蔣比芬

[摘要] 目的 探討骨髓細胞形態(tài)、細胞化學染色及骨髓活檢切片三聯(lián)檢測法對低原始細胞骨髓增生異常綜合征與溶血性貧血的鑒別診斷價值。 方法 將2015年1月～2018年1月我院接診的77例確診為骨髓髓系原始細胞<5%的MDS患者納入本研究，作為MDS組。選取溶血性貧血（HA）患者50例作為HA組。進行骨髓細胞形態(tài)、細胞化學染色、骨髓活檢細胞化學染色檢測。觀察核型異常及分子生物學異常檢測結(jié)果、骨髓原始細胞計數(shù)、紅系比例、 粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血、巨核系病態(tài)造血情況、內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)、環(huán)鐵粒幼紅細胞陽性率、骨髓活檢切片檢測結(jié)果，并對結(jié)果進行聯(lián)合分析。 結(jié)果 MDS組核型異常、分子生物學異常檢出率高于HA組（P<0.05）；MDS組、HA組骨髓原始細胞計數(shù)、紅系比例對比，P>0.05；MDS組、HA組粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血異常檢出率對比，P>0.05；MDS組巨核系病態(tài)造血異常檢出率高于HA組（P<0.05）。MDS組、HA組內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)對比，P>0.05。MDS組環(huán)鐵粒幼紅細胞陽性檢出率高于HA組（χ2=19.659，P<0.05）。MDS組幼稚前體細胞異常定位（abnormal localization of immature precursors，ALIP）、巨核病態(tài)造血檢出率高于HA組（P<0.05）。聯(lián)合檢測檢出率為89.61%。 結(jié)論 骨髓細胞形態(tài)、細胞化學染色及骨髓活檢切片三聯(lián)檢測法能夠提高低原始細胞骨髓增生異常綜合征檢出率，輔助臨床診治。

[關鍵詞] 骨髓細胞形態(tài)；細胞化學染色；骨髓活檢切片；低原始細胞骨髓增生異常綜合征；溶血性貧血；鑒別

[中圖分類號] R551.3 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2018）26-0116-04

The differential diagnosis value of triple detection method for low primordial cells MDS and HA

JIANG Bifen

Department of Clinical Laboratory， Zhaotong First People's Hospital in Yunnan Province， Zhaotong 657000， China

[Abstract] Objective To investigate the differential diagnosis value of bone marrow cell morphology， cytochemical staining and bone marrow biopsy slice for low myogenic myelodysplastic syndrome and hemolytic anemia. Methods 77 MDS patients with bone marrow myeloid blasts <5% admitted in our hospital from January 2015 to January 2018 were enrolled in this study as the MDS group. 50 patients with hemolytic anemia（HA） were selected as the HA group. The bone marrow cell morphology， cytochemical staining， and bone marrow biopsy cytochemical staining were performed. The test results of karyotypic abnormalities and molecular biological abnormalities， bone marrow blast count，erythroid ratio，granulocyte pathogenic hematopoiesis， erythroid pathological hematopoiesis，megakaryocytic hematopoiesis， intra-iron positive level， iron particles， and ring iron red blood cell positive rate， and the results of bone marrow biopsy slide were observed. And the results were analyzed jointly. Results The abnormality rate of karyotype and molecular biological abnormality in MDS group was higher than that in HA group（P<0.05）. There was no significant difference in the ratio of bone marrow blast cell count and red line ratio in MDS group and HA group（P>0.05）.There was no significant difference in detection rate of morbid hematopoiesis and erythroid pathological hematopoietic abnormalities between MDS group and HA group（P>0.05）. The detection rate of morbid hematopoietic abnormalities in MDS group was higher than that in HA group（P<0.05）. There was no significant difference in iron positive level and the number of iron particles between the MDS group and the HA group（P>0.05）. The positive rate of ring iron red blood cells in the MDS group was higher than that in the HA group （χ2=19.659， P<0.05）. The detection rates of abnormal localization of immature precursors （ALIP） and megakaryocytic hematopoiesis were higher in the MDS group than those in the HA group（P<0.05）. The combined detection rate was 89.61%. Conclusion The triple detection of bone marrow cell morphology， cytochemical staining and bone marrow biopsy can improve the detection rate of low-primary myelodysplastic syndrome and assist clinical diagnosis and treatment.

