董姣姣 范妙璇 陳煉明 傅欣彤 肖紅斌

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué),北京，100102; 2 北京市藥品檢驗(yàn)所,北京,100035)

真菌毒素殘留是中藥材微量外源性有毒有害物質(zhì)的殘留，是目前該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。各國政府對真菌毒素的分布及檢測予以了極大的關(guān)注，特別是歐洲、韓國等國家對此設(shè)定了嚴(yán)格的限量規(guī)定，但發(fā)現(xiàn)各國更側(cè)重對食品中真菌毒素進(jìn)行限量規(guī)定，對藥材真菌毒素規(guī)定較少，見表1。2015年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定陳皮、僵香、胖大海、酸棗仁、桃仁等19味藥材需要檢測黃曲霉毒素，其中B1不得超過5 μg/kg，B1、B2、G1、G2總量不得超過10 μg/kg，且規(guī)定其凈化方式為免疫親和柱凈化法，但并未對其余中藥材及真菌毒素進(jìn)行限量規(guī)定。真菌毒素種類繁雜，且在不同種類和不同基質(zhì)中藥之間都存在著很大的差異，使檢測難度增大。其前處理方法的好壞在很大程度上決定了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此為了提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，研究不同的基質(zhì)的中藥和不同的毒素的前處理方法尤為重要。

1 分類綜述

1.1 提取方法

表1 各國對真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)

一種好的提取方法不僅要求提取充分，而且要求提取的物質(zhì)中含有盡量少的非目標(biāo)組分，這將有利于之后毒素的分離和純化。真菌毒素寄生在中藥基質(zhì)的各個(gè)角落，需要外界力量使其溶解。目前常用的毒素提取溶劑包括甲醇、乙酸乙酯、乙腈和水中的一種或多種不同配比的混合物，提取方法主要有高速均質(zhì)提取法、振蕩提取法、超聲提取法、高速攪拌提取法等[5]。

1.1.1 高速均質(zhì)提取法 高速均質(zhì)提取法，是在提取劑環(huán)境中利用均質(zhì)機(jī)器將樣品進(jìn)行高速旋轉(zhuǎn)，使提取劑與樣品組織進(jìn)行充分接觸，進(jìn)而將中藥材中的真菌毒素提取出來。不足之處在于此種方法由于高速攪拌可能破壞分子結(jié)構(gòu)。韓錚等[6]選取不同基質(zhì)的30份中藥材，包括根莖類(白芍、丹參等)、種子果實(shí)類(酸棗仁、苦杏仁等)、花類(菊花、槐花等)、全草類(大青葉、青黛等)，通過比較甲醇、乙腈、水、甲醇/水(84/16,v/v)、甲醇/水(50/50,v/V)、乙腈/水(84/16,v/v)、乙腈/0.1 M的碳酸鈉水溶液(70/30,v/v)、乙酸乙酯等溶液對中藥材真菌毒素的提取率，分別選擇86%乙腈提取AF類真菌毒素、乙酸乙酯提取OT類真菌毒素、50%乙腈提取FB類真菌毒素，乙腈加氯化鈉提取ZEN，并經(jīng)UPLC/MS/MS分別測定。Katerere D R等[7]在薯蕷屬、靈芝屬類等植物中加入氯化鈉，用80%甲醇對其進(jìn)行高速均質(zhì)提取，得到AFB1、FB1、FB2、FB3結(jié)果。Zheng H等[8]則用84%乙腈水對根莖、花類、種子類和全草類的不同中藥進(jìn)行高速均質(zhì)提取，測定了AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1、AFM2六種AF類真菌毒素結(jié)果。Han Z等[9]比較了不同濃度的甲醇水和乙腈水對柑橘、柴胡等中藥材中DON、3-ADON、15-ADON、NIV和Fus X的提取率，選擇用84%乙腈水作為提取溶劑，對其進(jìn)行高速均質(zhì)提取。Liu X等[10]比較了50%甲醇水、50%乙腈水、75%甲醇水、75%乙腈水、1%甲酸乙腈水和1%甲酸甲醇水對桃仁、酸棗仁、當(dāng)歸等中藥中FB1、FB2、FB3的提取效果，發(fā)現(xiàn)用50%乙腈水提取同時(shí)，使用NaOH調(diào)節(jié)PH為6～9，將達(dá)到符合要求的回收率。Zhang L等[11]將氯化鈉加入北五味子、山楂等中藥材粉末后加入70%甲醇高速均質(zhì)提取過濾，后加入磷酸緩沖鹽調(diào)節(jié)PH為7.8并用2%吐溫-20助溶，得到待凈化溶液。Arroyo-Manzanares N等[12]將水飛薊研磨，加入磷酸緩沖鹽、5%甲酸乙腈渦旋高速均質(zhì)提取AF、NIV等真菌毒素。朱禹澎[39]等對比了藥典甲醇提取法和不同的離心速度對黃曲霉提取的影響，選擇提取溶劑為70%甲醇對陳皮粉末加入氯化鈉高速均質(zhì)提取，并將離心速度由2500 r/min改為4 000 r/min，發(fā)現(xiàn)此方法對進(jìn)液相的峰有所改進(jìn)。

