孟祥文

【摘要】 本文依據(jù)JJG 861-2007《酶標(biāo)分析儀》檢定規(guī)程和JJF 1059.1-2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》，分析了可能影響酶標(biāo)分析儀吸光度示值誤差測(cè)量結(jié)果的各不確定度分量的主要來(lái)源，給出了不確定度的評(píng)定過(guò)程。

【關(guān)鍵詞】 酶標(biāo)分析儀;吸光度;不確定度

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2019.01.007

Abstract： According to the verification regulation of JJG 861-2007 ELISA Analytical Instruments and JJF 1059.1-2012 Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement，the main sources of uncertainty which may affect the absorbance measurement result of the ELISA analytical iInstruments were analyzed，and the evaluation process of uncertainty was given in this paper.

Key words： ELISA analytical instruments;absorbance;uncertainty

1 測(cè)量過(guò)程

在酶標(biāo)分析儀檢定規(guī)程規(guī)定條件下，儀器開(kāi)機(jī)預(yù)熱后，依次設(shè)置儀器波長(zhǎng)為405 nm、450 nm、492 nm、620 nm，然后將吸光度標(biāo)稱值為1.0 A的光譜中性濾光片平放在微孔酶標(biāo)板的空板架上，以空氣為參比，連續(xù)測(cè)量3次，得到吸光度示值平均值，該平均值與相應(yīng)波長(zhǎng)下的吸光度標(biāo)準(zhǔn)值之差，即為吸光度的示值誤差。

2 數(shù)學(xué)模型

3 各輸入量的標(biāo)準(zhǔn)不確定度評(píng)定

3.1 輸入量[A]的標(biāo)準(zhǔn)不確定度[u（A）]評(píng)定

輸入量[A]的不確定度主要來(lái)源于酶標(biāo)分析儀的示值不穩(wěn)定性，可以在重復(fù)性試驗(yàn)條件下，通過(guò)連續(xù)測(cè)量獲得，采用A類方法評(píng)定。也可以根據(jù)檢定規(guī)程中規(guī)定的示值穩(wěn)定性要求，采用B類方法評(píng)定?，F(xiàn)在分別用上述兩種方法進(jìn)行不確定度分析。

1）以上海科華實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司生產(chǎn)的型號(hào)為ST-360的酶標(biāo)分析儀為例，設(shè)置儀器波長(zhǎng)為492 nm，選擇吸光度標(biāo)稱值1.0 A的光譜中性濾光片，連續(xù)測(cè)量3次，得到數(shù)據(jù)如下：1.033、1.031、1.032，采用極差法計(jì)算實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)差。測(cè)量次數(shù)[n=3]時(shí)，極差系數(shù)C為1.69，計(jì)算實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)差為：

另外任意選擇3臺(tái)相同類型的酶標(biāo)分析儀，每臺(tái)分別在波長(zhǎng)405 nm、450 nm、492 nm、620 nm條件下，測(cè)定吸光度標(biāo)稱值為1.0 A的光譜中性濾光片，連續(xù)測(cè)定3次，共得到12組測(cè)量列，每組測(cè)量列分別按上述方法計(jì)算單次實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)差，所得結(jié)果見(jiàn)表1。

合并樣本標(biāo)準(zhǔn)偏差為：

實(shí)際測(cè)量時(shí)是在重復(fù)性條件下，連續(xù)測(cè)量3次，以3次測(cè)得的算術(shù)平均值為測(cè)量結(jié)果，則測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量為：

自由度為：

2）JJG 861-2007《酶標(biāo)分析儀》檢定規(guī)程中所規(guī)定的示值穩(wěn)定性應(yīng)不大于±0.005 A，假設(shè)在該范圍內(nèi)均勻分布，則由示值穩(wěn)定性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

3.2 輸入量[As]的標(biāo)準(zhǔn)不確定度[u（As）]評(píng)定

輸入量[As]的標(biāo)準(zhǔn)不確定度主要由光譜中性濾光片的定值不確定度及其年變化量所引入，屬于B類標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

3.2.1 光譜中性濾光片的定值不確定度[u（As1）]

根據(jù)光譜中性濾光片校準(zhǔn)證書給出的吸光度定值的擴(kuò)展不確定度為0.011 A，包含因子[k=2]，則標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

3.2.2 光譜中性濾光片的年變化量[引入的不確定度][u（As2）]

根據(jù)相關(guān)資料，光譜中性濾光片的年變化量為0.004 A，取均勻分布，則標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

3.2.3 輸入量As的標(biāo)準(zhǔn)不確定度[u（As）]

由于以上二項(xiàng)分量相互獨(dú)立不相關(guān)，將其合成，得到輸入量[As]的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

4 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

輸入量[A]與輸入量[As]相互獨(dú)立不相關(guān)，故合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

5 擴(kuò)展不確定度

取包含因子[k=2]，則擴(kuò)展不確定度為：

6 測(cè)量不確定度報(bào)告

酶標(biāo)分析儀吸光度示值誤差測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度為：

7 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，在酶標(biāo)分析儀吸光度示值誤差檢定時(shí)，其測(cè)量結(jié)果的不確定度主要來(lái)源于儀器示值穩(wěn)定性、標(biāo)準(zhǔn)器定值不確定度以及標(biāo)準(zhǔn)器年變化量，其中標(biāo)準(zhǔn)器定值不確定度的影響最大。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 測(cè)量不確定度評(píng)定與表示：JJF 1059.1-2012[S].

[2] 倪育才.實(shí)用測(cè)量不確定度評(píng)定（第5版）[M].北京：中國(guó)質(zhì)檢出版社，2016.

[3] 董艷華.酶標(biāo)分析儀示值誤差測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定[J].計(jì)量與測(cè)試技術(shù)，2012（1）：40+43.