[Key words] Bone marrow cell morphology； Cytochemical staining； Bone marrow biopsy slice； Low primordial myelodysplastic syndrome； Hemolytic anemia； Identification

骨髓增生異常綜合征（myelodysplastic syndrome，MDS）是一類造血干細胞惡性克隆性疾病，患者主要表現(xiàn)為難治性全血細胞減少情況[1]。臨床診斷MDS主要是通過骨髓細胞形態(tài)學進行評價，輔助核型檢測，得到診斷結(jié)果，但低原始細胞MDS核型輔助檢測效果欠佳，而且容易和溶血性貧血混淆，發(fā)生誤診[2-4]。為提高低原始細胞MDS的診斷準確性，我院開展了骨髓細胞形態(tài)、細胞化學染色及骨髓活檢切片三聯(lián)檢測法在該診斷方面的應用，探討其診斷效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2015年1月～2018年1月我院接診的77例確診為骨髓髓系原始細胞<5%的MDS患者納入本研究，作為MDS組。選取溶血性貧血（Hemolytic anemia，HA）患者50例作為HA組。MDS組：男40例，女37例，年齡19～70歲，平均（48.15±6.33）歲；血紅蛋白（haemoglobin，Hb）水平（74.84±15.36）g/L，白細胞（white blood cell，WBC）水平為（4.44±1.08）×109/L；Plt水平為（88.29±25.37）×109/L。HA組：男27例，女23例，年齡21～70歲，平均（48.96±7.15）歲；Hb水平（75.98±17.24）g/L，WBC水平為（4.79±1.22）×109/L；Plt水平為（194.18±38.78）×109/L。兩組患者的基線資料水平對比，性別分布、年齡分布、Hb水平、WBC水平對比，P>0.05；Plt水平對比，P<0.05。

納入標準：符合WHO分類診斷標準，確診為MDS；知情同意，簽署知情同意協(xié)議書；不明原因的肝、脾、淋巴結(jié)腫大；不明原因的發(fā)熱、骨痛。

排除標準：明顯出血傾向的患者；晚期孕婦；小兒及難合作者；穿刺部位有炎癥或畸形。

1.2 檢測方法

1.2.1 骨髓細胞形態(tài) 細胞遺傳學分析：取患者骨髓液5 mL，經(jīng)肝素抗凝后，培養(yǎng)24 h以上，獲得中期分裂細胞，進行核型分析，每位患者分析20個分裂相。

分子生物學分析：取患者EDTA抗凝骨髓液3 mL，提取骨髓標本中的RNA。反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，進行實時定量PCR擴增，完成分子生物學分析。

骨髓形態(tài)學分析[5]：油鏡下計數(shù)，觀察每個標本的骨髓涂片細胞250個，其中，髓系細胞比例指的是骨髓中髓系原始細胞250個有核細胞中的比例，紅系比例指的是骨髓中有核紅細胞在250個有核細胞中的比例。

1.2.2 細胞化學染色 細胞化學染色[6]：骨髓內(nèi)鐵染色，將骨髓片置于甲醛蒸汽中固定3 min，然后把濃度為40 g/L的亞鐵氰化鉀和4%的鹽酸等體積混合，加熱至56℃；把骨髓片放入其中，保留30 min，取出骨髓片，流水沖洗，堿性復紅應用液復染5 min，蒸餾水沖洗，空氣中自然晾干，鏡檢。鐵可染色為藍色顆粒表明陽性。

1.2.3 骨髓活檢細胞化學染色 取活組織塊，大小約2 mm×15 mm，經(jīng)Bouin氏液固定，時間為1 h，然后酒精梯度洗脫，包埋劑包埋，切片3 μm厚，經(jīng)蘇木素-吉姆薩-酸性品紅染色[7]。油鏡下觀察。

1.3 觀察指標

觀察核型異常及分子生物學異常檢測結(jié)果、骨髓原始細胞計數(shù)、紅系比例、粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血、巨核系病態(tài)造血情況、內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)、環(huán)鐵粒幼紅細胞陽性率、骨髓活檢切片檢測結(jié)果，并對結(jié)果進行聯(lián)合分析。

分子生物學異常評價標準：和既定引物序列不匹配或不完全匹配表明分子生物學異常，即無擴增產(chǎn)物或擴增產(chǎn)物和理論結(jié)果明顯異常。

1.4 統(tǒng)計學分析

使用SPSS19.0進行統(tǒng)計學處理，檢出率為計數(shù)資料，以百分率表示，組間比較用χ2檢驗，計數(shù)水平為計量資料，以均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 核型異常及分子生物學異常檢測結(jié)果比較

MDS組核型異常、分子生物學異常檢出率高于HA組（P<0.05）。見表1。

2.2 骨髓原始細胞計數(shù)、紅系比例比較

MDS組、HA組骨髓原始細胞計數(shù)、紅系比例對比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

2.3 粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血、巨核系病態(tài)造血情況比較

MDS組、HA組粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血異常檢出率對比，P>0.05；MDS組巨核系病態(tài)造血異常檢出率高于HA組（P<0.05）。見表3。