1.1.2 振蕩提取法 振蕩提取是一種較常見的提取方法，優(yōu)點(diǎn)在于將樣本混合均勻會(huì)大幅度增加液體的流動(dòng)性，從而提高提取效率，且不會(huì)損壞樣本，但對不同基質(zhì)的中藥真菌毒素的提取率差別較大?？紫楹绲萚14]加氯化鈉于樣品中，用乙腈直接振蕩提取生姜、槐花等植物中的黃曲霉毒素，并用玻璃纖維過濾。Zheng R等[15]用84%乙腈水對太子參、苦杏仁等244批樣品振搖提取，通過LC-MS/MS檢測到AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、OTA和ST六種真菌毒素，回收率在91.2%～112.1%之間。林方芬等[16]用84%乙腈水對川貝母、杜仲等15種藥材渦旋振蕩提取后吸取上清液60 ℃蒸干復(fù)溶得供試液。Zheng R S[17]等用乙酸乙酯直接渦旋提取金銀花、厚樸等中藥得到AFB1、B2、G1、G2、OTA、ST 6種真菌毒素，并分別用形態(tài)學(xué)、分子式識別、液質(zhì)連用等方法鑒別。 Ali N等[18]選擇70%甲醇水振蕩提取檳榔得上清液，用吐溫-20：PBS(1∶ 9)助溶，再通過玻璃纖維紙過濾，得到澄清的提取液。付成平等[19]直接用80%甲醇振蕩提取穿山龍中的AFB1，且未經(jīng)過其他提取操作。

