陳瑞，張麗，蔡進(jìn)，朱高峰1，，湯磊1，，黃靜#

（1.貴州省化學(xué)合成藥物研發(fā)利用工程技術(shù)研究中心，貴陽 550004；2.貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴陽 550004）

胰島素增敏劑是一類針對(duì)胰島素抵抗的2型糖尿病的治療藥物，也是目前降糖藥研發(fā)的熱點(diǎn)之一[1]。腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）是一種重要的代謝應(yīng)激蛋白激酶，在調(diào)節(jié)代謝和能量平衡特別是在胰島素抵抗發(fā)生過程中發(fā)揮著重要的作用[2-3]。本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)一系列四氫咔唑類化合物具有明顯的降糖作用，其中的代表性化合物ZG02[6-芐氧基-9-（4-氯甲苯酰基）-四氫化咔唑-3-羧酸，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1]具有較好的胰島素增敏活性，可通過激活A(yù)MPK途徑來降低db/db小鼠的血糖和胰島素水平[4]；同時(shí)，ZG02在體內(nèi)活性測試中并未表現(xiàn)出羅格列酮樣體質(zhì)量增加等不良反應(yīng)[5]，是一種極具開發(fā)價(jià)值和應(yīng)用前景的化合物。

圖1 ZG02的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig 1 Chemical structure of ZG02

與體內(nèi)代謝研究不同，體外代謝研究可在新藥研發(fā)早期利用體外代謝參數(shù)合理預(yù)測候選化合物的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為，指導(dǎo)其后期藥效學(xué)、藥動(dòng)學(xué)研究以及安全性評(píng)價(jià)模型的選擇，有助于縮小體內(nèi)研究的篩選范圍[6-7]?；衔锎x穩(wěn)定性差意味著其在體內(nèi)較易被代謝，往往導(dǎo)致不良的藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)，如體內(nèi)生物利用度低、作用時(shí)間短等[8]。藥物代謝可分為Ⅰ相和Ⅱ相：Ⅰ相代謝最重要的酶系為細(xì)胞色素P450（CYP），該酶系包含兩個(gè)重要的蛋白組分，即含鐵血紅素蛋白和黃素蛋白，后者能將還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（即還原型輔酶Ⅱ，NADPH）的電子轉(zhuǎn)移至CYP-底物復(fù)合體上，完成藥物的氧化、還原反應(yīng)[9-11]；Ⅱ相代謝的結(jié)合代謝酶為尿苷二磷酸（UDP）-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UGT），其中UGT是一類位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的超家族代謝酶，也是Ⅱ相代謝過程中的主要酶系，可以將尿苷二磷酸葡萄糖醛酸（UDPGA）上的葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移至內(nèi)源性或外源性化合物上，完成藥物的葡萄糖醛酸化結(jié)合反應(yīng)[12-13]。為初步預(yù)測ZG02在大鼠體內(nèi)的代謝情況，本研究以超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）為檢測手段，對(duì)ZG02在大鼠肝微粒體孵育體系（包括Ⅰ相、Ⅱ相及兩相孵育體系）中的體外代謝特征進(jìn)行分析，以期為其體內(nèi)消除規(guī)律研究、代謝產(chǎn)物確證以及藥物應(yīng)用等提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Xevo G2-XS型超高效液相色譜-四級(jí)桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（UPLC-QTOF-MS），配有MassLynx V4.1質(zhì)譜工作站、UNIFI 7.0數(shù)據(jù)庫（美國Waters公司）；JN300-2型氮?dú)獯祾邇x（蘇州吉米諾儀器有限公司）；X1型高速離心機(jī)（香港基因有限公司）；KH-600E型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；FA805N型十萬分之一電子天平（上海菁海儀器有限公司）；DW-86L486型超低溫冰箱（青島海爾股份有限公司）。

