■鮑 坤 王凱英 王曉旭 劉晗璐 李光玉

（中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所特種經(jīng)濟動物分子生物學國家重點實驗室，吉林長春130112）

維生素E（VE）和硒（Se）均是動物機體所必需的營養(yǎng)因子，兩者在動物生長發(fā)育、免疫和抗氧化方面具有協(xié)同、互補和增效作用。VE 作為防止過氧化物生成的第一道防線，在細胞外起抗氧化作用；而含Se的谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）作為第二道防線，在細胞內(nèi)發(fā)揮作用。兩者均有抗氧化和提高機體免疫力的重要生理功能，可在一定條件下相互替代（許友卿等，2012）[1]。

目前關(guān)于梅花鹿日糧硒和維生素E添加量的研究國內(nèi)外未見報道，本試驗通過不同水平硒和維生素E添加，通過對梅花鹿飼料營養(yǎng)物質(zhì)消化率、硒元素留存情況及血液生化指標影響的研究，探討梅花鹿日糧適宜的硒元素及VE的添加量，為全混合日糧（TMR）飼養(yǎng)技術(shù)在梅花鹿養(yǎng)殖中的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

試驗于2015 年5 月12 日至7 月22 日，在中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所茸鹿試驗基地進行。

1.1 試驗動物、日糧及試驗設(shè)計

試驗選用28頭1歲雌性梅花鹿。試驗開始前，試驗動物進行為期7 d 的預飼期，飼喂無添加的基礎(chǔ)日糧。在7 d預飼期后，選擇出生日期相近、體重相近的鹿以3×2+1 因子的處理方式被隨機分成7 個處理組（每組4 頭）。其中硒3 個水平(0.2、0.3、0.4 mg/kg)，維生素E兩個水平（100和200 IU/kg)，具體處理如下：①基礎(chǔ)日糧不添加硒和維生素E(包含0.05 mg Se/kg;G0)；②基礎(chǔ)日糧+0.2 mg Se/kg 和100 IU/kg VE，G1；③基礎(chǔ)日糧+0.2 mg Se/kg 和200 IU/kg VE，G2；④基礎(chǔ)日糧+0.3 mg Se/kg 和100 IU/kg VE，G3；⑤基礎(chǔ)日糧+0.3mg Se/kg 和200 IU/kg VE，G4；⑥基礎(chǔ)日糧+0.4 mg Se/kg 和100 IU/kg VE，G5)；⑦基礎(chǔ)日糧+0.4 mg Se/kg 和200 IU/kg VE，G6。飼料級亞硒酸鈉購于上海綠源精細化工廠，硒含量為1%，飼料級維生素E 購于浙江新和成股份有限公司，VE 含量為50%。試驗日糧為全價顆粒料，亞硒酸鈉及維生素E均于加工過程中添加。日糧組成及營養(yǎng)成分見表1，硒及維生素E添加量見表2。

1.2 飼養(yǎng)管理

在整個試驗期內(nèi)，試驗鹿被飼養(yǎng)在10 m×20 m的鹿圈內(nèi)，由固定人員飼喂，消除外界環(huán)境和管理不同對鹿產(chǎn)生的應激影響。試驗鹿每日06：00、16：00 各飼喂一次，自由采食和飲水，其他均按照常規(guī)飼養(yǎng)管理方法進行。定時清理鹿糞，清掃鹿圈，保持適宜的飼養(yǎng)環(huán)境。

1.3 糞樣采集及分析

預飼期7 d，試驗持續(xù)60 d，試驗期結(jié)束最后4 d進行消化試驗。每天早上06:00按部分收糞法在鹿圈中多個點收集當天部分新鮮糞樣，采集完的糞樣用10%的稀硫酸固氮，然后在65 ℃下烘干，粉碎后過40 目篩備用。糞樣的收集嚴格避免鹿毛、沙粒等污染，以免影響到測定結(jié)果精確度。主要營養(yǎng)物質(zhì)含量的測定，參考《飼料分析與飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》（張麗英，2003）[2]，各營養(yǎng)物質(zhì)消化率采用2 N 鹽酸不溶性灰分法進行測定，具體步驟參照《家畜飼養(yǎng)試驗指導》（楊勝主編，1990）[3]。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

表2 試驗設(shè)計

1.4 血樣的采集及測定

在進行消化代謝試驗的前1 d，于早飼前頸靜脈采血10 ml。其中2 ml 全血樣本用于硒元素的檢測，其余血液樣品在凝血后3 500 r/min離心10 min，分離血清樣品，分裝于Eppendorf 管中于-20 ℃冰柜保存?zhèn)溆?。血液指標用試劑盒測定，試劑盒購于南京建成生物工程研究所，按照說明書操作測定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SAS 9.1進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著性采用Duncan's 法進行多重比較，再采用GLM程序?qū)?shù)據(jù)進行多因子統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以“平均值±標準差”表示，其中P＞0.05為差異不顯著，0.01＜P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 硒和維生素E 添加對梅花鹿營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