1.1.3 超聲提取法 超聲提取法利用超聲波的空化作用、機(jī)械效應(yīng)和熱效應(yīng)等加速胞內(nèi)有效物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散和溶解，顯著提高提取效率，但其破碎力較強(qiáng)，雜質(zhì)溶出較多。陳重均[20]考察了70%甲醇、100%甲醇、84%乙腈及100%乙腈對黃芪中真菌的提取效率，最終使用100%乙腈對黃芪中10種真菌毒素超聲提取。李峻媛[21]比較了乙腈-水(84∶ 16，v/v)和甲醇-水(80∶ 20，v/v)對薏苡仁中黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮等真菌毒素的提取率，選擇了乙腈-水(84∶ 16，v/v)超聲提取作為其提取方式，并經(jīng)過濾紙過濾。萬麗等[22]使用70%甲醇超聲提取川芎、柏子仁等14批中藥中的黃曲霉毒素，玻璃纖維過濾。趙連華等[23]以80%甲醇水超聲提取后濾過玻璃纖維紙，取2 mL N2吹干，50%甲醇復(fù)溶得AF類4種黃曲霉毒素。李夢華等[24]對比了甲醇-水(80∶ 20，v/v)與甲醇-水-0.1甲酸(79∶ 20∶ 1，v/v/v)對8種毒素的提取率，發(fā)現(xiàn)甲醇-水(80∶ 20，v/v)體系對伏馬毒素的回收率在60%左右，而甲醇-水-0.1甲酸體系使伏馬毒素的回收率達(dá)到80%以上，故選擇甲醇-水-0.1甲酸對山藥中的AFB1、B2、G1、G2、OTA、FB1、FB2、ZEA 8種真菌毒素超聲提取。胡一晨等[25]使用80%甲醇超聲提取川芎、白芷、半夏等5種中藥中的黃曲霉毒素。朱迪[26]通過加入氯化鈉并用70%甲醇對87批中藥飲片超聲提取，檢測4種AF類真菌毒素。Kong W J等[27]比較了不同濃度的甲醇水和乙腈水對薏苡仁中AFG2、AFG1、AFB2、AFB1、β-ZOL、α-ZOL、ZON的提取率，并對比了加入氯化鈉和不加氯化鈉的區(qū)別，選擇了80%甲醇加入氯化鈉超聲提取。Yang L等[28]使用80%甲醇超聲提取甘草、黃芪、黃芩等中藥中的OTA后加入3%吐溫-20溶液助溶。郝愛魚等[29]通過70%甲醇超聲提取120批中藥飲片后加入10%吐溫-20溶液助溶得4種AF類真菌毒素。Wei R等[30]比較了不同濃度的乙腈和甲醇對AFB1、B2、G1、G2、OTA的提取率，發(fā)現(xiàn)80%甲醇的提取可以達(dá)到符合要求的回收率。故選擇80%甲醇對甘草中此5種真菌毒素進(jìn)行提取并加入2%吐溫-20溶液助溶得。