石 敏，李雙全，唐義梅，鄭文涌，牛耀嶸，呂常旭，侯奇良，晏向華，馬立保*

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，武漢 430070；2.湖北綠科樂(lè)華生物科技有限公司，湖北 黃岡 438000）

棉粕和菜籽粕等非常規(guī)蛋白質(zhì)飼料因含有較多的游離棉酚、植酸、單寧及粗纖維等抗?fàn)I養(yǎng)因子，不能被動(dòng)物較好地消化、吸收和利用。微生物生物發(fā)酵是提高利用效率的有效手段之一，釀酒酵母常用于發(fā)酵非常規(guī)原料，以提高非常規(guī)原料的使用量和飼喂價(jià)值。釀酒酵母發(fā)酵在提高非常規(guī)原料利用價(jià)值的同時(shí)，還能產(chǎn)生大量的代謝產(chǎn)物（營(yíng)養(yǎng)代謝物、酶類(lèi)和未知營(yíng)養(yǎng)因子等），而且酵母細(xì)胞富含氨基酸、維生素、礦物質(zhì)和甘露寡糖等成分，能為微生物提供豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，改善腸道菌群組成，進(jìn)而提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能和改善肌肉品質(zhì)[1]。Gao等研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加釀酒酵母培養(yǎng)物2.5 g·kg-1可增加1～42日齡肉雞的平均日增重，降低料重比[2]。路則慶等研究發(fā)現(xiàn)，大麥-高粱型日糧中添加釀酒酵母培養(yǎng)物0.8%能增加豬肉肌苷酸的含量，提升豬肉鮮味[3]。Price等研究報(bào)道，日糧中添加釀酒酵母培養(yǎng)物0.2%可增加沙門(mén)氏菌感染的斷奶仔豬胃腸道中乳酸菌和擬桿菌的數(shù)量，改善微生物區(qū)系[4]。

本試驗(yàn)使用的新型釀酒酵母培養(yǎng)物是基于菜籽粕等雜粕在菌酶協(xié)同作用下，經(jīng)固液結(jié)合深度發(fā)酵、低溫干燥制成，富含還原型谷胱甘肽、原花青素、有機(jī)酸和酵母細(xì)胞壁多糖等多種活性物質(zhì)。然而，雜粕的發(fā)酵效率較低，發(fā)酵后單位重量產(chǎn)生的可供腸道微生物吸收利用的代謝物的含量低于類(lèi)似于“益康XP”等釀酒酵母培養(yǎng)物，因此，為達(dá)到與“益康XP”相同的應(yīng)用效果，日糧中新型釀酒酵母培養(yǎng)物的添加量要提高，而且適度高劑量的添加也為利用非常規(guī)原料提供了可能性。使用發(fā)酵后的菜籽粕替代基礎(chǔ)日糧中部分豆粕作為動(dòng)物的蛋白質(zhì)來(lái)源，可以降低配方成本，減少資源的浪費(fèi)。本試驗(yàn)探究日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨肌肉品質(zhì)和腸道微生物的影響，為其在櫻桃谷鴨日糧中地進(jìn)一步推廣和應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物（培養(yǎng)基）和新型釀酒酵母培養(yǎng)物由湖北綠科樂(lè)華生物科技有限公司提供。新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物養(yǎng)分含量為：粗蛋白質(zhì)51.4%、粗脂肪1.8%、粗纖維8.4%、粗灰分8.6%；新型釀酒酵母培養(yǎng)物養(yǎng)分含量為：粗蛋白質(zhì)53.1%、粗脂肪1.7%、粗纖維10.1%、粗灰分8.4%、還原型谷胱甘肽的含量為0.30%，原花青素的含量為0.15%。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取健康且體重相近的1日齡櫻桃谷鴨396只，隨機(jī)分為3組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)22只，試驗(yàn)期42 d。參考美國(guó)NRC（1994）櫻桃谷鴨的營(yíng)養(yǎng)需要量，分別設(shè)計(jì)1～21日齡和22～42日齡櫻桃谷鴨的日糧配方，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，Ⅱ、Ⅲ組分別在基礎(chǔ)日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物2.5%和新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平 %DM

