張璐 魏韜 周晶琳 王祥美 白清杰 劉廣旭 楊靜波 ?；刍?/p>

肝臟是最重要的解毒器官，承擔(dān)著人體重要物質(zhì)的合成和代謝，并參與能量生成和轉(zhuǎn)換[1]。肝損傷是人類(lèi)常見(jiàn)的疾病，嚴(yán)重影響人類(lèi)的健康。臨床上，肝切除術(shù)后的順利恢復(fù)主要取決于殘余肝的迅速再生能力以及肝功能的迅速恢復(fù)能力[2]，同時(shí)肝癌合并肝硬化的比率較高，在50%～85%之間，嚴(yán)重影響肝臟的再生能力和儲(chǔ)備功能[3]。肝切除術(shù)與門(mén)靜脈結(jié)扎術(shù)結(jié)合應(yīng)用，是一種簡(jiǎn)單、安全、有效的方法[4]。肝切除小鼠模型是研究人類(lèi)肝切除術(shù)的有效路徑，可以為研究肝臟代謝、急性肝損傷、肝腫瘤、肝臟再生以及肝臟移植等方面提供技術(shù)平臺(tái)。

1 儀器和藥品

生物安全柜（博科11231BBC86）、狗兔二用解剖臺(tái)（漢博BXT-2），手術(shù)燈、電子秤、鼠籠、小鼠固定用泡沫磚、大頭針、固定線(xiàn)、注射器、針頭、手術(shù)刀、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、眼科剪、蚊式止血鉗、眼科鑷、培養(yǎng)皿、縫針、非吸收性外科縫線(xiàn)、無(wú)菌紗布、無(wú)菌棉球、一次性使用滅菌橡膠外科手套。生理鹽水（科倫）、醫(yī)用酒精（利爾康）、碘伏（安捷）、烏拉坦（阿拉?。5]。

2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本實(shí)驗(yàn)中使用的小鼠均來(lái)源于牡丹江醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。小鼠雌雄隨機(jī)，體質(zhì)量為20～25 g。飼養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境中，溫度控制在（22.0±2.0）℃，飼喂普通飼料，自由進(jìn)食、進(jìn)水。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 小鼠的捉拿、麻醉和固定

事先用注射器抽取已配置好的麻醉藥物20%烏拉坦按0.5 mL/100 mg劑量備用。隨機(jī)選取禁食過(guò)夜12小時(shí)的小鼠，左手持手術(shù)鑷夾住小鼠尾部將其從鼠籠中取出，捉拿時(shí)用右手提起小鼠尾后部，旋轉(zhuǎn)至?xí)?，隨后將其置于電子秤上的燒杯中稱(chēng)重，讀取數(shù)值。麻醉時(shí)用右手提起小鼠尾部將其置于鼠籠蓋或其他粗糙表面上，以使其后肢懸空，僅允許其前肢著地，在小鼠向前爬行的同時(shí)，左手握拳，用拇指和食指抓緊小鼠雙耳和頭頸部的被毛。然后翻轉(zhuǎn)手腕部使手背向下，此時(shí)小鼠仰臥位固定于左手中，并確保小鼠頭部向下傾斜。本實(shí)驗(yàn)采用腹腔注射，穿刺部位選擇在下腹部左側(cè)，該部位無(wú)重要器官。麻醉前使小鼠腹部向上，將注射器針頭與其腹中線(xiàn)成45°，在選定的部位刺入腹腔，刺入時(shí)需與腹部皮膚呈20°。刺入腹腔時(shí)，術(shù)者會(huì)感覺(jué)阻力突然減小，此時(shí)應(yīng)抽回針?biāo)?，確定針頭未刺入小腸、膀胱或血管后，再緩慢注入藥物。固定前先用醫(yī)用膠帶將小鼠固定用泡沫磚固定于狗兔二用解剖臺(tái)上，然后將四只大頭釘分別固定于泡沫磚的兩個(gè)側(cè)面，作為小鼠的手術(shù)臺(tái)。將麻醉好的小鼠仰臥位固定于泡沫磚上，四肢用固定線(xiàn)分別系于泡沫磚側(cè)面的4只大頭釘上。頭部用固定線(xiàn)系住小鼠門(mén)齒固定于泡沫磚頂端大頭釘上[6-7]。