曹紀(jì)亮[31]比較了80%甲醇超聲提取20 min和振搖提取60 min的提取率，發(fā)現(xiàn)無明顯差異，選擇較為簡便的80%甲醇對中藥鴉膽子、生姜中的黃曲霉及赭曲霉進(jìn)行提取。并且，曹紀(jì)亮等還考察了不同濃度的吐溫-20/PBS溶液對沉淀的助溶效果，發(fā)現(xiàn)2.0%的吐溫-20/PBS溶液能有效抑制沉淀的產(chǎn)生。通過測定后發(fā)現(xiàn)赭曲霉污染較為嚴(yán)重，故建立了赭曲霉的提取方法為60%乙腈水超聲提取濾過后，加水稀釋鹽酸調(diào)節(jié)PH為1.0。YangYing等[32]將氯化鈉與生姜混合后加入80%甲醇水超聲提取，在過濾前先加入2% 吐溫-20/PBS混勻?yàn)V過玻璃纖維紙得供試液。韋日偉等[33]將甘草粉碎加入氯化鈉用80%甲醇超聲提取后定量濾紙粗濾之后加入2%吐溫-20稀釋。Wen J等[34]用同樣的方法提取測定AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、OTA 5種真菌毒素。李春等[35]先將何首烏粉末中加入水、1%乙酸乙腈溶液渦旋，后超聲提取，離心，吸取上清液備用。

1.1.4 攪拌提取 攪拌提取法是在樣本浸漬提取的基礎(chǔ)上加快物質(zhì)的溶出，操作簡單易行，使用攪拌機(jī)等簡易儀器即可完成，但提取耗時(shí)較長。王少敏等[36]通過12 500 r/min高速攪拌提取桃仁粉末中4種AF類真菌毒素，并通過玻璃纖維濾紙濾過。魏俊德等[37]也用同樣的方法對白蘇子進(jìn)行攪拌提取，測得4種黃曲霉毒素。王珂等[38]使用84%乙腈對薏苡仁中的黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素和T-2毒素等7種真菌毒素高速攪拌提取。2005年，鄭榮等[39]已使用70%甲醇加入氯化鈉高速攪拌提取丹參、大棗、苦杏仁等中藥中4種AF類真菌毒素。2010年，[40]他們對酸棗仁中的4種AF類真菌用同樣的方法進(jìn)行測定。楊文武等[41]也使用和鄭榮相同的提取方法對白芍、陳皮、酸棗仁等中藥中的4種AF類真菌毒素進(jìn)行提取。劉書宇等[42]粉碎蓮子后加入氯化鈉，用80%甲醇高速攪拌提取并加入PBS稀釋得AF類4種真菌毒素。趙淑銳等[43]使用80%甲醇水和正己烷加入人參粉末中高速攪拌后通過分層中性濾紙過濾，得續(xù)濾液加入磷酸緩沖鹽和吐溫-20得到黃曲霉毒素提取液。Yue Y T等[44]加入5 g聚乙二醇于薏苡仁、西洋參等中藥材中再加入100 mL蒸餾水?dāng)嚢杼崛ON。