1.2 藥品與試劑

ZG02對(duì)照品[貴州醫(yī)科大學(xué)藥物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室制備，純度：＞98%]；吲哚美辛對(duì)照品（內(nèi)標(biāo)，批號(hào)：J0526A5，純度：＞98%）、雄性SD大鼠肝微粒體（批號(hào)：J0202A）均購自大連美侖生物技術(shù)有限公司；葡萄糖-6-磷酸二鈉（G-6-P-Na2，批號(hào)：116B039）、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G-6-P-DH，批號(hào)：20160725）、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二鈉（NADP-Na2，批號(hào)：718B0225）均購自北京索萊寶科技有限公司；UDPGA（美國Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：SLBT1945）；1，4-單內(nèi)酯（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：S10M8I31074）；丙甲菌素（加拿大Toronto Research Chemicals公司，批號(hào)：8-JIN-165-1；臨用前用適量二甲基亞砜溶解，再用水稀釋至相應(yīng)濃度）；甲酸、甲醇、乙腈均為色譜純，氯化鎂、檸檬酸鈉等均為分析純，水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 待測物和內(nèi)標(biāo)溶液 精密稱取ZG02對(duì)照品適量，用甲醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為20 mg/L的ZG02貯備液；同法配制質(zhì)量濃度為10 mg/L的內(nèi)標(biāo)貯備液；上述溶液均置于4℃冰箱中保存，備用。臨用前，將ZG02貯備液用適量甲醇稀釋后，再以磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4，下同）稀釋至孵育濃度，并確保孵育體系中甲醇的含量不超過1%[14]；將內(nèi)標(biāo)貯備液用甲醇稀釋，得質(zhì)量濃度為100 μg/L的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.1.2 NADPH輔酶溶液 A液：依次取NADP-Na2200 mg、G-6-P-Na2200 mg、氯化鎂133 mg，用水溶解并定容至10 mL，于－20℃保存。B液：依次取檸檬酸鈉44 mg、G-6-P-DH 1 000 U，用水溶解并定容至25 mL，于－20℃保存。臨用前，取A、B液按體積比5∶1混勻，得濃度為1 mmol/L（按反應(yīng)產(chǎn)物NADPH計(jì)）的NADPH輔酶溶液[15]。

2.1.3 UDPGA輔酶溶液 精密稱取UDPGA適量，臨用前用水溶解并定容，配制成濃度為5 mmol/L的UDPGA輔酶溶液。

2.2 體外孵育體系的建立

2.2.1 由NADPH啟動(dòng)的Ⅰ相孵育體系 取大鼠肝微粒體適量，用PBS稀釋至0.5 g/L，隨后加入“2.1.1”項(xiàng)下經(jīng)稀釋的ZG02貯備液適量，使ZG02的最終質(zhì)量濃度為100 μg/L。將上述溶液置于37℃水浴中靜置5 min后，加入“2.1.2”項(xiàng)下NADPH輔酶溶液30 μL以啟動(dòng)反應(yīng)。該體系總體積為200 μL，有機(jī)溶劑的含量不得超過5%。

2.2.2 由UDPGA啟動(dòng)的Ⅱ相孵育體系 取大鼠肝微粒體適量，用PBS稀釋至0.5 g/L，加入丙甲菌素[0.025 g/L（最終質(zhì)量濃度，下同）]，混勻，于冰浴中孵育15 min；隨后加入1，4-單內(nèi)酯（5 mmol/L）、氯化鎂（5 mmol/L）以及“2.1.1”項(xiàng)下經(jīng)稀釋的ZG02貯備液適量，使ZG02的最終質(zhì)量濃度為100 μg/L。將上述溶液置于37℃水浴中靜置5 min后，加入“2.1.3”項(xiàng)下UDPGA輔酶溶液30 μL以啟動(dòng)反應(yīng)。該體系總體積為200 μL，有機(jī)溶劑的含量不得超過5%。

