥到開始變黑作為毛發(fā)從休止期進(jìn)入生長(zhǎng)期的時(shí)間，從皮膚開始變黑到毛發(fā)長(zhǎng)出皮膚表面的時(shí)間作為毛發(fā)從進(jìn)入生長(zhǎng)期到長(zhǎng)出皮表的時(shí)間[3]。從小鼠背部長(zhǎng)出毛發(fā)開始，每隔3 d于每只小鼠背部觀察區(qū)拔取10根毛發(fā)，用游標(biāo)卡尺測(cè)量毛發(fā)長(zhǎng)度[3-5]。

1.2.4 對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響 選取SPF級(jí)雄性ICR小鼠50只，按體重區(qū)組隨機(jī)分為模型對(duì)照組，三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中、低劑量組，云南白藥酊組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前每只小鼠選取背部3 cm×4 cm面積的區(qū)域?qū)⒚撊プ鳛閷?shí)驗(yàn)給藥區(qū)。各組分別涂抹給藥，高、中、低劑量（0.290、0.145、0.073 g生藥/mL）三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑和云南白藥酊按0.5 mL/（只·次）分別涂抹對(duì)應(yīng)藥物組小鼠背部給藥區(qū)，模型對(duì)照組涂抹賦型劑（60%乙醇溶液），0.5 mL/（只·次）。各組每日給藥2次，連續(xù)3 d。末次給藥后1 h，尾靜脈注射0.5%伊文思蘭液0.2 mL/20 g，10 min后腹腔注射0.6%醋酸0.2 mL/20 g，10 min后腹腔注射5 mL生理鹽水注射液，處死小鼠，輕揉腹部50次，剪開皮膚，用吸管吸取腹腔液，離心，取上清在波長(zhǎng)590 nm下測(cè)吸光度[6]。

1.2.5 對(duì)巴豆油致小鼠耳腫脹的影響 選取SPF級(jí)雄性ICR小鼠50只，按體重區(qū)組隨機(jī)分為模型對(duì)照組，三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中、低劑量組，云南白藥酊組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前每只小鼠選取背部3×4 cm面積的區(qū)域?qū)⒚撊プ鳛閷?shí)驗(yàn)給藥區(qū)。各組分別涂抹給藥，高、中、低劑量（0.290、0.145、0.073 g生藥/mL）三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑和云南白藥酊按0.5 mL/（只·次）分別涂抹對(duì)應(yīng)藥物組小鼠背部給藥區(qū)，模型對(duì)照組涂抹賦型劑（60%乙醇溶液），0.5 mL/（只·次）。各組每日給藥2次，連續(xù)3 d。給藥第3天，以2%巴豆油溶液0.05 mL/只涂于右耳前后兩面，左耳作對(duì)照，致炎后半小時(shí)涂抹給藥2次。致炎后4 h將小鼠處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑8 mm的不銹鋼沖子在同一部位分別沖下耳片，電子天平稱重。以左右耳片的重量差為耳腫脹值[7]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 15.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，病理等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，毛發(fā)生長(zhǎng)長(zhǎng)度采用重復(fù)測(cè)量方差分析；其他數(shù)據(jù)多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)雄激素所致大鼠SA的影響

2.1.1 對(duì)大鼠毛發(fā)生長(zhǎng)的影響 三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中、低劑量組大鼠在給藥第15、30、45、60天的毛發(fā)長(zhǎng)度均長(zhǎng)于模型對(duì)照組，其中三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑低劑量組在給藥45 d時(shí)與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖1。

2.1.2 對(duì)大鼠觀察區(qū)皮膚組織真皮淺層毛囊形態(tài)的影響 模型組大鼠部分皮膚真皮組織細(xì)胞有不同程度節(jié)段性增厚，大鼠皮下有輕度炎性增生，以小淋巴為主；部分大鼠皮下毛囊有明顯囊性變，毛囊大小不等，增大毛囊腔內(nèi)有脫落角化物，周邊有輕度纖維化，毛囊周邊細(xì)胞消失或細(xì)胞層次明顯減少，腔內(nèi)似有鈣化物染成藍(lán)色，皮脂腺數(shù)目增多，部分腺體有肥大，肥大腺體細(xì)胞核明顯減少，正常毛囊數(shù)減少。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中、低劑量組和米諾地爾酊組大鼠皮膚真皮組織細(xì)胞及皮下毛囊、皮脂腺病變與模型組比較，有不同程度減輕，見圖2。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組大鼠皮膚損傷毛囊數(shù)與模型對(duì)照組比較明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01），見圖3。與模型對(duì)照組比較，三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組和米諾地爾酊組大鼠皮膚真皮組織細(xì)胞及皮下毛囊、皮脂腺病變明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H0.05 = 78，P < 0.05）。見表1。