1.2 凈化方法

樣品凈化是真菌毒素分析中的重要步驟，凈化是指在不損失或盡可能少損失待測毒素的前提下，除去干擾雜質(zhì)的過程。由于中藥樣品基質(zhì)種類復(fù)雜及真菌毒素微量存在，樣品的凈化處理是測定真菌毒素的難點(diǎn)所在。目前常用的凈化方法主要為免疫親和柱凈化法、固相萃取柱凈化法及QuEChERS法。

1.2.1 特異性凈化方法 免疫親和層析(Immune Affinity Column，IAC)法基于抗原抗體反應(yīng)，抗體連接在免疫親和柱內(nèi)，樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)提取過濾、稀釋，濾液緩慢經(jīng)過含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱層析凈化，黃曲霉毒素交聯(lián)在層析遞質(zhì)中的抗體上。這種凈化方法特異性強(qiáng)，回收率高，操作簡便，選擇性強(qiáng)，但價(jià)格昂貴。2015版藥典規(guī)定對黃曲霉毒素的凈化采用此方法[4]。朱迪等[22，26，31，41，43]通過玻璃纖維濾紙濾過的提取液均通過免疫親和柱凈化，首先用水洗滌雜質(zhì)后甲醇洗脫真菌毒素，測定回收率均在75%～90%之間。鄭榮等[35,37]對丹參、大棗、苦杏仁、白蘇子等中藥的提取液通過免疫親和柱凈化，回收率在60%～110%之間。郝愛魚等[29]將120批中藥澄清的溶液直接使用免疫親和柱凈化，回收率為95%～110%。Katerere D R等[7]使用不同的免疫親和柱凈化AFB1、和FB1、FB2。他將濾過0.45 um的濾液通過Aflatest column免疫親和柱凈化AB1、Strong Anionic Exchange Columns凈化FB1、FB2、FB3。Ali N等[18]將助溶過濾后得到的澄清液通過免疫親和柱凈化后得到真菌提取液，通過HPLC柱后衍生測定AFB1、AFB2、AFG2 3種真菌毒素。YangYing等[34]得到供試液后直接通過免疫親和柱凈化，測定了AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、OTA 5種真菌毒素?？紫楹绲萚14]將提取液加入凈化裝置中的玻璃針筒中，使濾液以一定速率流入免疫親和柱，分別用10 mL 0.1%吐溫-20緩沖液、10 mL水淋洗后用1.0 mL甲醇洗脫、收集洗脫液，洗脫液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后得待測試液。趙淑銳等[43]將得到的提取液上A flaCLEANTM柱，直接用甲醇洗脫進(jìn)行凈化。韋日偉等[33]將過玻璃纖維的濾液通過AflaOchra免疫親和柱凈化，流速為2～3 mL/min，直至液體完全通過免疫親和柱。再分別用10 mL真菌毒素清洗緩沖液和10 mL 水淋洗免疫親和柱，最后用2 mL甲醇洗脫得黃曲霉毒素與赭曲霉毒素A。Zhang L等[11，46]等將0.45 um過濾的濾液直接通過免疫親和柱凈化，測得AFB1、B2、G1、G2 4種黃曲霉素，回收率均在80%～95%之間。曹紀(jì)亮等[31]對下文提到的不同種類的固相萃取柱進(jìn)行了考察，包括Waters Oasis HLB柱、Agilent SampliQ C18柱、TC-M160 PuriToxSR多功能凈化柱以及VicamAflaTest黃曲霉毒素免疫親和柱，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，前3種方法對鴉膽子的凈化效果均不理想，檢測時(shí)色譜圖中雜質(zhì)峰較多，對黃曲霉毒素的檢測干擾嚴(yán)重，而免疫親和柱對黃曲霉毒素有很好的選擇性，能較好的去除基質(zhì)中的干擾成分，適用于鴉膽子中黃曲霉毒素檢測的樣品凈化要求，并測定4種黃曲霉毒素和一種赭曲霉毒素。付成平等[19]將直接離心得的上清液通過免疫親和柱，以20 mL 0.1%吐溫-20/PBS溶液分2次洗柱(流速為1～2 mL/min)，再以20 mL重蒸水分2次洗柱，棄去全部流出液，并使2～3 mL空氣通過柱體,最后以1.0 mL色譜級甲醇洗脫,流速為1～2 mL/min。胡一晨等[25]比較了硅膠、中性氧化鋁、硅藻土自制固相萃取柱和免疫親和柱對黃曲霉毒素的凈化效果，通過HPLC-ESI-Q-TOF-MS測定并選擇免疫親和柱凈作為凈化方式。Wei R等[33]考察Aflaochra HPLC柱和免疫親和柱的凈化效果，并對比了直接用20 mL水沖洗，10 mL水淋洗后磷酸緩沖液沖洗和10 mL水淋洗后吐溫20沖洗對AFB1、B2、G1、G2、OTA回收率的影響，發(fā)現(xiàn)只有用免疫親和柱中第3種沖洗方式較好。Yue Y T等[44]比較了硅酸鎂載體、Mycosep225、Bond ElutMycotoxin、DON免疫親和柱對DON的凈化效果，發(fā)現(xiàn)除了免疫親和柱其他的萃取柱凈化后檢測對DON影響較大。Kong W J等[27]考察了Agilent SampliQ C18-SPE柱、Romer Mycosep226柱、Sepax universal柱、WatersHLB柱、Bond ElutMycotoxin-SPE柱、MF160柱、AflaZearalTestTM免疫親和柱和自制硅膠柱對薏苡仁中AFG2、AFG1、AFB2、AFB1、β-ZOL、α-ZOL、ZON的凈化效果，發(fā)現(xiàn)只有免疫親和柱可以達(dá)到要求回收率。