3.2 手術(shù)操作

手術(shù)器械手術(shù)前均需高壓滅菌。先用手術(shù)剪剪去小鼠腹部被毛，采用醫(yī)用酒精對(duì)其腹部皮膚進(jìn)行消毒，其上鋪紗布。助手雙手持止血鉗夾持腹部正中線(xiàn)兩側(cè)的皮膚并盡量向上提起，防止傷及臟器，術(shù)者用手術(shù)剪自劍突下剪開(kāi)被毛3 cm左右，然后同樣用手術(shù)剪自劍突下剪開(kāi)腹部皮膚和肌肉組織3 cm左右，使用蚊式止血鉗牽拉腹腔切口兩側(cè)，暴露小鼠腹腔后可見(jiàn)肝臟。小鼠肝臟可分為四個(gè)解剖功能單位，包括中葉、左外葉、右葉和尾葉。其中，中葉又可分為左中葉和右中葉，左中葉覆蓋于左外葉之上；右葉又可分為右上葉和右下葉，右上葉被覆于右中葉之下，右下葉與右腎相鄰；尾葉根據(jù)與下腔靜脈的關(guān)系又可分為前尾葉和后尾葉，尾狀突貼合下腔靜脈，一般很少出現(xiàn)。辨別清晰結(jié)構(gòu)后，方可游離肝臟周?chē)捻g帶和肝臟各葉。切除肝左外葉：使用手術(shù)剪剪開(kāi)鐮狀韌帶至下腔靜脈前方，將左外葉韌帶和部分左側(cè)冠狀韌帶抬起，游離肝左外葉。取1號(hào)手術(shù)線(xiàn)置于肝臟臟面，剪開(kāi)肝胃韌帶并繞過(guò)左外葉，在肝臟膈面靠近根部位置結(jié)扎后剪下左外葉。切除肝左中葉和右中葉：抬起肝左中葉和右中葉，1號(hào)線(xiàn)從臟面繞過(guò)，靠近膈面根部位置結(jié)扎后剪下這兩葉。肝部結(jié)扎切除完成，檢查無(wú)出血后，以0號(hào)手術(shù)線(xiàn)迅速縫合腹部切口，并注射抗生素，術(shù)后小鼠蘇醒后確保其能正常進(jìn)食、進(jìn)水，定時(shí)觀察小鼠生存情況[8-9]。

4 總結(jié)

部分肝切除是造成肝臟機(jī)械性損傷的一種方法，使用小鼠作為研究對(duì)象比較經(jīng)濟(jì)。結(jié)扎切除肝臟左外葉、左中葉和右中葉，切除量約占總肝量的68%，術(shù)后7天內(nèi)小鼠均存活。本研究初步探討并成功建立70%肝切除小鼠模型的方法。以此研究為基礎(chǔ)，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法，提高操作技能，減少或消除各種術(shù)中及術(shù)后并發(fā)癥如出血、 膽漏、 腔靜脈狹窄等情況的發(fā)生概率，提高小鼠存活率，探索建立穩(wěn)定的且成功率較高的肝切除小鼠模型[10-12]。結(jié)合術(shù)后小鼠肝損傷程度及生存狀況，使用70%肝切除模型用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。本研究雖然成功建立了小鼠肝損傷模型，但由于肝損傷的可逆性，與臨床上由于病毒和有毒物質(zhì)引起的急性肝損傷有所不同，因此今后可以此次研究數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，增加肝臟應(yīng)激如使用CCL4、酒精等物質(zhì)制備肝損傷小鼠模型，進(jìn)而研究和篩選保肝藥物，探索保肝作用機(jī)理。