2.2 對(duì)雄激素所致小鼠SA的影響

2.2.1 對(duì)小鼠毛發(fā)生長(zhǎng)的影響 三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組小鼠在給藥第15、30、45天的毛發(fā)長(zhǎng)度長(zhǎng)于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖4。

2.2.2 對(duì)小鼠皮膚毛囊和皮脂腺病變程度的影響 病理組織學(xué)檢查顯示，模型對(duì)照組小鼠背部皮膚真皮組織細(xì)胞有輕度增厚，部分毛囊有囊性變，腔內(nèi)有角化珠形成；皮脂腺有明顯增多，皮脂腺腺內(nèi)細(xì)胞核有減少。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中、低劑量組和米諾地爾酊組小鼠皮膚真皮組織細(xì)胞增厚、毛囊有囊性變、正常毛囊減少、皮脂腺增生等病變與模型組比較，有不同程度減輕，高、中劑量組減輕更為明顯，見圖5。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組小鼠皮膚損傷毛囊數(shù)明顯減少，與模型對(duì)照組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01），見圖6。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高劑量組毛囊和皮脂腺病變較模型對(duì)照組明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H0.05 = 78，P < 0.05）。見表2。

2.3 對(duì)C57BL/6小鼠毛發(fā)生長(zhǎng)周期及長(zhǎng)度的影響

三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組小鼠毛囊從休止期到生長(zhǎng)期時(shí)間、從進(jìn)入生長(zhǎng)期到長(zhǎng)出皮表時(shí)間較空白對(duì)照組明顯縮短（P < 0.05），給藥第4天和第7天毛發(fā)長(zhǎng)度明顯大于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖7～8。

2.4 對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響

三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高劑量組吸光度值明顯低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖9。

2.5 對(duì)巴豆油致小鼠耳腫脹的影響

三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高、中劑量組巴豆油致小鼠耳腫脹值明顯低于模型對(duì)照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見圖10。

3 討論

SA是皮膚科門診的常見病、多發(fā)病，本病具有種族差異，男性及高加索人發(fā)病率較高[8-9]。我國(guó)流行病學(xué)調(diào)查顯示男性SA患病率為21.3%，女性為6.0%[10-11]。西藥治療SA效果明顯，但不良反應(yīng)相對(duì)較多，如米諾地爾是一種非特異性的治療脫發(fā)藥物，是FDA批準(zhǔn)用于治療SA的一線外用藥物，但使用過程中可能引起面部和四肢多毛癥，停用后治療效果逐漸消失。非那雄胺是一種Ⅱ型5α-還原酶選擇性抑制劑，可持續(xù)改善頭發(fā)的生長(zhǎng)情況，但存在引起性功能異常、精子一過性減少和男性乳房發(fā)育異常等不良反應(yīng)。中藥外用治療SA取得了良好效果，已引起關(guān)注，中藥外用以局部作用為主，選取活血通絡(luò)的中藥兼用補(bǔ)益或活血?dú)⑾x藥物等治療SA，可改善頭皮毛囊局部微循環(huán)以使毛囊獲得更多營(yíng)養(yǎng)。如孫雙等[12]以祛風(fēng)行氣、養(yǎng)血活血為法，使用復(fù)方姜汁當(dāng)歸洗劑外用，旨在改善頭皮微循環(huán)，睡前外用，治療90 d總有效率為78.63%，療效較好。莫興群等[13]以祛脂生發(fā)止癢為法，自擬祛脂生發(fā)液（主要藥物為透骨草、側(cè)柏葉、皂莢、黃精、苦參、王不留行）外洗，每3天1次，28 d為1個(gè)療程，治療3個(gè)療程，療效顯著。呂海鵬等[14]對(duì)比兩種外治法治療男性SA的療效，試驗(yàn)組使用椒蓮酊劑（側(cè)柏葉、旱蓮草、花椒、紅花、何首烏、硼砂和山柰等），對(duì)照組使用米諾地爾酊，治療12個(gè)月，試驗(yàn)組有效率為82%，優(yōu)于對(duì)照組的62%。

