肖朝江 聶楠 董相 姜北

【摘?要】?目的：為考察白族藥用植物長果頸黃芪的品質(zhì)，對(duì)其多糖含量進(jìn)行測定。方法：采用水提醇沉法對(duì)長果頸黃芪根中多糖進(jìn)行提取，硫酸-蒽酮法對(duì)其多糖含量進(jìn)行測定。結(jié)果：長果頸黃芪根的多糖含量高達(dá)15.56%，約5.5倍于正品黃芪。硫酸-蒽酮法在測定黃芪多糖含量測定中顯示出較高的精密度，以及較好的穩(wěn)定性和回收率。結(jié)論：長果頸黃芪根含有豐富的多糖成分，相關(guān)分析方法可用于黃芪藥材、炮制品以及含黃芪制劑的多糖含量控制。

【關(guān)鍵詞】?長果頸黃芪;根;多糖;含量測定

【中圖分類號(hào)】R285.1?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】?A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）22-0058-04

Quantitative?Analysis?of?Polysaccharides?in?the?Roots?of?Bai?Nationality?Medicinal?Plant?Astragalus?Englerianus

XIAO?Chaojiang1，2?NIE?Nan2?DONG?Xiang1，2?JIANG?Bei1，2*

1.?Institute?of?Materia?Medica，?Dali?University，?Dali?671000，?China;

2.?College?of?Pharmacy?and?Chemistry，?Dali?University，?Dali?671000，?China

Abstract：Objective?To?explore?the?quality?of?Astragalus?englerianus，?a?Bai?nationality?medicinal?plant，?the?polysaccharides?content?of?the?plant?was?determined.?Methods?The?polysaccharides?were?extracted?by?reflux?method?with?water.?After?purified?by?ethanol，?the?polysaccharides?content?was?determined?by?the?sulfuric?anthrone?reaction.?Results?The?polysaccharides?content?of?the?roots?of?A.?englerianus?was?up?to?15.56%，?about?5.5?times?higher?than?that?of?Huangqi.?The?anthrone-sulfuric?acid?colorimetric?assay?showed?high?precision，?stability，?and?recovery?in?the?determination?of?Astragalus?polysaccharides.?Conclusion?The?root?of?A.?englerianus?was?rich?in?polysaccharides.?This?analytical?method?conducted?in?this?study?could?be?used?to?the?quality?monitoring?of?the?polysaccharides?in?Astragalus?plants，?as?well?as?the?processed?and?pharmaceutical?preparations?of?Radix?Astragali.

Keywords：Astragalus?englerianus;?root;?polysaccharides;?quantitative?determination

黃芪為滋補(bǔ)類傳統(tǒng)中藥，性微溫、味甘，主要含黃芪皂苷類、多糖類和黃酮類生物活性物質(zhì)，具有增強(qiáng)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、促進(jìn)機(jī)體代謝和抗疲勞等作用，在抗腫瘤、抗病毒等方面也有顯著功效[1-4]。黃芪藥材原植物為黃芪屬植物膜莢黃芪Astragalus?membranaceus?（Fisch.）?Bge.或蒙古黃芪A.?membranaceus?（Fisch.）?Bge.var.?mongholicus?（Bge.）?Hsiao[5]，這兩種植物在云南無天然分布。然而，由于云南在地理、氣候等方面的多樣性，致使該地區(qū)黃芪屬植物種類十分豐富，許多分布于云南的黃芪屬植物在民間被當(dāng)作草藥廣泛應(yīng)用，部分種類甚至被用作正品黃芪代替品[1]。其中，在《中華本草》上稱之為“野黃芪”的長果頸黃芪（A.?englerianus）就被認(rèn)為具有與黃芪相似的功效[1]。長果頸黃芪主要分布于云南和西藏東南部，生于海拔2000～3700米的山坡林緣，是少數(shù)幾個(gè)在大理及周邊地區(qū)具有廣泛分布的黃芪屬植物之一。民間調(diào)研發(fā)現(xiàn)，大理白族地區(qū)亦將其代黃芪藥用，但對(duì)其現(xiàn)代研究認(rèn)識(shí)卻非常有限。本團(tuán)隊(duì)前期研究發(fā)現(xiàn)，該植物富含具有殺寄生蟲和抗氧化活性的黃酮等酚性成分，以及甾醇類化合物[6-9]。另據(jù)報(bào)道，黃芪多糖是黃芪的有效成分之一，現(xiàn)代藥理研究表明其具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、改善心血管功能、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂、肝保護(hù)、神經(jīng)保護(hù)以及治療糖尿病等作用[10，11]。為進(jìn)一步考察長果頸黃芪藥用品質(zhì)相關(guān)物質(zhì)基礎(chǔ)，本文采用硫酸-蒽酮法對(duì)其多糖含量進(jìn)行了測定，為更好地開展白族藥用植物研究以及開發(fā)長果頸黃芪資源提供科學(xué)依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?儀器與試藥?UV-T6紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用有限責(zé)任公司）;80-2臺(tái)式低速離心機(jī)（上海醫(yī)療器械（集團(tuán)）有限公司手術(shù)器械廠）;AL204電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。

