鮑留平，黃 娟，錢 媛，張素云

（江蘇省響水縣人民醫(yī)院，1.婦科；2.病理科，江蘇 鹽城 224699）

卵巢惡性腫瘤是女性生殖器最常見的三大惡性腫瘤之一，由于早期無明顯癥狀，且缺乏有效的早期診斷方法，70%患者就診時(shí)已屆晚期，因此卵巢惡性腫瘤致死率居?jì)D科惡性腫瘤首位[1]。其中卵巢上皮性腫瘤最常見，占卵巢惡性腫瘤85%～90%。目前并無有效治療手段。

1 材料與方法

1.1 研究資料及標(biāo)本制備

收集本院2015～2018年經(jīng)病理檢查證實(shí)為卵巢惡性腫瘤的新鮮卵巢癌組織40例。取組織標(biāo)本離體后10 min內(nèi)置于液氮罐內(nèi)迅速冷凍后置-80℃保存。上調(diào)組患者年齡24～62歲，平均（35.3 0.2）歲，下調(diào)組年齡23～65歲，平均（45.2 0.4）歲，對(duì)照組年齡28～75歲，平均（48.5 0.2）歲，3組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?；颊咝g(shù)前均未接受過放療、化療或激素治療。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

①主要試劑：酪氨酸蛋白激酶A3受體抗體、免疫組化（SP）試劑盒（兔）購(gòu)自北京博奧森生物有限公司。②檢測(cè)途徑：轉(zhuǎn)染ephrinA3至卵巢癌SKOV3細(xì)胞，分為ephrinA3上調(diào)組、ephrinA3下調(diào)組及空白對(duì)照組。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中SKOV3的表達(dá)水平，Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的增殖能力及遷移能力。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組SKOV3細(xì)胞表達(dá)水平的比較

實(shí)時(shí)熒光定量P C R 檢測(cè)顯示，上調(diào)e p h r i n A 3 后SKOV3表達(dá)水平升至(86.3 2.3)%，表達(dá)水平明顯上調(diào)，未轉(zhuǎn)染對(duì)照組的表達(dá)水平(32.4 3.2)%(P＜0.05)，而下調(diào)組的表達(dá)水平(50.2 0.7)與未轉(zhuǎn)染對(duì)照組(48.5 0.2)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 各組SKOV3細(xì)胞增殖能力的比較

Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)上調(diào)組侵襲細(xì)胞數(shù)量為(79.22 0.3)個(gè)/視野，明顯高于未轉(zhuǎn)染對(duì)照組的(22.10 1.7)個(gè)/視野(P＜0.05)，而下調(diào)組的侵襲細(xì)胞數(shù)量為(25.61 2.4)個(gè)/視野，與未轉(zhuǎn)染對(duì)照組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)

2.3 各組SKOV3細(xì)胞遷移能力的比較

Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)上調(diào)組遷移細(xì)胞數(shù)量為(82.3 0.7)個(gè)/視野，明顯高于未轉(zhuǎn)染對(duì)照組的(22.5 0.8)個(gè)/視野(P＜0.05)，而下調(diào)組的遷移細(xì)胞數(shù)量為(29.50 1.3)個(gè)/視野，與未轉(zhuǎn)染對(duì)照組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討 論

Ephrin是與Eph受體結(jié)合的配體，根據(jù)對(duì)細(xì)胞膜的錨定方式將其分為Ephrin A、Eph-rin B這兩亞家族[2]，目前已有研究顯示，Eph是酪氨酸蛋白激酶受體家族最大的分支，在細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、遷移、凋亡等過程中發(fā)揮著重要的作用[3]。

EphA1作為第一個(gè)明確的受體,已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)在肝癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等多種實(shí)體瘤中表達(dá)[3]。EphA2在人黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌中表達(dá)水平也增高,而且增高水平與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移行為正相關(guān)。且本人通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)ephrinA3在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮癌基因的作用，并且可能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，與腫瘤組織的組織類型和侵襲性正相關(guān)[4]。綜上所述，Eph/Ephrin受體配體有可能成為多種腫瘤診斷和治療的新靶點(diǎn)。

為了進(jìn)一步研究ephrinA3對(duì)卵巢惡性腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移等生物特性中的作用機(jī)制，我們將ephrinA3轉(zhuǎn)染至SKOV3細(xì)胞。免疫組化檢測(cè)顯示，ephrinA3能明顯增加SKOV3細(xì)胞的侵襲及遷移能力。卵巢惡性腫瘤預(yù)后差，與腫瘤細(xì)胞侵襲能力強(qiáng)有密切關(guān)系。本研究初步證明，下調(diào)ephrinA3的表達(dá)后，SKOV3細(xì)胞的侵襲能力被顯著抑制。上調(diào)ephrinA3提高了卵巢SKOV3細(xì)胞的侵襲、增殖和遷移能力，并且抑制其凋亡，本研究初步表明，干擾ephrinA3的表達(dá)能影響卵巢癌SKOV3細(xì)胞的生物學(xué)特性。

綜上所述，下調(diào)ephrinA3表達(dá)能夠顯著抑制卵巢癌細(xì)胞SKOV3的增殖、遷移并促進(jìn)凋亡，有望為卵巢癌的臨床治療提供新的策略。但是Eph/Ephrin受體配體之間關(guān)系錯(cuò)綜復(fù)雜，且在不同部位腫瘤中表達(dá)高低不同。因此研究其在惡性腫瘤中的作用機(jī)制將為今后腫瘤的診療方向提供新的線索。