硒和維生素E 添加對梅花鹿營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響，測定結(jié)果見表3。

表3 硒和維生素E對營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響(%)

如表3 所示，添加硒和維生素E 對七組日糧干物質(zhì)、酸性洗滌纖維、鈣、磷的表觀消化率差異不顯著(P＞0.05)。硒的添加水平對粗蛋白、粗脂肪和中性洗滌纖維的表觀消化率有所增加，且達到差異顯著水平(P＜0.05)。

2.2 硒和維生素E添加對梅花鹿血液生化指標的影響

硒和維生素E 添加對梅花鹿血液生化指標的影響，測定結(jié)果如表4所示。

表4 硒和維生素E對血液生化指標的影響

如表4 所示，硒水平和VE 水平對七組動物的血清白蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的影響不顯著(P＞0.05)。G3 組的總蛋白含量顯著高于G0 組(P＜0.05)。硒和VE的添加使谷胱甘肽過氧化物酶活性顯著增加(P＜0.05)。硒水平顯著影響了三碘甲腺原氨酸和甲狀腺素的含量(P＜0.05)。硒和維生素E的協(xié)同影響不顯著(P＞0.05)。

2.3 硒和維生素E添加對硒含量的影響

硒和維生素E添加對硒含量的影響，測定結(jié)果見表5。

表5 硒和維生素E添加對硒含量的影響

如表5所示，全血硒及毛發(fā)硒含量達到極顯著差異水平（P＜0.01），糞硒的含量達到差異顯著水平（P＜0.05）。硒的添加顯著影響了全血硒、毛發(fā)中硒元素含量及糞硒含量（P＜0.05）。VE 添加水平及硒和VE的協(xié)同對硒元素含量的影響不顯著（P＞0.05）。

3 討論

對于硒和VE添加水平對梅花鹿營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的影響方面，沒有公開發(fā)表的數(shù)據(jù)。在本試驗中，硒元素添加對粗蛋白、粗脂肪及中性洗滌纖維的表觀消化率影響顯著。這可能是由于纖維素分解菌的活性和數(shù)量提高引起的。之前在其他動物上也有相似的研究結(jié)果。Shi(2011)研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加納米硒，改善了羊?qū)Ω晌镔|(zhì)、有機物、粗蛋白、粗脂肪、中性洗滌纖維及酸性洗滌纖維的消化率[4]。Wang（2009）研究表明，奶牛日糧中添加0.15、0.3、0.45 mg/kg 硒元素，中性洗滌纖維的消化率呈線性增加[5]。董升(2005)研究證明，日糧中硒水平在0.2～0.5 mg/kg 時，能夠明顯提高粗纖維的降解率[6]，原因可能是一些微量元素能夠促進瘤胃中纖毛蟲和某些菌落的新陳代謝，增加數(shù)量，調(diào)節(jié)瘤胃與腸道的發(fā)酵功能，促進乳酸菌、纖維素菌群繁殖能力，提高其活性，進而瘤胃消化性能得到提升[7]；還有可能是因為硒將反芻動物瘤胃中硫氨基酸經(jīng)過硒-硫取代反應,生成硒氨基酸，再合成具有硒的蛋白質(zhì)，提高了營養(yǎng)物質(zhì)在機體內(nèi)的利用效率[8]；并且酵母硒中存在充足的谷胱甘肽、維生素B 族、無機酸鹽和酵母蛋白等，通過產(chǎn)生酶的作用（有活性的酵母細胞能夠產(chǎn)生蛋白酶、纖維素酶等）來提高機體腸道消化酶的活性，增加營養(yǎng)物質(zhì)的消化率。

