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(1. 常州衛(wèi)生高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校，江蘇 常州213000；2. 南京工業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 南京210009)

刺天茄(SolanumindicumL.)為茄科(Solanaceae)茄屬(Solanum)植物，有刺天茄(原變種)(SolanumindicumL. var.indicum)和彎柄刺天茄(變種)(SolanumindicumL. var.recurvatumC. Y. Wu et S. C. Huang)等兩種[1]。以干燥成熟果實(shí)入藥，為云南地方常用藥材，具有清熱解毒、涼血止血、消腫利水、利膽退黃、活血調(diào)經(jīng)的功效，主治咽喉腫痛，咳嗽咯血，水腫，黃疸等病癥[2-3]。研究表明，刺天茄中含有黃酮、生物堿、多糖、氨基酸及甾體類化合物等多種成分[4-5]。其中黃酮類成分如槲皮素、蘆丁等是茄屬植物中廣泛存在的活性成分，且因采收期及加工方法的不同含量差異較大[6-8]。本研究采用HPLC對不同成熟度及干燥方式刺天茄果實(shí)中蘆丁和槲皮素進(jìn)行含量測定，以期明確兩種成分在果實(shí)中的積累規(guī)律，并為后期藥材加工方法提供參考依據(jù)。

1 材料與試劑

1.1 儀器

UltiMate 3000型高效液相色譜儀(美國熱電公司)；JC202型電熱恒溫干燥箱(青島海爾股份有限公司)；M1-211A型微波爐(廣東美的微波爐制造有限公司)。

1.2 試劑

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(100080-201408，98%)，槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品(100081-201408，99.1%)，購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇及乙腈(色譜純)，其它試劑均為分析純，購自昌泰興業(yè)有限公司；超純水由密理博公司Simplify 185 Unit 制得。

1.3 材料

1.3.1 材料來源

2012年搜集四川省內(nèi)江市資中縣境內(nèi)刺天茄種質(zhì)，種植于江蘇省常州市常州衛(wèi)生高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校藥用植物園，經(jīng)鑒定為刺天茄原變種SolanumindicumL. var.indicum，2014年按不同成熟程度采集果實(shí)，各組果實(shí)特征描述如下：

Ⅰ組：果實(shí)淺綠色，上覆深綠色網(wǎng)狀紋路；

Ⅱ組：果蒂露白，其余地方依然為綠色，網(wǎng)紋顏色較底色稍深；

Ⅲ組：果蒂白中泛黃，靠臍部一側(cè)白中帶綠，網(wǎng)紋綠色變淺；

Ⅳ組：果實(shí)全部泛黃，蒂部黃色明顯，網(wǎng)紋退至臍部變?yōu)榘咨?/p>

Ⅴ組：果實(shí)全黃色，個別果實(shí)有網(wǎng)紋，但紋路為白色且較淺。

1.3.2 材料處理

鮮果直接儲藏于-20 ℃冰箱，臨用前冰浴研磨。

各種干燥處理下的果實(shí)(按照GB 5009.3—2010方法測定水分)，粉碎過100目篩，密封儲藏于-4 ℃冰箱，待用。

烘干組：將不同成熟度果實(shí)用竹刀切口，于50 ℃的恒溫烘箱中烘干至恒重。

4月14日7時49分，青海省玉樹藏族自治州玉樹縣發(fā)生7.1級地震，給當(dāng)?shù)厝嗣袢罕娚敭a(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失。地震發(fā)生后，黨中央、國務(wù)院高度重視。正在國外訪問的中共中央總書記、國家主席、中央軍委主席胡錦濤對災(zāi)區(qū)群眾萬分牽掛，第一時間對抗震救災(zāi)工作作出重要指示，并當(dāng)即決定壓縮出訪行程提前回國。4月17日14時20分許，經(jīng)過近25小時長途飛行后回到北京；16時，胡錦濤總書記主持召開中共中央政治局常務(wù)委員會會議，全面部署抗震救災(zāi)工作。4月18日，胡錦濤總書記飛赴玉樹地震災(zāi)區(qū)，看望慰問受災(zāi)群眾和救援人員，實(shí)地了解救災(zāi)工作面臨的突出困難，指導(dǎo)抗震救災(zāi)工作。