SA的病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確，一般認(rèn)為雄激素及其受體的表達(dá)在本病的發(fā)生中起關(guān)鍵作用，而Ⅱ型5α-還原酶是其發(fā)病的重要因素[15]。正常生理狀態(tài)下，雄激素在體內(nèi)對(duì)毛發(fā)的生長(zhǎng)發(fā)育起一定的刺激促進(jìn)作用，但能誘導(dǎo)某些特定部位毛發(fā)的脫失；睪酮是體內(nèi)主要的雄激素，它經(jīng)5α-還原酶轉(zhuǎn)化為二氫睪酮，后者可引起終毛向毳毛轉(zhuǎn)變，最終導(dǎo)致脫發(fā)[1]。故本研究采用了皮下注射丙酸睪酮注射液造成實(shí)驗(yàn)性SA模型，結(jié)果顯示三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑給藥組大、小鼠毛發(fā)生長(zhǎng)速度明顯快于模型對(duì)照組，皮膚損傷毛囊數(shù)明顯減少，皮膚毛囊和皮脂腺病變程度明顯減輕。結(jié)果表明，三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑可改善雄激素致毛發(fā)生長(zhǎng)緩慢，對(duì)SA具有治療作用。

C57BL/6小鼠是目前國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用的研究毛發(fā)周期的動(dòng)物模型；人類各個(gè)毛囊的毛發(fā)周期不同步，而該小鼠可表現(xiàn)出獨(dú)特的毛發(fā)周期同步性，故它常用來作為毛發(fā)研究模型[16-18]。該小鼠軀干皮膚的黑素細(xì)胞只存在于毛囊中，而且僅在生長(zhǎng)期時(shí)合成黑色素；在毛發(fā)的生長(zhǎng)期，由于毛球部黑素細(xì)胞不斷產(chǎn)生黑素，并傳遞給毛囊角質(zhì)形成細(xì)胞，使皮膚外觀呈現(xiàn)黑色；退行期時(shí)，黑素生成減少，皮膚呈灰黑色；在休止期由于毛球部微縮消失，毛囊停止生成黑素，皮膚變?yōu)榉奂t色。休止期的毛發(fā)經(jīng)拔除后局部可被誘導(dǎo)出高度同步的新毛發(fā)周期，組織學(xué)上同該鼠自然周期變化一致，故可從皮膚顏色的變化來推斷毛發(fā)周期的改變[19-22]。毛囊歷經(jīng)生長(zhǎng)期、退行期和休止期呈周期性生長(zhǎng)，在此過程中對(duì)許多生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、激素、神經(jīng)肽、藥物等多種體內(nèi)外因素高度敏感[3]，本研究采用了C57BL/6小鼠，考察三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑對(duì)毛囊生長(zhǎng)周期的影響，結(jié)果顯示三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑所試劑量組可明顯縮短小鼠毛發(fā)從休止期進(jìn)入生長(zhǎng)期的時(shí)間以及從進(jìn)入生長(zhǎng)期到長(zhǎng)出皮表時(shí)間，且促進(jìn)小鼠毛發(fā)生長(zhǎng)速度。

抗炎藥是治療SA的重要藥物之一，地塞米松常用于治療脫發(fā)，試驗(yàn)證明，它可以誘導(dǎo)毛乳頭細(xì)胞增殖[23-24]。脫發(fā)也與皮膚感染、過敏和炎癥有關(guān)，許多中藥成分都具有抗炎、抑菌、調(diào)節(jié)免疫功能和雌激素樣作用，可能是中藥治療脫發(fā)的主要機(jī)制。三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑高劑量可明顯對(duì)抗醋酸引起小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高，高、中劑量對(duì)小鼠巴豆油性耳腫脹有明顯的抑制作用，提示其具有抗炎作用，可能是其治療SA的作用機(jī)制之一。

綜上所述，本研究提示三參養(yǎng)發(fā)噴霧劑對(duì)SA具有治療作用，同時(shí)可促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)，并具有抗炎作用，為臨床進(jìn)一步應(yīng)用提供了參考和依據(jù)。

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（收稿日期：2018-02-28 本文編輯：張瑜杰）