血清白蛋白由肝臟合成，是機體蛋白質(zhì)來源之一，總蛋白是白蛋白和球蛋白之和，可作為蛋白質(zhì)代謝的指標。由于硒和維生素E的添加改善了氮平衡，能有效保護心臟和肝臟免受氧化損傷，所以提高了血清白蛋白含量，總蛋白含量也呈升高的趨勢。GPT、GOT在氨基酸代謝方面及在蛋白質(zhì)、脂肪和糖三者的轉(zhuǎn)換過程中占有極其重要的地位，是機體代謝過程中的關(guān)鍵酶。正常范圍內(nèi)2 種酶活性僅僅由于細胞的不斷更新而釋放于血液中，因此其活性升高或降低可反映營養(yǎng)物質(zhì)在體內(nèi)代謝的變化，超出正常范圍則反映心肌、骨骼肌和肝臟的各種損傷，即細胞內(nèi)酶由于生物膜的損傷而逸出引起。已有資料證明牛缺乏硒和維生素E 能引起GOT 和GPT 活性提高[9]。硒是GSH-Px 的組成成分，同時硒和維生素E 在生物抗氧化性方面具有互補性。GSH-Px 是機體內(nèi)主要的抗氧化酶系,它能使有毒過氧化物還原成無毒的羥基化合物，同時促進H2O2分解。最終使自由基數(shù)量減少和生成易被機體代謝的產(chǎn)物，從而保護細胞膜的結(jié)構(gòu)及功能免受過氧化物的損害和干擾；添加不同水平硒可明顯提高鹿機體的抗氧化能力。這與大多數(shù)研究結(jié)果相一致[10-12]。

甲狀腺激素具有促進新陳代謝和發(fā)育、提高神經(jīng)系統(tǒng)興奮性等作用，在生長方面與GH 起協(xié)同作用。含硒的脫碘酶（IDI）及其功能（促進T4 向T3 的轉(zhuǎn)化）的發(fā)現(xiàn)，揭示了硒可通過甲狀腺激素作用于機體代謝。T3參與調(diào)節(jié)戊糖磷酸循環(huán)酶，并與動物的GH合成有關(guān)，促進智力與體質(zhì)的發(fā)育。動物缺硒能引起IDI 的活力下降，降低了T4 向T3 的轉(zhuǎn)化速度,使血液T4含量上升而T3下降，導致動物生長緩慢[13]。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，硒水平顯著影響T4 和T3 的濃度(P＜0.05)，秦順義（2007）研究發(fā)現(xiàn)，給健康灘羊羔羊日糧中分別添加含硒量0.1 mg/kg 的富酵母硒和亞硒酸鈉，在試驗第30 d 和60 d 時，富酵母硒組和亞硒酸鈉組的T3濃度顯著高于對照組（P＜0.01），T4濃度顯著低于對照組（P＜0.05）[14]。這與本試驗所得的結(jié)果相似。

在其他動物上也有相關(guān)的研究報道。張偉明[15]研究了飼糧添加不同水平硒對籠養(yǎng)蛋雛鴨(0～4周)生長性能及生化指標的影響，研究結(jié)果表明，隨日糧硒水平的增加，血清T3 活性和生長激素水平呈先升高后降低的趨勢，而T4 活性和皮質(zhì)醇則隨硒水平的升高均呈先降低后升高的趨勢。林長光等[16]通過對斷奶仔豬的研究結(jié)果認為，隨著日糧中硒水平的提高，血清中T3濃度也隨著升高，而T4濃度隨之下降，促進了仔豬的生長。綜合各項指標分析納米硒和酵母硒的添加水平為0.5 mg/kg和0.7 mg/kg效果較好。林金玉等[17]研究表明，硒源對哺乳母豬和哺乳仔豬血清T3、T4質(zhì)量濃度的影響極顯著；納米硒組母豬血清T3質(zhì)量濃度比對照組、亞硒酸鈉組和酵母硒組依次提高了29.52%、17.24%和23.63%；納米硒組母豬血清T4質(zhì)量濃度比對照組、亞硒酸鈉組和酵母硒組依次降低了24.71%、30.88%和33.86%。

大量試驗證明，硒元素能夠提高動物的代謝功能，并且刺激機體生長繁育，是動物機體必需的微量元素之一。本試驗證明，與未補硒組相比，日糧中添加適量的亞硒酸鈉能顯著提高血液中硒元素含量。Gunter等研究發(fā)現(xiàn)，在牛日糧中添加一定量的硒能顯著或極顯著提高其全血硒含量。與本研究結(jié)果相同。動物被毛中的硒含量可作為診斷動物缺硒病的一種指標，對研究機體硒營養(yǎng)狀況具有一定的意義。本試驗中，對照組梅花鹿被毛硒含量為0.015 mg/kg，日糧添加亞硒酸鈉后，毛中硒的含量呈上升趨勢，顯著高于基礎(chǔ)日糧組，表明添加亞硒酸鈉促進了硒的代謝，增加了其在毛中的沉積。

4 結(jié)論

添加亞硒酸鈉對梅花鹿日糧粗蛋白、粗脂肪及中性洗滌纖維的表觀消化率影響顯著；添加亞硒酸鈉及維生素E 顯著影響了血清總蛋白含量、GSH-Px 活性以及T4、T3 的含量；硒的添加提高了硒的代謝水平，促進了硒在血液及毛發(fā)中的沉積。