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)開(kāi)始前，鴨舍、水槽和料槽進(jìn)行充分清洗并且嚴(yán)格消毒。櫻桃谷鴨為舍內(nèi)平養(yǎng)，自由采食和飲水，常規(guī)免疫，保證通風(fēng)良好，溫度適宜。舍內(nèi)地面平鋪墊料，雛鴨首次墊料厚度6～8 cm，以后逐漸遞減。每天清理鴨舍，更換潮濕墊料，定期消毒。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.1 肌肉品質(zhì)指標(biāo)

試驗(yàn)至第42天，每組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取1只接近平均體重的櫻桃谷鴨，頸部放血屠宰，立即解剖，分割胸肉和腿肉，自封袋分裝，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分：水分檢測(cè)參照GB 5009.3-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測(cè)定》。粗蛋白質(zhì)檢測(cè)參照GB/T 9695.11-2008《肉與肉制品氮含量測(cè)定》。肌內(nèi)脂肪檢測(cè)采用三氯甲烷-甲醇法。取5.0 g鴨胸肉和鴨腿肉，攪碎后放入勻漿管，加入30 mL三氯甲烷-甲醇溶液（體積比2∶1，下同），低速勻漿后轉(zhuǎn)入三角瓶，再加入50 mL三氯甲烷-甲醇溶液，靜置1 h，過(guò)濾，加入0.2倍體積的生理鹽水，3 000 r·min-1離心15 min，取下層液體，倒入50 mL燒杯中，沸水浴蒸干，經(jīng)烘箱干燥后稱(chēng)重。燒杯蒸前重為m1，蒸后重為m2，肉重為m3，則肌內(nèi)脂肪含量=（m2-m1）/m3×100%。

pH：屠宰后分別于宰后45 min和24 h檢測(cè)肌肉的pH。將DELTA320型pH計(jì)的探針插入肌肉中，測(cè)定3個(gè)不同位置，取平均值。

滴水損失率：屠宰后取約10 g的肉樣，天平稱(chēng)重得n1，將肉樣放入滴水損失管內(nèi)，置于試管架上，放入4℃冰箱，48 h后取出稱(chēng)重得n2，滴水損失率=（n1-n2）/n1×100%。

肉色：將肌肉切成厚度約為0.5 cm，半徑約為2 cm的肉塊，用miniscan-EZ型肉質(zhì)測(cè)色儀檢測(cè)肌肉的亮度、紅度和黃度。每個(gè)樣品測(cè)3次，取平均值為最終結(jié)果。

1.4.2 腸道微生物

試驗(yàn)至第42天，每組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取1只接近平均體重的櫻桃谷鴨，頸部放血屠宰，立即解剖，無(wú)菌操作，快速收集盲腸內(nèi)容物于滅菌的凍存管中，液氮速凍，-80℃保存。

基因組總DNA提取和PCR擴(kuò)增：Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組分別選取6、4和6個(gè)櫻桃谷鴨的盲腸內(nèi)容物樣品參考文獻(xiàn)進(jìn)行盲腸內(nèi)容物基因組總DNA提取，DS-11型超微量分光光度計(jì)和瓊脂糖凝膠電泳（1%）檢測(cè)DNA的濃度和純度，-80℃保存[5]。對(duì)微生物基因組16S rDNA V3-V4區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列為341F：ACTCCTACGGGAGGCAG和806R:GGACTACHVGGGTWTCTAAT。PCR擴(kuò)增，Illumina Miseq測(cè)序和生物信息分析均由深圳華大基因科技服務(wù)有限公司協(xié)助完成。