葡萄糖（批號(hào)：XK13-001-2001-164II，成都化學(xué)試劑廠）;濃硫酸（批號(hào)：XK13-201-00370?008II重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司化學(xué)試劑廠）;蒽酮（批號(hào)：20071101，上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)五聯(lián)化工廠）。

長果頸黃芪（Astragalus?englerianus?Ulbr.）的根于2011年11月采自云南大理蒼山，由中國科學(xué)院昆明植物研究所向春雷博士鑒定，植物標(biāo)本（20100928-1b）存放于大理大學(xué)藥物研究所。8個(gè)正品黃芪樣品（見表1）2011年7月購于大理白族自治州主要藥材銷售公司，經(jīng)大理大學(xué)周濃副教授、肖朝江博士鑒定為正品黃芪基原植物之一膜莢黃芪Astragalus?membranaceus（Fisch.）?Bunge。

1.2?實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1?葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的配制?精密稱定?105?℃干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品?25?mg，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至250?mL容量瓶中，加水至刻度并搖勻，得對(duì)照品溶液（0.1?mg/mL）。

1.2.2?硫酸蒽酮試液的配制?精密稱取蒽酮?0.5?g，加80%的硫酸溶液500?mL使溶解，搖勻，即得。

1.2.3?標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備?分別精密吸取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8?mL，置10?mL具塞試管中，加水至2.0?mL，精密加入硫酸蒽酮溶液6?mL，搖勻，置水浴中加熱15min，取出，放入冰浴中冷卻15min，以相應(yīng)試劑為空白對(duì)照，照紫外-可見分光光度法，在625nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4?供試品溶液的配制?分別精密稱取上述黃芪樣品約2g，精密稱定，置索氏提取器中，加水80mL，熱回流提取至提取液無色，提取液轉(zhuǎn)移至100?mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取20mL，加入乙醇180mL，搖勻，4?℃放置12h，取出，離心10min（3000?r/min），傾去上清液，沉淀再加適量乙醇反復(fù)洗滌、離心2次，最后加水溶解并轉(zhuǎn)移至50?mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密量取上述溶液10?mL至50?mL容量瓶中，加水定容搖勻，即得。

1.2.5?含量測定?精密量取供試品樣品溶液各?2mL，分別置10mL具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6?mL”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含葡萄糖的重量，計(jì)算，即得（多糖含量以無水葡萄糖計(jì)）。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2?結(jié)果

2.1?標(biāo)準(zhǔn)曲線及其回歸方程的建立?按上述實(shí)驗(yàn)方法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。以吸光度值對(duì)葡萄糖濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=0.033x-0.0148（2.5～25μg/mL，r=0.9991）;表明方程的線性非常好。

2.2?長果頸黃芪和8個(gè)正品黃芪樣品多糖含量?按上述實(shí)驗(yàn)方法測得9個(gè)黃芪樣品中的多糖含量如表2所示，所有正品黃芪樣品的多糖含量均在4%以下，而大理野生的長果頸黃芪的多糖平均含量卻高達(dá)15.44%。多樣本均數(shù)兩兩比較的單因素方差分析（α=0.05，SPSS，版本19.0）結(jié)果表明：樣品2和8之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）;樣品3、5和7之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）;這兩組樣品之間以及與其他樣品之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

2.3?重復(fù)性試驗(yàn)?精密稱取同一黃芪樣品，按“1.2.4”和“1.2.5”項(xiàng)下方法，重復(fù)測定6次，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含葡萄糖的量，計(jì)算得RSD為0.12%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4?穩(wěn)定性試驗(yàn)?精密量取同一黃芪樣品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法顯色，分別在0、10、20、30、40、50、60、120?min時(shí)測定吸光度，實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，計(jì)算得RSD為0.26%，表明樣品溶液在2?h內(nèi)非常穩(wěn)定。