2.2.3 由NADPH和UDPGA聯(lián)合啟動(dòng)的兩相孵育體系 取大鼠肝微粒體適量，用PBS稀釋至0.5 g/L，加入丙甲菌素（0.025 g/L），混勻，于冰浴中孵育15 min；隨后加入1，4-單內(nèi)酯（5 mmol/L）、氯化鎂（5 mmol/L）以及“2.1.1”項(xiàng)下經(jīng)稀釋的ZG02貯備液適量，使ZG02的最終質(zhì)量濃度為100 μg/L。將上述溶液置于37℃水浴中靜置5 min后，加入“2.1.2”項(xiàng)下NADPH輔酶溶液和“2.1.3”項(xiàng)下UDPGA輔酶溶液30 μL以啟動(dòng)反應(yīng)。該體系總體積為200 μL，有機(jī)溶劑的含量不得超過5%。

2.2.4 大鼠肝微粒體孵育及樣品處理 取“2.2.1”“2.2.2”“2.2.3”項(xiàng)下經(jīng)啟動(dòng)的孵育體系各適量，置于37 ℃水浴中，分別于孵育0、5、10、15、20、30、45 min時(shí)加入含內(nèi)標(biāo)100 μg/L的乙腈溶液400 μL終止反應(yīng)，渦旋混勻30 s后，于4℃下以16 000×g離心10 min；取上清液以氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)眉状紡?fù)溶，以16 000×g離心10 min；取上清液適量進(jìn)行UPLC-MS/MS分析，考察各時(shí)間點(diǎn)孵育體系中ZG02的質(zhì)量濃度。各孵育體系均平行操作3次。

2.3 UPLC-MS/MS方法學(xué)考察

2.3.1 色譜與質(zhì)譜條件 色譜柱：Waters BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；保護(hù)柱：Waters VanGuard BEH C18（5 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：水（含0.01%甲酸）-乙腈（含0.01%甲酸）（35∶65，V/V）；流速：0.4 mL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：2 μL；采集時(shí)間：3 min。離子源：電噴霧離子源（ESI）；以多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式進(jìn)行負(fù)離子掃描；毛細(xì)管電壓：1.5 kV；錐孔電壓：30 V；離子源溫度：100℃；脫溶劑氣溫度：300℃；錐孔氣流速：50 L/h；脫溶劑氣流速：600 L/h；掃描范圍：m/z50～1 000；二級(jí)碰撞能量：16.5 eV；用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z458.115 9→323.073 0（ZG02）、m/z356.069 0→312.080 4（內(nèi)標(biāo)）。ZG02和內(nèi)標(biāo)的二級(jí)質(zhì)譜圖見圖2。

2.3.2 專屬性 取空白孵育樣品（即“2.2.3”項(xiàng)下不含ZG02的兩相孵育體系）、ZG02對(duì)照樣品（即“2.2.3”項(xiàng)下含ZG02的兩相孵育體系）、肝微粒體孵育樣品[即“2.2.3”項(xiàng)下含ZG02兩相孵育體系按“2.2.4”項(xiàng)下方法處理后（孵育30 min時(shí)）所得樣品]各適量，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖3。結(jié)果，內(nèi)標(biāo)和ZG02的峰形均良好，保留時(shí)間分別為0.70、1.57 min，孵育體系中的內(nèi)源性物質(zhì)并未干擾待測物的測定，提示本方法的專屬性良好。

圖2 ZG02和內(nèi)標(biāo)的二級(jí)質(zhì)譜圖Fig 2 Secondary mass spectrums of ZG02 and internal standard

