湛玉霞，羅光華

(蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院，江蘇常州213000)

隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，基因在疾病診治中發(fā)揮著越來越重要的作用。從基因與疾病的關(guān)聯(lián)、微生物檢測(cè)到耐藥基因篩查，基因檢測(cè)已成為臨床常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目之一?；驕y(cè)序技術(shù)是基因檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，該技術(shù)通過Sanger脫氧測(cè)序法等不同方法呈現(xiàn)待檢基因的堿基序列，為精確的疾病診斷和病因分析提供依據(jù)[1]。但基因測(cè)序技術(shù)檢測(cè)周期偏長、成本偏高，而且需要特殊的儀器設(shè)備，難以普及應(yīng)用。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)利用DNA在DNA聚合酶作用下按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成子代DNA，在配置合適反應(yīng)體系后，選擇最佳反應(yīng)溫度，通過變性、退火、延伸三個(gè)基本步驟，經(jīng)過約25個(gè)循環(huán)就能在體外完成少量靶序列的大量擴(kuò)增[2]。PCR技術(shù)不需要昂貴的儀器和試劑，操作簡單，檢測(cè)周期短，適用于臨床標(biāo)本的大規(guī)模篩檢。傳統(tǒng)PCR的單管單基因檢測(cè)存在出通量過小、大批量多基因檢測(cè)耗時(shí)長的弊端。隨著科技的進(jìn)步，PCR方案不斷創(chuàng)新和優(yōu)化，兼具普通PCR簡單高效和高通量的優(yōu)點(diǎn)的多重PCR在基因檢測(cè)領(lǐng)域備受關(guān)注。多重PCR是指單管中放置2對(duì)及以上的不同特異性引物同時(shí)擴(kuò)增2種以上的靶基因，是實(shí)現(xiàn)高通量PCR檢測(cè)的基礎(chǔ)[3]。由于多重PCR技術(shù)在多對(duì)引物存在的情況下，擴(kuò)增所得常常出現(xiàn)混合產(chǎn)物的情況，產(chǎn)生了產(chǎn)物鑒定方案上的分歧。因此根據(jù)產(chǎn)物鑒定方法的不同，將高通量PCR技術(shù)分為開管檢測(cè)PCR和閉管檢測(cè)PCR。本文將對(duì)這兩大類高通量PCR檢測(cè)技術(shù)的研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述。

1 開管高通量PCR檢測(cè)技術(shù)

開管檢測(cè)高通量PCR技術(shù)在目的基因擴(kuò)增完成后，需要將反應(yīng)管打開取出產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。開管產(chǎn)物檢測(cè)主要采用電泳法、質(zhì)譜法或測(cè)序法等。

1.1 多重PCR-電泳聯(lián)用檢測(cè)技術(shù)

1.1.1 多重PCR-瓊脂糖凝膠電泳聯(lián)用技術(shù) 瓊脂糖凝膠電泳法鑒定PCR產(chǎn)物是應(yīng)用最多、使用歷史最長的方法[4]。其原理和操作都很簡單，即在緩沖體系合適的瓊脂糖凝膠點(diǎn)樣孔中加入多重PCR產(chǎn)物，選取適宜的電壓電泳一段時(shí)間后，對(duì)凝膠板染色拍照并進(jìn)行圖像分析，利用核酸分子在電泳過程中的電荷或分子篩效應(yīng)等對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分離和檢測(cè)[5]。產(chǎn)物條帶有定性和半定量的作用。多重PCR-瓊脂糖凝膠電泳聯(lián)用技術(shù)在基因檢測(cè)領(lǐng)域應(yīng)用范圍較廣，主要用于基因表達(dá)檢測(cè)。

相較于基因測(cè)序，凝膠電泳成本低、操作簡單，有定性和半定量兩種功能，實(shí)用性強(qiáng)。根據(jù)所要分析樣本的不同還可以對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行調(diào)整。但是瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果準(zhǔn)確性對(duì)操作人員的技術(shù)規(guī)范依賴程度高，點(diǎn)樣過程出現(xiàn)點(diǎn)樣不均、移液槍槍頭殘留對(duì)產(chǎn)物量的判斷影響很大，而且由于是開管操作，PCR產(chǎn)物造成實(shí)驗(yàn)室污染的風(fēng)險(xiǎn)較大，所以在批量樣本檢測(cè)中存在弊端[6]。