微波干燥組：將不同成熟度果實(shí)用竹刀切開，按照果實(shí)大小再分別用中火(功率400 W)處理至恒重。

陰干組：將不同成熟度果實(shí)用竹刀切開，置于通風(fēng)陰涼處(環(huán)境溫度16～18 ℃)陰干至恒重。

曬干組：將不同成熟度果實(shí)用竹刀切開，暴露于陽光下(溫度28～32 ℃)至恒重。

2 方 法

2.1 色譜條件

參照王珍等與何俊芳等方法[5-6]，略加改動。ODS-SP C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為乙腈(A)-0.5%磷酸(B)，梯度洗脫：(25% B 0～6 min，25%～50% B 6～10 min，50% B 10～17 min，50%～25% B 17～20 min，25% B 20～25 min)；流速：1 mL·min-1；檢測波長：360 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL，混合標(biāo)樣與供試品色譜圖如圖1所示。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品4.00 mg 和槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品5.00 mg，分別加甲醇溶解并定容至25 mL，配成0.16 mg·mL-1的蘆丁貯備液和0.2 mg·mL-1的槲皮素貯備液；臨用前取蘆丁貯備液10 mL和槲皮素貯備液2 mL混合后，加甲醇定容至50 mL，配制成蘆丁和槲皮素標(biāo)準(zhǔn)液濃度依次為0.032 mg·mL-1，0.008 mg·mL-1的混合對照品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過備用。

2.3 供試品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取粉碎后過40目篩的供試樣品0.25 g置于具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)15 min，補(bǔ)足減失重量，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過備用。所有測定結(jié)果，均為折算后的干基含量。

3 結(jié)果與分析

3.1 線性關(guān)系考察

精密吸取混合對照品溶液1，4，8，16，20，40 μL，按上述色譜條件進(jìn)行測定。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=25.295X-0.078 1(R2=0.999 2)；槲皮素的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=45.161X-0.054 5 (R2=0.999 1)。結(jié)果表明，蘆丁和槲皮素分別在0.008～0.32 μg，0.032～1.28 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品(a)與供試品(b)HPLC圖譜

3.2 刺天茄鮮果中蘆丁與槲皮素含量變化規(guī)律

圖2 不同成熟度刺天茄鮮果中蘆丁和槲皮素含量比較

3.3 干燥處理對刺天茄果實(shí)中蘆丁和槲皮素含量的影響

3.3.1 烘干處理

烘干處后刺天茄各成熟度果實(shí)中蘆丁和槲皮素含量存在較大差異(圖3)，總體而言，隨成熟期的延后呈先上升后降低的趨勢，以成熟期Ⅳ，即“果實(shí)全部泛黃，蒂部黃色明顯，網(wǎng)紋退至臍部變?yōu)榘咨睍r含量最高為0.561 mg·g-1和9.297 μg·g-1。其中蘆丁在成熟期Ⅰ～Ⅲ時增幅不明顯，而槲皮素含量則呈直線上升趨勢，在Ⅲ～Ⅳ時則與前相反，在果實(shí)成熟度為Ⅴ時蘆丁和槲皮素含量降至最低，為0.396 mg·g-1和6.489 μg·g-1，較Ⅳ期降低0.294%和30.203%。

圖3 烘干處理對不同成熟度刺天茄果實(shí)中蘆丁和槲皮素含量的影響

3.3.2 微波干燥處理

與傳統(tǒng)干燥方式相比，微波干燥具有干燥效率高、均勻、節(jié)能、易實(shí)現(xiàn)自動化控制等優(yōu)點(diǎn)，在食品藥材干燥處理領(lǐng)域越來越受到重視。由圖4可見，微波干燥處理后，不同成熟度刺天茄果實(shí)中蘆丁和槲皮素變化趨勢稍有不同。蘆丁含量隨著成熟度的增加表現(xiàn)出先升高后降低的趨勢，在成熟度Ⅳ時達(dá)到最高值1.567 mg·g-1；槲皮素含量則隨著成熟度的增加呈逐漸上升趨勢，且在成熟期Ⅰ～Ⅳ變化不明顯，成熟期Ⅴ時達(dá)到最大值6.943 μg·g-1。