1.2.2 非特異性凈化方法

1.2.2.1 固相萃取柱凈化法 固相萃取柱(Solid Phase Extraction，SPE)凈化法利用了選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理。較常用的方法是使液體樣品溶液通過吸附劑，保留其中被測物質(zhì)，再選用適當(dāng)強(qiáng)度溶劑沖去雜質(zhì)，然后用少量溶劑迅速洗脫被測物質(zhì)，從而達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的。也可選擇性吸附干擾雜質(zhì)，而讓被測物質(zhì)流出；或同時(shí)吸附雜質(zhì)和被測物質(zhì)，再使用合適的溶劑選擇性洗脫被測物質(zhì)。SPE分為正相、反相、混合型色譜柱。下文提到C-18柱、Mycosep226柱等為反相色譜柱，硅膠、氧化鋁柱為正相色譜柱，還有混合填料色譜柱等。這種方法缺乏專一性，凈化痕量黃曲霉不夠充分。陳重均[20]比較了Waters 226柱和HLB柱對不同真菌毒素的回收率，發(fā)現(xiàn)Waters 226對OTA、MPA回收率極差，故選擇Waters 226為黃芪真菌毒素的凈化方式。李俊媛[47]對安捷倫，Varian公司的Bond ElutMycotoxin-SPE柱、MF 160和CleanertPestiCarb-SPE小柱5種己商品化的固相萃取小柱，按相關(guān)文獻(xiàn)中的制備方法處理樣品,經(jīng)HPLC-FLD檢測,考察凈化效果，發(fā)現(xiàn)前3種小柱處理后的供試品雜質(zhì)峰多，影響目標(biāo)物的檢出，無法達(dá)到理想的凈化效果，對于薏苡仁樣品不適用；后2種小柱的凈化效果較好。MF160小柱是Mycosep226柱的改進(jìn)型，凈化效果較好，沒有雜質(zhì)影響ZON、α-ZOL、β-ZOL的檢測，但其價(jià)格較貴，與免疫親和柱同價(jià)，故其選擇CleanertPestiCarb-SPE對真菌毒素進(jìn)行優(yōu)化，雖對β-ZOL凈化有影響，但對ZON、α-ZOL無影響，且價(jià)格便宜。林方芬等[16]比較了SPE柱、HLB、免疫親和柱和石墨吸附柱對4種黃曲霉的凈化能力后，選擇了石墨吸附柱作為凈化方式，通過檢測得4種AF類真菌毒素的回收率在74.0%～102.7%之間。曹紀(jì)亮等[33]通過檢測發(fā)現(xiàn)赭曲霉毒素對中藥污染較為嚴(yán)重，所以對赭曲霉建立了新的凈化方法，取AFFINIMIP SPE Ochratoxin A柱，依次用5 mL乙腈和5 mL純水活化，將供試液上柱后用5 mL乙腈-0.1M HC1(40/60，v/v)淋洗柱子，最后用2 mL乙酸-甲醇(2/98,v/v)洗脫得赭曲霉毒素。Han Z等[9]考察了硅膠、硅酸鎂載體、硅藻土3種吸附劑各自及混合對DON、3-ADON、15-ADON、NIV和Fus X的凈化效果，發(fā)現(xiàn)3種混合對這5種真菌毒素的凈化效果較好，選擇用3種混合自制固相萃取柱作為其凈化方式。Liu X等[10]比較了MultiSep 211 Fum柱和Oasis HLB SPE柱對FB1、FB2、FB3凈化后的回收率，選擇MultiSep 211 Fum柱為其凈化方式。韓錚等[6]用硅膠、氧化鋁、硅藻土、弗羅里硅土等常用的正相凈化填料研制了一種新型復(fù)合萃取柱，將其應(yīng)用到不同種類的中藥材基質(zhì)(如種子果實(shí)類、花類、根莖類和葉全草類)中。王珂等[38]比較了QuECHERS方法、C18小柱凈化法和多功能凈化柱(Mycosep 226)對7種真菌毒素的凈化，選擇Mycosep 226作為最終凈化方式，得到的回收率在70%～120%之間。

1.2.2.2 QuEChERS法 QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)法原理與高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)和固相萃取(Solid Phase Extraction，SPE)相似，都是利用吸附劑填料與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達(dá)到除雜凈化的目的。主要用于真菌毒素，農(nóng)殘檢測等痕量檢測中。QuEChERS方法回收率較高，精確度和準(zhǔn)確度高，可分析的真菌范圍廣，分析速度快溶劑使用量少，污染小，價(jià)格低廉且不使用含氯化物溶劑，操作簡便，且裝置簡單，但其去除雜質(zhì)的效果較差，需要進(jìn)一步優(yōu)化。步驟可以簡單歸納為：1)樣品粉碎；2)單一溶劑乙腈提取分離；3)加入MgSO4等鹽類除水；4)上清液進(jìn)行GC-MS、LC-MS檢測。Arroyo-Manzanares N等[12]將水飛薊研磨，加入磷酸緩沖鹽、5%甲酸乙腈渦旋后分別加入4 g硫酸鎂，1 g氯化鈉，1 g檸檬酸三鈉，0.5 g檸檬酸二鈉提取AF類、NIV、DON、FB1、FB2、OTA、T-2、HT-2、STE、CIT和ZEN等真菌毒素。李春等[35]先將何首烏粉末中加入水、1%乙酸乙腈溶液渦旋后再加入4種固體試劑，超聲，選用液質(zhì)聯(lián)用MRM檢測到AF類4種，OT類2種、FB類2種、DON、HT-2、T-2等12種真菌毒素?？梢娺@種方法為提取與凈化同時(shí)進(jìn)行，節(jié)省時(shí)間。