1.1.2 多重PCR-毛細(xì)管電泳聯(lián)用技術(shù) 開管檢測(cè)高通量PCR檢測(cè)技術(shù)中，采取PCR-毛細(xì)管電泳聯(lián)用方案提高通量的技術(shù)有很多，如GeXP多重PCR、多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)等。毛細(xì)管電泳法是一種新型高效液相分離方法，融合了普通電泳和色譜的技術(shù)，通過電泳淌度、電滲淌度，具有高通量、高效、快速分離鑒別待測(cè)樣品的優(yōu)勢(shì)。

1.1.2.1 多重連接依賴式探針擴(kuò)增PCR技術(shù) 多重連接依賴式探針擴(kuò)增(MLPA)PCR技術(shù)的特點(diǎn)在于獨(dú)特的引物設(shè)計(jì)使得只有互補(bǔ)良好時(shí)才能完成PCR擴(kuò)增[7]。MLPA引物包括連接引物和PCR引物，其中連接引物由一個(gè)長引物和一個(gè)短引物組成，長引物分為雜交序列區(qū)、M13源序列和PCR引物結(jié)合序列，短引物為PCR引物結(jié)合序列和雜交序列區(qū)域[8]。雜交序列區(qū)的作用是與靶序列結(jié)合，長引物及短引物分別結(jié)合在靶基因兩端，僅在雜交情況良好時(shí)才能通過連接酶將引物之間的空缺填補(bǔ)，才能生成第一鏈產(chǎn)物[9]。第一鏈產(chǎn)物合成后，PCR引物與連接引物上的PCR引物結(jié)合序列區(qū)雜交，引導(dǎo)完成PCR擴(kuò)增。當(dāng)發(fā)生基因缺失時(shí)，長短引物的雜交序列區(qū)無法被連接酶連接。產(chǎn)物鑒別使用毛細(xì)管電泳法，根據(jù)峰值對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定性和半定量。MLPA PCR技術(shù)能夠同時(shí)檢測(cè)40多種核苷酸序列的拷貝變化[8, 10]，主要應(yīng)用于遺傳學(xué)領(lǐng)域，用于檢測(cè)染色體數(shù)目異常、基因片段缺失或重排等。

MLPA技術(shù)對(duì)引物的改進(jìn)是其突出特點(diǎn)也是優(yōu)勢(shì)，長引物的設(shè)計(jì)使得其具體長度可以人為進(jìn)行調(diào)試，方便最后產(chǎn)物的鑒定。MLPA引物兩端PCR引物序列均相同的設(shè)計(jì)使得在PCR擴(kuò)增程序中，添加一對(duì)引物就能同時(shí)擴(kuò)增多種基因，結(jié)合毛細(xì)管電泳法的優(yōu)勢(shì)，產(chǎn)物直接利用峰值進(jìn)行定性和半定量，更為簡便迅速，經(jīng)濟(jì)效益也得到提高。但該技術(shù)也存在電泳法鑒定產(chǎn)物的污染風(fēng)險(xiǎn)問題。