圖3 典型MRM圖Fig 3 Typical MRM chromatograms

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、定量下限及最低檢測限的考察 取“2.1.1”項(xiàng)下ZG02貯備液適量，分別用PBS稀釋成質(zhì)量濃度為10、20、50、200、500、1 000、2 000、4 000 μg/L的系列對(duì)照品溶液。精密量取上述系列對(duì)照品溶液各適量，加至“2.2.3”項(xiàng)下經(jīng)甲醇滅活的大鼠肝微粒體兩相孵育體系（200 μL）中，配制成ZG02質(zhì)量濃度分別為1、2、5、20、50、100、200、400 μg/L的系列樣品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下方法孵育2 h后，再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以待測物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（y）為縱坐標(biāo)、待測物質(zhì)量濃度（c，μg/L）為橫坐標(biāo)，采用加權(quán)最小二乘法（權(quán)重系數(shù)為1/c2）進(jìn)行線性回歸。另同法配制并處理得質(zhì)量濃度分別為1、0.5、0.25 μg/L的樣品溶液，考察定量下限（信噪比為10∶1）和最低檢測限（信噪比為3∶1）。結(jié)果，回歸方程為y＝0.097 2c+0.002 7（r2＝0.999 2），ZG02檢測質(zhì)量濃度線性范圍為1～400 μg/L，定量下限為1 μg/L，最低檢測限為0.25 μg/L。

2.3.4 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn) 按“2.3.3”項(xiàng)下方法配制ZG02低、中、高質(zhì)量濃度（2、100、200 μg/L）的質(zhì)控樣品各5份，按“2.2.4”項(xiàng)下方法孵育2 h后，進(jìn)樣分析，考察日內(nèi)精密度；連續(xù)測定3 d，考察日間精密度。將實(shí)測質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度進(jìn)行比較，考察準(zhǔn)確度。結(jié)果，各質(zhì)控樣品的日內(nèi)、日間RSD均小于10%，準(zhǔn)確度為87.26%～94.58%，詳見表1。

表1 精密度、準(zhǔn)確度及穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of accuracy，precision and stability tests

2.3.5 提取回收率及基質(zhì)效應(yīng)考察 按“2.3.3”項(xiàng)下方法配制ZG02低、中、高質(zhì)量濃度（2、100、200 μg/L）的質(zhì)控樣品各5份，按“2.2.4”項(xiàng)下方法孵育2 h后，進(jìn)樣分析，得色譜峰峰面積（A1）。取“2.2.3”項(xiàng)下兩相孵育體系適量，按“2.2.4”項(xiàng)下方法孵育2 h后，加入ZG02對(duì)照品溶液適量，使最終質(zhì)量濃度與質(zhì)控樣品對(duì)應(yīng)，進(jìn)樣分析，得色譜峰峰面積（A2）。以甲醇配制對(duì)應(yīng)質(zhì)量濃度的ZG02樣品，按“2.2.4”項(xiàng)下方法孵育2 h后，進(jìn)樣分析，得色譜峰峰面積（A3）。每個(gè)質(zhì)量濃度平行操作5次。提取回收率＝A1/A2×100%，基質(zhì)效應(yīng)＝A2/A3×100%。結(jié)果，低、中、高質(zhì)量濃度質(zhì)控樣品和內(nèi)標(biāo)的提取回收率分別為（82.86±3.23）%、（88.87±4.79）%、（81.13±8.28）%、（87.28±6.29）%，RSD分別為4.01%、5.39%、10.21%、7.16%（n＝5）；基質(zhì)效應(yīng)分別為（84.22±3.58）%、（88.72±5.22）%、（93.56±4.28）%、（93.81±5.06）%，RSD分別為4.25%、5.88%、4.57%、5.39%（n＝5），表明提取方法和基質(zhì)效應(yīng)均不會(huì)影響ZG02質(zhì)量濃度的測定。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.3.3”項(xiàng)下方法配制ZG02低、中、高質(zhì)量濃度（2、100、200 μg/L）的質(zhì)控樣品各5份，按“2.2.4”項(xiàng)下孵育2 h后，考察其在室溫下放置12 h的穩(wěn)定性（以實(shí)測質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度的比值即回收率表示）。結(jié)果，各質(zhì)控樣品回收率的RSD均小于10%（n＝5），表明其在室溫下放置12 h穩(wěn)定，詳見表1。