生物信息分析：下機(jī)后先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，去除低質(zhì)量、含有接頭和帶有N的序列，將reads拼接成tags，在97%相似度下通過(guò)USEARCH（V7.0.1090）軟件將tags聚類(lèi)，得到分類(lèi)操作單元（OTUs）[6]。通過(guò)RDPclassifer（V2.2）將OTUs代表序列與數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，置信度閾值為0.6，細(xì)菌數(shù)據(jù)庫(kù)為Greengene[7]?；跇悠稯TUs的數(shù)目通過(guò)R軟件（V3.1.1）繪制OTUs韋恩圖，通過(guò)與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，對(duì)OTUs進(jìn)行菌種注釋繪制profiling柱狀圖?；跇悠稟lpha多樣性指數(shù)，通過(guò)R軟件繪制相應(yīng)的稀釋曲線(xiàn)圖和箱形圖。Beta多樣性通過(guò)QIIME軟件（V1.80）分析。樣品組間差異的顯著性通過(guò)Metastats分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件One Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并進(jìn)行Duncan's多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨肌肉品質(zhì)的影響

2.1.1 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響

日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響見(jiàn)表2。

由表2可知，各組櫻桃谷鴨水分和粗蛋白質(zhì)的含量均差異不顯著（P＞0.05）。Ⅲ組櫻桃谷鴨胸肌肌內(nèi)脂肪的含量極顯著高于Ⅰ和Ⅱ組（P＜0.01），但腿肌肌內(nèi)脂肪的含量組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.1.2 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨常規(guī)肉品質(zhì)指標(biāo)的影響

日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨常規(guī)肉品質(zhì)指標(biāo)的影響見(jiàn)表3。

由表3可知，各組櫻桃谷鴨胸肌pH45min、pH24h、滴水損失率和肉色均差異不顯著（P＞0.05）。Ⅲ組櫻桃谷鴨腿肌pH45min和pH24h均顯著高于Ⅰ、Ⅱ組（P＜0.05），滴水損失率較Ⅱ組有降低的趨勢(shì)（P=0.06）。各組櫻桃谷鴨腿肌肉色均差異不顯著（P＞0.05）。

表2 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響 %

表3 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨常規(guī)肉品質(zhì)指標(biāo)的影響

2.2 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物的影響

2.2.1 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物測(cè)序數(shù)據(jù)的影響

對(duì)16只櫻桃谷鴨的盲腸內(nèi)容物樣品進(jìn)行測(cè)序分析，共得到297792條有效序列。日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物測(cè)序數(shù)據(jù)的影響見(jiàn)圖1。

由圖1可知，隨著測(cè)序序列數(shù)目的增加，Chao指數(shù)已趨于平坦，達(dá)到平臺(tái)期，表明測(cè)序已基本覆蓋櫻桃谷鴨腸道微生物的所有物種。

2.2.2 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物OTUs數(shù)目的影響

日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物OTUs數(shù)目的影響見(jiàn)圖2。

由圖2可知，97%相似度下進(jìn)行聚類(lèi)，所有的序列共聚類(lèi)成459個(gè)OTUs，其中，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組櫻桃谷鴨腸道微生物的核心OTUs為336個(gè)。

2.2.3 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物Alpha多樣性的影響

Alpha多樣性包括Chao指數(shù)、ACE指數(shù)、Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)等。Chao指數(shù)和ACE指數(shù)反映群落的豐富度，Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)反映群落的多樣性。日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物Alpha多樣性的影響見(jiàn)圖3。

圖1 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物測(cè)序數(shù)據(jù)的影響

圖2 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物OTUs數(shù)目的影響

圖3 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物Alpha多樣性的影響

由圖3可知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組櫻桃谷鴨腸道微生物的Alpha多樣性組間無(wú)顯著差異（P＞0.05），但Ⅱ組櫻桃谷鴨腸道微生物的Chao指數(shù)（P=0.099）和ACE指數(shù)（P=0.050）較Ⅰ組均有降低的趨勢(shì)。