1.1.2.2 GeXP多重PCR技術(shù) GeXP多重PCR擴(kuò)增是在每一對(duì)特異性引物末端添加一段稱之為通用標(biāo)簽的核酸序列。每一對(duì)正義引物和反義引物的標(biāo)簽序列不同，但不同類別的正義引物的標(biāo)簽序列相同，不同反義引物的標(biāo)簽序列也相同。根據(jù)PCR的反應(yīng)原理，擴(kuò)增后產(chǎn)物兩條鏈5′端會(huì)分別帶上正義反義引物上的標(biāo)簽序列。此時(shí)通用標(biāo)簽就能發(fā)揮保證在多重PCR體系中各個(gè)靶基因達(dá)到等效擴(kuò)增的作用，優(yōu)化多重PCR的擴(kuò)增效率。隨后利用毛細(xì)管電泳技術(shù)，分析待測(cè)產(chǎn)物的大小。GeXP多重PCR的探針設(shè)計(jì)靶向于通用標(biāo)簽，在PCR產(chǎn)物純化后，可以通過收集熒光信號(hào)，判斷反應(yīng)體系中產(chǎn)物量的多少，根據(jù)熒光信號(hào)的強(qiáng)度反映監(jiān)測(cè)樣本中的基因數(shù)目。GeXP多重PCR技術(shù)在病原體檢測(cè)分型領(lǐng)域應(yīng)用較多，如呼吸道病毒[11]、手足口病病毒、人乳頭狀病毒篩查分型[12]等。

GeXP多重PCR擴(kuò)增技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)包括：GeXP多重PCR技術(shù)通量大，應(yīng)用范圍廣；通用標(biāo)簽的應(yīng)用使得各個(gè)產(chǎn)物之間可以達(dá)到等效擴(kuò)增；將熒光和電泳結(jié)果結(jié)合，能夠完成定性和定量。該技術(shù)的缺點(diǎn)是PCR產(chǎn)物在開蓋操作過程中容易飛出而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室污染，易產(chǎn)生假陽性。

1.2 多重PCR-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) PCR技術(shù)與質(zhì)譜技術(shù)相結(jié)合，直接將產(chǎn)物或者處理后的目的片段加入質(zhì)譜儀完成產(chǎn)物鑒定。

1.2.1 質(zhì)量標(biāo)簽PCR(Mass-tag PCR)技術(shù) Mass-tag PCR是一種在引物末端添加質(zhì)量標(biāo)簽的PCR技術(shù)。引物設(shè)計(jì)合理時(shí)，其PCR反應(yīng)體系中可以加入15對(duì)以上的引物，有研究提示這種PCR技術(shù)能夠同時(shí)擴(kuò)增30種左右的靶基因序列。Mass-tag PCR技術(shù)對(duì)每一個(gè)特異性引物的5′末端進(jìn)行修飾后與質(zhì)量標(biāo)簽連接，形成一種可以被光剪切的特殊共價(jià)鍵。每一對(duì)引物的正義引物與反義引物所帶的質(zhì)量標(biāo)簽不同。Mass-tag PCR每一個(gè)引物所帶的質(zhì)量標(biāo)簽都是獨(dú)特的。在PCR擴(kuò)增時(shí)，由于特異性引物帶有質(zhì)量標(biāo)簽，產(chǎn)物也具有與相應(yīng)引物相同的質(zhì)量標(biāo)簽。擴(kuò)增完成后，將產(chǎn)物進(jìn)行純化，去除原反應(yīng)體系中多余的成分，避免未參與反應(yīng)的引物標(biāo)簽對(duì)檢測(cè)帶來干擾。純化后的產(chǎn)物經(jīng)過紫外照射，收集兩端的被切割下來的質(zhì)量標(biāo)簽，用質(zhì)譜儀進(jìn)行分選[13]。Mass-tag PCR主要用于微生物病原體的篩檢，能夠同時(shí)篩檢多種病原體，減少臨床漏診率。

Mass-tag PCR具有以下優(yōu)點(diǎn)：獨(dú)特的質(zhì)量標(biāo)簽起到定性、半定量的作用；這種標(biāo)簽不存在和目的基因或其他引物非特異性雜交的現(xiàn)象；不需要額外的探針；可以選用的質(zhì)量標(biāo)簽種類多，只要設(shè)計(jì)的引物合適，就能達(dá)到比較大的檢測(cè)通量。該技術(shù)的缺點(diǎn)在于操作過程中涉及3個(gè)開蓋步驟，分別是在純化、標(biāo)簽剪切、質(zhì)譜3個(gè)環(huán)節(jié)中，容易造成產(chǎn)物污染。再者，質(zhì)量標(biāo)簽的采用對(duì)引物設(shè)計(jì)和儀器設(shè)備具有特殊要求。

