郝 哲 張素娜 劉 元 王麗軍

(中國人民解放軍第153中心醫(yī)院 鄭州 450042)

奧硝唑氯化鈉注射液在臨床上廣泛用于治療敏感厭氧菌所引起的腹部、盆腔、口腔、外科和腦部等部位的多種感染性疾病[1]。它的主要已知雜質有2-甲基-5-硝基咪唑及2-甲基-5-硝基-1-(2,3-二羥基丙基)咪唑[2]。有關物質量的多少直接影響到臨床療效及不良反應發(fā)生率，因此有必要優(yōu)化生產(chǎn)工藝，制備出優(yōu)質高效的制劑。在原標準WS-043(X-039)-2002中規(guī)定pH范圍為3.5～5.5，在標準WS1-(X-035)-2012Z中規(guī)定pH值范圍為3.0～4.0，pH值范圍縮小，表明pH值對奧硝唑氯化鈉注射液質量的影響起著至關重要的作用。人體可耐受pH范圍為4～9，pH<4時，易導致刺激疼痛及靜脈炎[3]。本文結合生產(chǎn)實際，確定最佳pH值，優(yōu)化最佳工藝，保證產(chǎn)品質量，確保臨床用藥安全可靠。

1 儀器與試藥

島津LC-10A型高效液相色譜儀，包括SPD-10A型紫外檢測器、手動進樣器、LabSoulations型色譜工作站(日本島津公司)；BT 125D型電子天平(賽多利斯公司)。甲醇為色譜純，水為超純水。

奧硝唑氯化鈉注射液，批號：1504231、1504232、1504233，規(guī)格：100ml ： 奧硝唑0.5g與氯化鈉0.9g，本院自制。

奧硝唑對照品，批號：100608-201301，規(guī)格：100mg，由中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：WondaSil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-水(20∶80)為流動相，流速為1ml/min，檢測波長為318nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備

取奧硝唑對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋成每1ml中含奧硝唑100μg的溶液，作為對照品溶液，圖譜見圖1。

取2-甲基-5-硝基咪唑對照品適量，加流動相稀釋成每1ml中含2-甲基-5-硝基咪唑10μg的溶液。

2.2.2供試品溶液的制備

取本品，加適量0.1mol/L鹽酸，調節(jié)溶液pH值分別為3.0，3.2，3.4，3.6，3.8，4.0。分別精密量取各供試品溶液適量，加流動相稀釋成每1ml中含奧硝唑100μg的溶液，圖譜見圖1。

2.2.3有關物質對照溶液的制備

分別精密量取各供試品溶液1ml，置100ml量瓶，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得，圖譜見圖1。

a 奧硝唑對照品溶液

b 奧硝唑有關物質對照溶液

c 氯化鈉溶液

d 2-甲基-5-硝基咪唑溶液

e 奧硝唑有關物質溶液

f 奧硝唑含量測定溶液

注：1-NaCl；2-2-甲基-5-硝基咪唑3；4-有關物質；5-奧硝唑。

2.2.4空白試驗

精密量取0.9%氯化鈉溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，圖譜見圖1。

2.3 線性關系考察

精密稱定奧硝唑對照品10.26mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取3.0、4.0、5.0、6.0、7.0分別置10ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。5種不同濃度的對照品溶液各精密量取20μl分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積。每個濃度平行進樣3次，取其平均峰面積，以色譜峰面積(Y)對進樣濃度(X)進行線性回歸，得回歸方程Y=60224X-21385 ，r=0.9999，表明樣品濃度在61.6μg·ml-1～143.6μg·ml-1范圍內，線性關系良好。

2.4 精密度試驗

精取奧硝唑氯化鈉注射液(1504231)適量，按照含量測定方法配成稀釋溶液，按上述測定方法測定，平行操作5份，計算平均峰面積及其相對標準偏差，結果RSD為0.07%，表明該方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取奧硝唑氯化鈉注射液(1504231)適量，按照含量測定方法配成稀釋溶液分別于0、2、4、6、8h測定奧硝唑的含量，考察供試品溶液穩(wěn)定性，計算平均峰面積及其相對標準偏差，結果結果RSD為0.10%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.6 回收率試驗

精密稱取奧硝唑適量，加入適量的氯化鈉(氯化鈉按100%投料)，制備含奧硝唑約相當于標示量的80%、100%、120%的供試品溶液，每一濃度平行制備3份，照含量測定方法測定。計算平均回收率及RSD值，結果見表1。

表1 回收率試驗結果(n=9)

序號實際濃度(μg/ml)測得濃度(μg/ml)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)180.1579.8799.65280.2380.1299.86379.9879.8199.794100.14100.0199.875100.23100.1299.896101.0899.8998.827120.34120.0599.768120.17120.0699.919120.24120.0799.8699.70.34

2.7 定量限和檢測限

取2.2.1項下對照品溶液適量，分別加適量水稀釋后測定，在信噪比為10∶1和信噪比為3∶1時計算定量限和檢測限分別為1.2ng和0.4ng。

2.8 測定結果

取不同pH值的供試品溶液，依法測定，有關物質以自身對照法計算，含量測定以外標法計算，見表2、圖2。

表2 不同pH值測定結果

pH值3.03.23.43.63.84.0有關物質(≤1.0%)0.830.800.770.540.820.86含量(%)98.098.198.298.598.398.4

圖2 不同pH值測定結果圖

3 結論

由結果可知，奧硝唑的含量與有關物質之間存在一定的相關性，有關物質量越多，含量相對略低，但不同pH值下，奧硝唑含量的RSD%為0.19%，奧硝唑有關物質的RSD%為15.1%。表明不同pH值對含量影響不大，但對有關物質影響較大，當pH值為3.6時有關物質量最少，故實際生產(chǎn)中，控制pH值為3.6，確保制劑安全有效。