2.2.4 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物Beta多樣性的影響

Beta多樣性用于區(qū)分樣品組間物種多樣性的差異，weighted UniFrac是考慮序列豐度和進(jìn)化距離的一種衡量Beta多樣性的重要指標(biāo)。日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物Beta多樣性的影響見(jiàn)圖4。

圖4 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物Beta多樣性的影響

由圖4可知，細(xì)菌主成分1（Principal compoent 1，PC1）、PC2和PC3的貢獻(xiàn)率分別為38%、21%和13%。由圖4可知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組櫻桃谷鴨的腸道微生物區(qū)系能夠比較明顯地區(qū)分開(kāi)。

2.2.5 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物群落組成的影響

日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物群落組成的影響見(jiàn)圖5～7、表4。由圖5可知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)均為擬桿菌門(mén)、厚壁菌門(mén)、變形菌門(mén)和梭桿菌門(mén)。通過(guò)Metastats分析比較不同處理間櫻桃谷鴨門(mén)水平上腸道微生物相對(duì)豐度的差異，由圖6可知，Ⅱ組和Ⅲ組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌中擬桿菌門(mén)的相對(duì)豐度極顯著高于Ⅰ組（P＜0.01），Ⅲ組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌中放線(xiàn)菌門(mén)的相對(duì)豐度顯著高于Ⅰ組（P＜0.05），Ⅱ組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌中變形菌門(mén)的相對(duì)豐度極顯著低于Ⅰ組（P＜0.01），但Ⅲ組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌中變形菌門(mén)的相對(duì)豐度與Ⅰ組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

圖5 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物門(mén)水平相對(duì)豐度的影響

圖6 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道差異菌門(mén)水平相對(duì)豐度的影響

櫻桃谷鴨屬水平上腸道微生物的相對(duì)豐度：由圖7可知，通過(guò)與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組櫻桃谷鴨的腸道細(xì)菌共注釋到64個(gè)菌屬，并且優(yōu)勢(shì)菌屬均為擬桿菌屬和梭桿菌屬。表4結(jié)果顯示，與Ⅰ組相比，Ⅲ組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌中擬桿菌屬的相對(duì)豐度顯著增加（P＜0.05），Erysipelatoclostridium的相對(duì)豐度顯著減少（P＜0.05）；與Ⅱ組相比，Ⅲ組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌中Oxalobacter的相對(duì)豐度極顯著增加（P＜0.01），Parabacteroides和Oscillibacter的相對(duì)豐度極顯著減少（P＜0.01），脫硫弧菌屬、Hydrogenoanaerobacterium、Butyricimonas、嗜膽菌屬和梭菌屬的相對(duì)豐度顯著增加（P＜0.05）。

圖7 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物屬水平相對(duì)豐度的影響

表4 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道差異菌屬水平相對(duì)豐度的影響 %

2.2.6 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物基因功能的影響

日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物基因功能的影響見(jiàn)圖8。

由圖8可知，Ⅱ組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌脂質(zhì)代謝基因功能的相對(duì)豐度顯著高于Ⅰ、Ⅲ組（P＜0.05），細(xì)胞運(yùn)動(dòng)基因功能的相對(duì)豐度極顯著低于Ⅰ組（P＜0.01），但與Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05）；Ⅲ組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌核苷酸代謝基因功能的相對(duì)豐度極顯著高于Ⅰ組（P＜0.01），氨基酸代謝基因功能的相對(duì)豐度顯著高于Ⅰ組（P＜0.05），能量代謝基因功能的相對(duì)豐度較Ⅰ組有增加的趨勢(shì)（P=0.073），而細(xì)胞運(yùn)動(dòng)基因功能的相對(duì)豐度較Ⅰ組有減少的趨勢(shì)（P=0.085）。