1.2.2 PCR-Mass ARRAY聯(lián)用高通量PCR技術(shù) Mass ARRAY核心檢測(cè)技術(shù)是基質(zhì)輔助激光解吸電離(MALDI)飛行時(shí)間質(zhì)譜。先通過基本的PCR反應(yīng)原理對(duì)樣本進(jìn)行擴(kuò)增，再采用堿基延伸法等獲得產(chǎn)物，最后的檢測(cè)對(duì)象是靶基因的延伸引物序列或者產(chǎn)物中通過酶切獲得的核酸片段。待檢產(chǎn)物經(jīng)過MALDI的軟電離技術(shù)的處理后，通過飛行時(shí)間質(zhì)譜儀中的飛行時(shí)間對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量[14]。Mass ARRAY不需借助標(biāo)簽而是直接對(duì)產(chǎn)物中的序列進(jìn)行鑒別，檢測(cè)更為直接，減少了假陽性率，且兩大技術(shù)聯(lián)用可以對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行定性、定量，可用于病原體鑒別分型、基因突變檢測(cè)等，功能十分強(qiáng)大。該技術(shù)也存在開蓋操作的潛在污染風(fēng)險(xiǎn)問題，除此之外還有特殊的儀器設(shè)備需求。

1.3 多重PCR-基因測(cè)序聯(lián)用技術(shù) 基因測(cè)序技術(shù)能夠?qū)⒋龣z樣本的具體序列檢測(cè)出來，已知序列和未知序列均可檢測(cè)，是基因檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。隨著基因測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，通量和效益性不斷提高，PCR產(chǎn)物采用基因測(cè)序的方式也是檢測(cè)準(zhǔn)確性和可靠性最高的方法之一。以Sanger脫氧測(cè)序法為主的第一代測(cè)序依賴PCR擴(kuò)增，測(cè)序讀長較長，準(zhǔn)確度較好但成本高，檢測(cè)周期偏長；第二代測(cè)序采用測(cè)序芯片法，極大提高了檢測(cè)通量，降低了測(cè)序成本，但缺點(diǎn)是測(cè)序讀長偏短；第三代測(cè)序?yàn)閱畏肿覦NA測(cè)序法，技術(shù)未完全成熟，但已經(jīng)具備測(cè)序讀長很長、可直接檢測(cè)甲基化等表觀修飾位點(diǎn)等優(yōu)勢(shì)[15]；第四代測(cè)序納米測(cè)序法是融合納米技術(shù)的創(chuàng)新性極高的一種測(cè)序方法，尚未發(fā)展成熟，很多環(huán)節(jié)尚處于實(shí)驗(yàn)室開發(fā)階段[16, 17]。可以看出，第三代、第四代基因測(cè)序還在不斷地發(fā)展和完善當(dāng)中，發(fā)展較為成熟的第一代測(cè)序存在檢測(cè)周期長成本較高的問題，二代測(cè)序也存在測(cè)序讀長短的問題，所以基因測(cè)序技術(shù)要在臨床廣泛應(yīng)用還需要一段時(shí)間。

2 閉管高通量PCR檢測(cè)技術(shù)

閉管PCR檢測(cè)技術(shù)在產(chǎn)物鑒定鑒別的過程中保持封閉狀態(tài)，通過高分辨熔解曲線、熒光擴(kuò)增曲線或熔解曲線分析技術(shù)等方法對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行鑒別。

2.1 單通道閉管檢測(cè)PCR技術(shù) 單通道閉管PCR技術(shù)采用的是單一的熒光染料，通過芯片或者高分辨熔解曲線的方式對(duì)混合產(chǎn)物進(jìn)行鑒別檢測(cè)。

2.1.1 多重PCR高分辨率熔解曲線法 高分辨熔解曲線的原理在于同一段靶基因不同位點(diǎn)、不同數(shù)量的堿基差異會(huì)造成DNA解鏈的差異，使得雙鏈特異性染料結(jié)合和分離的時(shí)間點(diǎn)不同，隨之出現(xiàn)高分辨熔解率曲線形狀上的差異[18]。高分辨率熔解曲線多用于基因突變、甲基化檢測(cè)、基因位點(diǎn)多態(tài)性研究等。