2.5?加樣回收率試驗(yàn)?精密稱取同一黃芪樣品約1?g，按樣品制備方法制備供試品溶液6份，各取1?mL，分別置6個(gè)10?mL具塞試管中，每管再精密加入對(duì)照品溶液1.0?mL，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6?mL”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含葡萄糖的重量，計(jì)算回收率（見表3）。樣品回收率為95.94%，RSD為1.19%，表明本法準(zhǔn)確可行。

3?討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，白族藥用植物長果頸黃芪根多糖平均含量高達(dá)15.44%，與正品黃芪（平均2.81%）差異十分顯著，約5.5倍于正品黃芪。僅從多糖含量角度來看，大理野生長果頸黃芪的品質(zhì)可能優(yōu)于正品黃芪。但多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，因此該差異是否能影響黃芪的正常功效，有待進(jìn)一步研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)大理州市售黃芪的多糖含量在1.81%～3.86%之間，表明各銷售公司的黃芪在品質(zhì)上存在一定差異。

另外，本實(shí)驗(yàn)采用的方法為《中國藥典》靈芝項(xiàng)下用于靈芝多糖含量測定的硫酸-蒽酮法[5]。研究結(jié)果表明該法在測定黃芪多糖含量測定中顯示出較高的精密度，以及較好的穩(wěn)定性和回收率，因此該法亦可用于黃芪藥材、炮制品以及含黃芪制劑的多糖含量控制。

參考文獻(xiàn)

[1]國家中醫(yī)藥管理局，?《中華本草》編委會(huì).中華本草（第11卷）[M].?上海：?上?？萍汲霭嫔?，?1999：?335-355.

[2]Jung?Y，?Jerng?U，?Lee?S.?A?systematic?review?of?anticancer?effects?of?Radix?Astragali?[J].?Chin?J?Integr?Med，?2016，?22（3）：?225-236.

[3]AUYEUNG?K?K，?HAN?Q?B，?KE?J?K.?Astragalus?membranaceus：?a?review?of?its?protection?against?inflammation?and?gastrointestinal?cancers?[J].?Amer?J?Chin?Med，?2016，?44（1）：?1-22.

[4]Ng?Y-F，?Tang?P?C-T，?Sham?T-T，?et?al.?Semen?Astragali?Complanati：?an?ethnopharmacological，?phytochemical?and?pharmacological?review?[J].?J?Ethnopharmacol，?2014，?155（1）：?39-53.

[5]國家藥典委員會(huì).?中華人民共和國藥典（一部）[S].?北京：?中國醫(yī)藥科技出版社，?2015.

[6]邱琳，?肖朝江，?董相，?等.?長果頸黃芪根中抑制α-葡萄糖苷酶活性成分研究[J].?大理大學(xué)學(xué)報(bào)，?2017，?2（4）：?1-5.

[7]肖朝江，邱琳，徐偉，等.?長果頸黃芪化學(xué)成分和抗氧化活性研究[J].?中草藥，?2015，?46（1）：?22-27.

[8]XIAO?CJ，?ZHANG?Y，?QIU?L，?et?al.?A?new?schistosomicidal?and?antioxidative?phenylpropanoid?from?Astragalus?englerianus?[J].?J?Asian?Nat?Prod?Res，?2015，?17（7）：?772-777.

[9]XIAO?CJ，?ZHANG?Y，?QIU?L，?et?al.?Schistosomicidal?and?antioxidant?flavonoids?from?Astragalus?englerianus?[J].?Planta?Med，?2014，?80（18）：?1727-1731.

[10]PAN?S，GAO?R，WU?S.?Preparation，?characterization?and?hypolipidaemic?activity?of?Astragalus?membranaceus?polysaccharide?[J].?J?Funct?Foods，?2017，?39：?264-267.

[11]JIN?M，?ZHAO?K，HUANG?Q，?et?al.?Structural?features?and?biological?activities?of?the?polysaccharides?from?Astragalus?membranaceus?[J].?Int?J?Biol?Macromol，?2014，?64（2）：?257-266.

（收稿日期：2019-09-14?編輯：劉?斌）