圖8 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物基因功能的影響

3 討 論

3.1 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨肌肉品質(zhì)的影響

肌肉品質(zhì)能體現(xiàn)肉用畜禽的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。肌肉中水分含量越高，保水性越強(qiáng)，肌肉的嫩度和多汁性等性狀越好[8]。蛋白質(zhì)是肌肉中的主要養(yǎng)分，含量越高，肉品質(zhì)越好。肌內(nèi)脂肪是評(píng)定肉品質(zhì)的關(guān)鍵因素之一，與肌肉的嫩度、多汁性和風(fēng)味有著密切的聯(lián)系[9]。于素紅等研究報(bào)道，日糧中添加酵母培養(yǎng)物5.0和7.5 g·kg-1，肉雞胸肌和腿肌粗蛋白質(zhì)的含量無(wú)顯著差異[9]。路則慶等研究報(bào)道，大麥-高粱型日糧中添加酵母培養(yǎng)物0.8%對(duì)肥育豬背最長(zhǎng)肌水分和肌內(nèi)脂肪的含量無(wú)影響[3]。本試驗(yàn)日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物2.5%和新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%對(duì)櫻桃谷鴨胸肌和腿肌的水分和粗蛋白質(zhì)的含量均無(wú)影響，而新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%組櫻桃谷鴨胸肌肌內(nèi)脂肪的含量高于對(duì)照組和新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物2.5%組。

新型釀酒酵母培養(yǎng)物中還原型谷胱甘肽的含量較高，由于含有半胱氨酸殘基，還原型谷胱甘肽易與自由基結(jié)合，轉(zhuǎn)化成氧化型谷胱甘肽，提高機(jī)體的抗氧化能力[10]。此外，代謝組數(shù)據(jù)顯示，新型釀酒酵母培養(yǎng)物中原花青素的含量高于新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物組，原花青素由于含有多個(gè)酚性羥基，可以競(jìng)爭(zhēng)性地與自由基結(jié)合，抑制脂質(zhì)氧化反應(yīng)，從而保護(hù)機(jī)體免受氧化損傷[11]。新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%組櫻桃谷鴨胸肌肌內(nèi)脂肪的含量高于對(duì)照組和新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物2.5%組，原因可能是新型釀酒酵母培養(yǎng)物中還原型谷胱甘肽和原花青素的含量較高，能減少機(jī)體的氧化應(yīng)激，抑制肌內(nèi)脂肪的氧化，從而改善肌肉品質(zhì)。

pH、滴水損失率和肉色是反映肉品質(zhì)的重要指標(biāo)。pH反映動(dòng)物屠宰后肌糖原的降解速度。一定范圍內(nèi)，pH升高，肌肉系水力增強(qiáng)，嫩度越好[12]。滴水損失率是在外力（如加壓、冷凍和儲(chǔ)藏等）條件下，肌肉維持固有水分的能力[9]。肉色可通過(guò)亮度、紅度和黃度進(jìn)行鑒定，一般紅度越大，亮度和黃度越小，肉品質(zhì)越好。于素紅等研究報(bào)道，日糧中添加酵母培養(yǎng)物5 g·kg-1可顯著降低肉雞胸肌和腿肌的滴水損失率，但對(duì)胸肌pH45min和pH24h無(wú)顯著影響[9]。試驗(yàn)日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物2.5%和新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%對(duì)櫻桃谷鴨胸肌pH45min、pH24h、滴水損失率和肉色均無(wú)影響，但2.5%新型釀酒酵母培養(yǎng)物組櫻桃谷鴨腿肌pH45min和pH24h高于對(duì)照組和新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%底物組，并且新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%組櫻桃谷鴨腿肌的滴水損失率較新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物2.5%組有降低的趨勢(shì)。新型釀酒酵母培養(yǎng)物中還原型谷胱甘肽的含量較高，抗氧化能力增強(qiáng)，進(jìn)而提高細(xì)胞膜的屏障功能，減少水分外流，降低肌肉的滴水損失率，增強(qiáng)系水力[10]?？寡趸芰υ鰪?qiáng)還會(huì)減少機(jī)體的氧化應(yīng)激，從而減少促腎上腺皮質(zhì)激素的含量，抑制糖酵解過(guò)程中各催化酶的活性，減少乳酸的產(chǎn)生，因此提高腿肌pH[13]。有研究表明，PPAR-δ是過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔助活化因子1α（PGC-1α）的上游調(diào)控因子，能與其他的轉(zhuǎn)錄因子共同作用促進(jìn)PGC-1α的表達(dá)，而PGC-1α可誘導(dǎo)Ⅰ型肌纖維特異基因的表達(dá)，增加Ⅰ型肌纖維的數(shù)量，抑制pH的下降，從而改善肌肉品質(zhì)[14]。