2.4 ZG02體外代謝穩(wěn)定性研究

按“2.2.4”項(xiàng)下方法進(jìn)行體外代謝穩(wěn)定性研究，采用底物消除法考察ZG02的代謝情況。以孵育0 min時(shí)ZG02的質(zhì)量濃度為參照，其他時(shí)間點(diǎn)的質(zhì)量濃度與之相比計(jì)算其藥物剩余百分比，采用GraphPad Prism 7.0軟件繪制ZG02在3種孵育體系中的藥物剩余百分比-時(shí)間曲線，詳見圖4。由圖4可見，ZG02在Ⅰ相孵育體系中代謝較慢，而在兩相孵育體系中代謝較快。

將各時(shí)間點(diǎn)的藥物剩余百分比的自然對(duì)數(shù)對(duì)孵育時(shí)間作線性回歸，得斜率k，并以此計(jì)算ZG02的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)[包括半衰期（t1/2）和清除率（CLint）]和各代謝酶的貢獻(xiàn)率（F）。其中，t1/2＝－0.693/k，CLint＝[（0.693/t1/2）×孵育體系體積（μL）]/肝微粒體質(zhì)量（mg）[14]；FⅠ相＝CLint（Ⅰ相）/CLint（兩相）×100%，F(xiàn)Ⅱ相＝CLint（Ⅱ相）/CLint（兩相）×100%。以t1/2評(píng)估代謝穩(wěn)定性：t1/2＜30 min，為代謝不穩(wěn)定；30 min≤t1/2≤90 min，為代謝穩(wěn)定性中等；t1/2＞90 min，為代謝穩(wěn)定[15]，結(jié)果詳見表2。

圖4 ZG02在大鼠肝微粒體不同孵育體系中的藥物剩余百分比-時(shí)間曲線Fig 4 Residual percentage-time curves of ZG02 in liver microsomes of rats in different incubation systems

表2 ZG02在大鼠肝微粒體不同孵育體系中的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)Tab 2 Enzyme kinetic parameters of ZG02 in liver microsomes of rats in different incubation systems

由表2可見，孵育45 min時(shí)，在NADPH啟動(dòng)的Ⅰ相孵育體系和UDPGA啟動(dòng)的Ⅱ相孵育體系中，ZG02的剩余百分比分別為（73.33±1.53）%、（50.63±3.42）%，t1/2分別為67.28、30.26 min，表明其在單相孵育體系中的代謝穩(wěn)定性中等，且在Ⅱ相中的代謝穩(wěn)定性較Ⅰ相差；在NADPH和UDPGA聯(lián)合啟動(dòng)的兩相孵育體系中，ZG02的剩余百分比為（45.81±2.56）%，t1/2為25.57 min，提示其在兩相孵育體系中的代謝穩(wěn)定性差。

另外，F(xiàn)值的分析結(jié)果顯示，CYP酶（Ⅰ相代謝酶）、UGT酶（Ⅱ相代謝酶）的F值分別為38.01%、84.50%，后者的F值更大，提示ZG02在大鼠肝微粒體中的代謝反應(yīng)可能以UGT酶介導(dǎo)的葡萄糖醛酸化結(jié)合反應(yīng)為主。

3 討論

與體內(nèi)代謝穩(wěn)定性研究相比，藥物體外代謝穩(wěn)定性研究可排除體內(nèi)諸多干擾因素（如磷脂、脂肪酸、尿素等）的影響，有助于更直接地觀察藥物的代謝特征，具有省時(shí)、穩(wěn)定、高效的特點(diǎn)，適用于體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化率低且缺乏高靈敏度檢測方法的藥物，亦可用于候選化合物的高通量篩選[6-7，14]。但現(xiàn)有藥物體外代謝穩(wěn)定性研究多集中在CYP酶介導(dǎo)的Ⅰ相代謝上，而對(duì)UGT酶介導(dǎo)的Ⅱ相代謝相關(guān)研究較少[16]。為此，本研究分別以NADPH啟動(dòng)的Ⅰ相孵育體系、UDPGA啟動(dòng)的Ⅱ相孵育體系、二者共同啟動(dòng)的兩相孵育體系為介質(zhì)，借助UPLC-MS/MS法考察了新型胰島素增敏劑ZG02的體外代謝穩(wěn)定性。