2.4 內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)比較

MDS組、HA組內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)對比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表4。

2.5 環(huán)鐵粒幼紅細胞陽性率比較

MDS組環(huán)鐵粒幼紅細胞陽性檢出30例，陽性率為38.96%，HA組環(huán)鐵粒幼紅細胞陽性檢出2例，陽性率為2.60%。MDS組環(huán)鐵粒幼紅細胞陽性檢出率高于HA組（χ2=19.659，P<0.05）。

2.6 骨髓活檢切片檢測結(jié)果比較

MDS組幼稚前體細胞異常定位（abnormal localization of immature precursors，ALIP）、巨核病態(tài)造血檢出率高于HA組（P<0.05），見表5。

2.7 聯(lián)合分析

MDS組，骨髓細胞形態(tài)檢測，巨核系病態(tài)發(fā)生率為19.48%（15/77），內(nèi)鐵染色環(huán)核鐵粒幼紅細胞陽性率為38.96%（30/77），骨髓活檢切片ALIP發(fā)生率為68.83%（53/77），巨核病態(tài)檢出率為51.95%（40/77），聯(lián)合檢測檢出率為89.61%。

3 討論

MDS的發(fā)病病因復雜，臨床難以和HA等血液系統(tǒng)良性疾病進行很好的區(qū)分，誤診情況時有發(fā)生，延誤治療[8]。MDS患者血象會表現(xiàn)為嚴重貧血等，骨髓象表現(xiàn)為紅系明顯增生，尤其是低原始細胞MDS，無明顯檢測特異性，臨床診斷難度較高。提高其診斷準確率，對于輔助臨床治療具有重要意義。

本文研究結(jié)果顯示，MDS組和HA組在一般資料方面，僅血小板水平對比存在差異，但血小板水平并非低原始細胞MDS的特異表征，不能確診為該病癥。在進行核型分析和分子生物學檢測結(jié)果方面，盡管MDS組檢出率相對較高，但依然僅為20.78%、19.48%，檢出率較低。兩組患者骨髓原始細胞計數(shù)、紅系比例、粒系病態(tài)造血、紅系病態(tài)造血異常檢出率、內(nèi)鐵陽性水平、鐵顆粒數(shù)均無統(tǒng)計學差異，因此，依然難以區(qū)分。

已有研究認為，骨髓細胞病態(tài)造血在診斷MDS方面有明顯意義[9-11]。本文研究結(jié)果顯示，MDS組巨核系病態(tài)造血異常檢出率高于HA組（P<0.05）。骨髓細胞病態(tài)造血在診斷MDS方面有較高的價值，可以作為診斷MDS的特征之一。但依然不是診斷MDS的獨特指征。一般認為，HA患者巨核系病態(tài)發(fā)生情況較少，可根據(jù)這一情況進行二者的區(qū)別診斷[12]。但在診斷MDS方面，其結(jié)果顯示僅為51.95%，依然缺乏特異性。故而配合細胞化學染色、骨髓活檢切片以期提高檢測準確率。

MDS和HA患者存在鐵攝入系統(tǒng)紊亂和鐵代謝系統(tǒng)紊亂，使得紅細胞異常，幼紅細胞中鐵顆粒增加[13]。兩組患者經(jīng)檢測，這方面并無區(qū)別。而MDS組環(huán)鐵粒幼紅細胞陽性檢出率高于HA組（χ2=19.659，P<0.05）。但檢出率依然不是很高。在對患者進行骨髓活檢切片分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MDS組ALIP、巨核病態(tài)造血檢出率高于HA組（P<0.05）。其診斷意義相對較高。而通過聯(lián)合檢測，檢出率達89.61%，明顯提高了MDS檢出率。

MDS是一組異質(zhì)性疾病，其發(fā)病起源于造血干細胞，臨床表現(xiàn)為病態(tài)造血，表現(xiàn)為難治性血液病[14]。其發(fā)病機制尚不十分明顯，繼發(fā)性MDS主要和烷化劑、放射線、有機毒物等有關。部分MDS患者存在原癌基因突變、染色體異常等情況，患者中性粒細胞超氧陰離子水平、堿性磷酸酶水平偏低[15-16]。臨床可將MDS分為難治性貧血、環(huán)形鐵粒幼細胞性難治性貧血、難治性貧血伴原始細胞增多轉(zhuǎn)變型、慢性粒-單核細胞性白血病五大類型，在診斷方面，還需要進一步深入研究，提高其診斷準確性。

總之，骨髓細胞形態(tài)、細胞化學染色及骨髓活檢切片三聯(lián)檢測法能夠提高低原始細胞骨髓增生異常綜合征檢出率，輔助臨床診治。

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（收稿日期：2018-04-30）