3.2 日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)櫻桃谷鴨腸道微生物的影響

Illumina MiSeq測(cè)序能夠比較準(zhǔn)確全面地分析腸道微生物的多樣性，在微生物研究中應(yīng)用越來(lái)越廣泛[15]。本試驗(yàn)日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%對(duì)櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌的Alpha多樣性無(wú)影響，可能與新型釀酒酵母培養(yǎng)物的發(fā)酵菌株和發(fā)酵時(shí)間有關(guān)。Si等研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加酵母細(xì)胞壁Biolex MB40 0.2%，裸頸雞腸道細(xì)菌的Alpha多樣性無(wú)變化，而添加0.2%酵母細(xì)胞壁Leiber ExCel，裸頸雞腸道細(xì)菌的Alpha多樣性下降[16]。孫喆等研究發(fā)現(xiàn)，隨著日糧中添加的酵母培養(yǎng)物發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，肉雞腸道細(xì)菌的Alpha多樣性呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)[17]。

Vasa?等通過(guò)16S rRNA焦磷酸測(cè)序檢測(cè)綠頭鴨和番鴨的盲腸微生物區(qū)系發(fā)現(xiàn)綠頭鴨和番鴨在門(mén)水平上主要由厚壁菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、放線(xiàn)菌門(mén)和變形菌門(mén)組成[18]。本試驗(yàn)對(duì)照組、新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物2.5%組和新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)為厚壁菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、變形菌門(mén)和梭桿菌門(mén)，說(shuō)明相同種屬間腸道菌群組成存在一定的相似性。新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物2.5%組和新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌中擬桿菌門(mén)的相對(duì)豐度高于對(duì)照組，可能與釀酒酵母培養(yǎng)物底物和釀酒酵母培養(yǎng)物中粗纖維的含量較高有關(guān)。擬桿菌門(mén)是動(dòng)物體內(nèi)酵解碳水化合物的主要菌門(mén)，擬桿菌門(mén)的相對(duì)豐度增加，降解纖維素的能力可能增強(qiáng)，能為微生物提供更多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以促進(jìn)其生長(zhǎng)[19]。Upadrasta等研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加蘋(píng)果酒酵母可增加斷奶仔豬糞便中擬桿菌門(mén)的相對(duì)豐度，此結(jié)論與本文一致[20]。放線(xiàn)菌門(mén)的主要功能是產(chǎn)生抗生素，鏈霉素、紅霉素和卡那霉素等均由放線(xiàn)菌門(mén)中的鏈霉菌產(chǎn)生。此外，具有營(yíng)養(yǎng)、抑菌、免疫調(diào)節(jié)和抗癌等生理功能的雙歧桿菌也隸屬于放線(xiàn)菌門(mén)[21]。變形菌門(mén)在動(dòng)物腸道中含量較豐富，且形態(tài)多樣，但變形菌門(mén)中許多細(xì)菌如沙門(mén)氏菌、霍亂弧菌和幽門(mén)螺桿菌等均被證實(shí)是致病菌。變形菌門(mén)相對(duì)豐度的增加不僅會(huì)打亂微生物群落結(jié)構(gòu)的平衡，還可能使機(jī)體患病的機(jī)率大幅提高[22]。新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物2.5%組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌中變形菌門(mén)的相對(duì)豐度極顯著低于對(duì)照組，而新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。說(shuō)明日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物底物2.5%和新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%通過(guò)增加擬桿菌門(mén)和放線(xiàn)菌門(mén)等有益菌的相對(duì)豐度抑制或穩(wěn)定了變形菌門(mén)中病原菌相對(duì)豐度的增加，維持櫻桃谷鴨腸道的健康。