圖4 微波處理對不同成熟度刺天茄果實(shí)中蘆丁和槲皮素含量的影響

3.3.3 陰干處理

圖5 陰干處理對不同成熟度刺天茄果實(shí)中蘆丁和槲皮素含量的影響

陰干處理需要避開日光的直射或折射，在不超過20 ℃不低于10 ℃的地方，利用自然風(fēng)的作用，通過空氣流動使得物料中的水分逐漸失去的處理，此過程對物料中熱敏感成分的保存具有較好的效果。由圖5可見，陰干處理后刺天茄果實(shí)中蘆丁和槲皮素含量變化趨勢與鮮果相同，均在成熟度Ⅱ時最高，為1.486 mg·g-1和4.307 μg·g-1，之后隨成熟度的增加而降低，但兩者降低趨勢不同，蘆丁在成熟度Ⅱ～Ⅲ時下降緩慢，Ⅲ-Ⅴ時呈直線降低；而槲皮素則在Ⅱ～Ⅴ成熟范圍內(nèi)呈平緩降低趨勢。

3.3.4 曬干處理

曬干處理具有易于操作、成本低的特點(diǎn)，是目前較為常用的傳統(tǒng)干燥處理方式之一。由圖6可見，曬干處理后各成熟度果實(shí)中兩種成分含量變化趨勢與烘干和微波干燥相似，均在第Ⅳ成熟度時達(dá)到最高值，分別為1.846 mg·g-1和7.361 μg·g-1。在成熟期Ⅰ～Ⅲ時兩種成分增幅不明顯，成熟期Ⅲ～Ⅳ時呈直線上升趨勢，之后在Ⅴ時急速下降。

圖6 曬干處理對不同成熟度刺天茄果實(shí)中蘆丁和槲皮素含量的影響

4 結(jié)論與討論

大量研究證實(shí)，采收期對藥材品質(zhì)具有顯著的影響，李正紅等研究發(fā)現(xiàn)江枳殼中黃酮苷類成分隨著成熟期的延長呈先下降后上升再下降的趨勢，綜合可慮產(chǎn)量與品質(zhì)確定采收期為大暑(每年7月23日或24日)前后采收[9]。本研究結(jié)果也證實(shí)采收期對刺天茄果實(shí)中蘆丁和槲皮素含量具有顯著的影響，均隨成熟期延長呈先上升后下降的趨勢，以成熟期Ⅱ時兩種成分含量達(dá)到最高。

適宜的干燥方法能較好地保存藥材中活性成分含量，進(jìn)而保證藥品質(zhì)量[10]。本研究比較烘干、微波、曬干和陰干對刺天茄果實(shí)中活性成分蘆丁和槲皮素含量的影響可以看出，經(jīng)烘干、曬干、微波干燥的刺天茄果實(shí)中兩種成分含量呈現(xiàn)相同的變化趨勢，即均在第Ⅳ成熟度時達(dá)到得最大值，其中蘆丁以曬干處理含量最高，烘干處理含量最低；槲皮素以烘干處理含量最高，微波處理含量最低。陰干處理兩種成分變化趨勢與新鮮果實(shí)相同，均于第Ⅱ成熟度時含量最高，與前面三種干燥處理變化趨勢存在差異。分析其原因可能是刺天茄果實(shí)剛剛采收時是處于生長期的植物器官，理論上講只要不被采收，其應(yīng)該是可以繼續(xù)成熟的，突然被采收后，其生命活動并沒有馬上停止，在新鮮果實(shí)和陰干處理等條件下，果實(shí)內(nèi)部的生活的應(yīng)該處于逐漸的變化過程中。而烘干組、曬干組、微波干燥組等三種處理方式，具有一個共同的特點(diǎn)：通過不同的方式對果實(shí)進(jìn)行了加熱處理，果實(shí)在此過程中的因短時間內(nèi)迅速受熱，內(nèi)部物質(zhì)產(chǎn)生了一系列反應(yīng)，特別是果實(shí)中自身所含有的酶活性急劇降低，從而導(dǎo)致了兩種成分不同變化趨勢的形成。

由以上研究可知，刺天茄果實(shí)品質(zhì)易受采收時間、干燥方法的影響，在選擇干燥方法時，應(yīng)根據(jù)其成熟度的不同而進(jìn)行篩選，如采用烘干、曬干或微波干燥等加工可選擇采集第Ⅳ成熟度果實(shí)，鮮果保存或采后陰干處理則可選取第Ⅱ成熟度進(jìn)行采收。綜合比較各干燥方式建議選擇曬干處理為宜。