2 小結(jié)

通過上述對提取方法的綜述，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)研究者提取真菌毒素選擇60%～90%的甲醇水或乙腈水，但由于FB極性較大，OTA極性較小，有研究選擇50%甲醇水或乙腈水提取FB，乙酸乙酯提取OTA。由于中藥基質(zhì)和真菌毒素本身結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，為了提高真菌毒素的提取率，還可選擇加入氯化鈉等固體試劑、調(diào)節(jié)溶液酸堿性、加入吐溫試劑助溶等不同的處理方法。當(dāng)然，除了考慮如何選擇提取溶劑外，提取方法對不同中藥基質(zhì)真菌度素的提取也有影響，如Zhao S等[45]將中藥按其富含基質(zhì)分類為脂肪油、揮發(fā)油、蛋白質(zhì)和生物堿，并比較了超聲、振蕩、均質(zhì)3種提取方法對不同基質(zhì)中藥的提取率，發(fā)現(xiàn)富含脂肪油的中藥適合均質(zhì)提取，富含揮發(fā)油和蛋白質(zhì)的重要適合超聲提取，富含生物堿的重要適合振蕩提取。

中藥真菌毒素的凈化方法主要為免疫親和柱法、固相萃取柱法及QuEChERS法，其中免疫親和柱法特異性強(qiáng)，凈化效果好，應(yīng)用最為廣泛，但其價(jià)格昂貴。故固相萃取柱和QuEChERS凈化方法是目前研究者選擇較多的方法，并且對這2種方法不斷優(yōu)化以使其對真菌的凈化效果達(dá)到要求。除了以上3種凈化方法外，基質(zhì)固相分散、分子印跡固相萃取等凈化方法已經(jīng)應(yīng)用到食品真菌毒素凈化中[5]但還未應(yīng)用到中藥材的凈化中。因此，中藥真菌毒素的凈化處理還需進(jìn)一步分析研究，并且將食品真菌毒素中已有的前處理充分的引入到中藥中來，并建設(shè)中藥特有的處理方法。

3 討論

我國傳統(tǒng)中藥在一定程度上受到了不同真菌毒素的污染，這些污染直接影響到人類健康。為了控制和監(jiān)測真菌毒素的污染，真菌毒素前處理技術(shù)需要不斷提高。中藥基質(zhì)的復(fù)雜性對真菌毒素的前處理影響很大，故針對不同基質(zhì)中藥真菌毒素提出不同的前處理方法極為重要?，F(xiàn)已有有研究表明[6,20]，不同的中藥材基質(zhì)對真菌毒素的干擾強(qiáng)度不同，其中花類中藥的基質(zhì)效應(yīng)小，而根莖類的基質(zhì)效應(yīng)較大。但如今大部分文獻(xiàn)中，大批的中藥材使用同樣的方法同時(shí)提取多種真菌毒素檢測，而只有極少文獻(xiàn)對中藥按基質(zhì)不同進(jìn)行分類，并且按基質(zhì)效應(yīng)的不同選擇合適的提取方法。已有研究中已經(jīng)證明不同濃度的甲醇對花類、種子類、全草類等不同基質(zhì)中藥的提取效果不同[45]，發(fā)現(xiàn)不同基質(zhì)的中藥所需要的最佳提取溶劑濃度是不同的，且不同的提取方法也對不同基質(zhì)的中藥材的真菌毒素有一定影響。因此在以后的研究中，需對中藥按不同基質(zhì)分類進(jìn)行不同方法的提取方法進(jìn)行設(shè)計(jì)。同樣，不同的凈化方法對不同基質(zhì)的中藥真菌毒素凈化效果也是不同的，如韓錚等[6]運(yùn)用自制凈化柱對不同基質(zhì)的中藥真菌毒素凈化，發(fā)現(xiàn)雖然凈化柱對花類、種子果實(shí)類等都有凈化效果，但都不及對根莖類的凈化效果好。因此，在研究中還需對不同基質(zhì)的中藥選擇不同的凈化柱，以保證凈化效果。