在屬水平上，2.5%新型釀酒酵母培養(yǎng)物組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌中擬桿菌屬的相對(duì)豐度高于對(duì)照組，Erysipelatoclostridium的相對(duì)豐度低于對(duì)照組。擬桿菌屬的脆弱擬桿菌能激活Toll樣受體，通過(guò)分泌一種微生物多糖A可抵制Helicobacter hepaticus誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，增強(qiáng)機(jī)體免疫力[23-24]。Erysipelatoclostridium是一種條件性致病菌，日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%可降低Erysipelatoclostridium的相對(duì)豐度，減小櫻桃谷鴨患病的可能性[25]。日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物能改善櫻桃谷鴨的腸道菌群結(jié)構(gòu)可能與新型釀酒酵母培養(yǎng)物細(xì)胞壁組成甘露寡糖和β-葡聚糖有關(guān)。

甘露寡糖可吸附在腸道表面，為病原菌提供特定的結(jié)合位點(diǎn)，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制病原菌在腸道表面的定植[26]。Mourao等研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加甘露寡糖可顯著降低育肥兔盲腸大腸桿菌和腸球菌的數(shù)量，改善腸道微生物區(qū)系[27]。Wang等研究發(fā)現(xiàn)，β-葡聚糖能極顯著增加人體糞便中擬桿菌屬的相對(duì)豐度，并且普氏菌屬的相對(duì)豐度有增加的趨勢(shì)[28]。

此外，腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生改變還可能與新型釀酒酵母培養(yǎng)物富含有機(jī)酸有關(guān)，腸道中的有益菌能在酸性環(huán)境（5.8～6.2）中較好地生存，而致病菌大多存在于pH≥7的中性或偏堿性環(huán)境中[29]。Ozduven等研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加有機(jī)酸可顯著增加肉雞盲腸乳酸菌的含量，降低大腸桿菌的含量，調(diào)節(jié)腸道菌群組成[30]。

PICRUSt分析彌補(bǔ)了16S rDNA測(cè)序只能檢測(cè)微生物的組成，無(wú)法預(yù)知微生物功能的缺陷，目前已成為一種預(yù)測(cè)細(xì)菌和古細(xì)菌代謝功能的重要工具。本試驗(yàn)PICRUSt分析結(jié)果顯示，新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌核苷酸代謝基因功能高于對(duì)照組，氨基酸代謝基因功能高于對(duì)照組，能量代謝和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)基因功能組間差異不明顯。但新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌能量代謝基因功能較對(duì)照組有增加的趨勢(shì)，而細(xì)胞運(yùn)動(dòng)基因功能較對(duì)照組有減少的趨勢(shì)。Fang等研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌能量代謝、氨基酸代謝、核苷酸代謝和碳水化合物代謝等基因功能的相對(duì)豐度與肌內(nèi)脂肪的含量呈正相關(guān)，而細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和膜轉(zhuǎn)運(yùn)等基因功能的相對(duì)豐度與肌內(nèi)脂肪的含量呈負(fù)相關(guān)[31]。因此，日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%能增加櫻桃谷鴨胸肌肌內(nèi)脂肪的含量，可能與該組櫻桃谷鴨腸道細(xì)菌核苷酸代謝、氨基酸代謝和能量代謝基因功能增強(qiáng)，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)基因功能減弱有關(guān)。

4 結(jié)論

日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物2.5%可提高櫻桃谷鴨胸肌肌內(nèi)脂肪的含量，提高腿肌pH45min和pH24h，改善肌肉品質(zhì)。日糧中添加新型釀酒酵母培養(yǎng)物可能導(dǎo)致有利于改善肉品質(zhì)的細(xì)菌基因功能相對(duì)豐度的變化，進(jìn)而改善肌肉品質(zhì)。