3.1 Ⅱ相孵育體系的建立

經(jīng)正常離心后得到的微粒體有部分為微粒體小囊泡，UGT酶的活性位點(diǎn)被封閉在其中，因此需要將其與適量的丙甲菌素混合，并通過在冰浴中孵育（15 min）來為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜“打孔”，以釋放肝微粒體中的UGT酶[14]。

3.2 UPLC-MS/MS法的條件篩選

本研究在前期預(yù)試驗(yàn)中考察了水-甲醇、水-乙腈、水（含甲酸）-甲醇、水（含甲酸）-乙腈、水（含甲酸）-甲醇（含甲酸）、水（含甲酸）-乙腈（含甲酸）等流動(dòng)相體系對(duì)ZG02定量分析的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)以水（含0.01%甲酸）-乙腈（含0.01%甲酸）（35∶65，V/V）為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫時(shí)，ZG02和內(nèi)標(biāo)的色譜峰峰形均良好，且不受內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，同時(shí)分析時(shí)間較短，故最終選擇其作為定量分析的流動(dòng)相體系。

3.3 孵育體系中藥物質(zhì)量濃度的確定

底物消除法是一種常用的檢測藥物代謝酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法[17]。由于本課題組暫未能確證ZG02的代謝產(chǎn)物，故采用底物消除法來評(píng)估該化合物的體外代謝情況。為了能夠排除系統(tǒng)誤差的干擾以準(zhǔn)確檢測ZG02的代謝情況，本課題組在預(yù)試驗(yàn)中對(duì)孵育體系中的藥物質(zhì)量濃度（25、100、1 000 μg/L）進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)ZG02的質(zhì)量濃度為100 μg/L時(shí)，孵育后剩余藥物質(zhì)量濃度并不算太高，且至少有20%的藥物被清除[15]，故以此作為孵育體系中ZG02的質(zhì)量濃度。

3.4 ZG02在大鼠肝微粒體中的代謝特征分析

本研究結(jié)果顯示，在NADPH啟動(dòng)的Ⅰ相孵育體系、UDPGA啟動(dòng)的Ⅱ相孵育體系、二者共同啟動(dòng)的兩相孵育體系中，ZG02 的t1/2分別為 67.28、30.26、25.57 min，CLint分別為20.60、45.80、54.20 μL/（mg·min）。這提示在3種孵育體系中，ZG02的代謝穩(wěn)定性依次為Ⅰ相＞Ⅱ相＞兩相。CYP酶及UGT酶的F值分別為38.01%、84.50%。這提示ZG02在大鼠肝微粒體中的代謝反應(yīng)可能以UGT酶介導(dǎo)的葡萄糖醛酸化結(jié)合反應(yīng)為主。

綜上所述，本研究建立的UPLC-MS/MS法簡便、快速、專屬性強(qiáng)，可用于大鼠肝微粒體孵育體系中ZG02質(zhì)量濃度的測定及其體外代謝穩(wěn)定性的研究。新型胰島素增敏劑ZG02在NADPH和UDPGA聯(lián)合啟動(dòng)的兩相孵育體系中的代謝穩(wěn)定性較差，且代謝反應(yīng)可能以UGT酶介導(dǎo)的葡萄糖醛酸化結(jié)合反應(yīng)為主。后續(xù)本課題組將借助高分辨質(zhì)譜、波譜等手段確證ZG02的代謝產(chǎn)物，并結(jié)合體內(nèi)外研究進(jìn)一步闡明其代謝過程及特征，以期為其開發(fā)利用提供更多的參考。