多重PCR高分辨熔解曲線技術(shù)檢測(cè)通量高，污染風(fēng)險(xiǎn)小，且借助曲線對(duì)產(chǎn)物性質(zhì)和量的判斷更為直觀和簡便且不需要特殊儀器，操作簡單，經(jīng)濟(jì)效益高的同時(shí)保證了檢測(cè)較好的敏感性和特異性[19]。但是，多重PCR高分辨熔解曲線技術(shù)對(duì)反應(yīng)體系要求高，體系不合適時(shí)在數(shù)量較少的堿基突變檢測(cè)中會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果，因此對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求很高。同時(shí)在堿基差異較小時(shí)，高分辨率熔解曲線上的差異十分細(xì)微，結(jié)果的準(zhǔn)確性對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)水準(zhǔn)依賴性過大，具有漏診和誤診的風(fēng)險(xiǎn)。

2.1.2 高通量PCR芯片法 PCR芯片法是一種將基因芯片技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)融合的高通量PCR技術(shù)，通常的PCR芯片是一種固相載體，所需引物固定在載體上，設(shè)立合適的定量PCR反應(yīng)體系，樣本將在微陣列上完成PCR擴(kuò)增和定量。高通量PCR芯片的載體上有數(shù)百甚至上千種特異性引物，單張高通量PCR芯片就能完成數(shù)百種目的基因的檢測(cè)，樣本量較少時(shí)也能夠完成檢測(cè)[20]。PCR芯片應(yīng)用范圍廣，可用于功能基因組研究、耐藥性檢測(cè)、病原微生物檢測(cè)等。

PCR芯片將檢測(cè)趨于集成化、耗時(shí)短、沒有太多人員操作需求，兼具基因芯片的高特異性、高通量和實(shí)時(shí)熒光定量PCR的定量功能，有較好的發(fā)展前景。PCR芯片法雖然是在實(shí)時(shí)熒光定量PCR基礎(chǔ)上建立的，但是這種集成化的PCR需要特殊儀器才能實(shí)現(xiàn)，在臨床工作中若要得到普及，其集成化和自動(dòng)化水平還需進(jìn)一步優(yōu)化。

2.2 多通道閉管檢測(cè)PCR 多通道閉管檢測(cè)PCR產(chǎn)物鑒別方法是主要是熒光擴(kuò)增曲線或熔解曲線分析技術(shù)。熒光擴(kuò)增曲線分析技術(shù)是利用不同標(biāo)記熒光在多個(gè)通道定性或定量檢測(cè)多個(gè)基因的技術(shù)，而熒光熔解曲線則是呈現(xiàn)波谷或者波峰的形態(tài)，通過判定波出現(xiàn)的位置來判斷基因產(chǎn)物。隨著不同探針和熒光染料的不斷研發(fā)，熒光曲線分析法突破了傳統(tǒng)PCR單通道的限制性。目前利用熒光熔解曲線法的PCR探針主要有雙標(biāo)記Taqman探針法、堿基猝滅探針法、雙標(biāo)記核肽酸探針法、分子信標(biāo)等。

2.2.1 多通道閉管熒光擴(kuò)增曲線分析法 熒光擴(kuò)增曲線技術(shù)多重PCR技術(shù)是一種理論上非常適用于單管多通道多基因檢測(cè)技術(shù)的方法。該技術(shù)通過分析探針在與存在差異的同一通道靶位點(diǎn)雜交和解離的溫度差異來區(qū)分產(chǎn)物的。

2.2.2 多重PCR雙標(biāo)記自身猝滅Taqman探針法 雙標(biāo)記探針與傳統(tǒng)的Taqman探針標(biāo)記原理相似，在探針兩端分別標(biāo)記一個(gè)熒光基團(tuán)和一個(gè)猝滅基團(tuán)。不同于Taqman探針，這種雙標(biāo)記探針設(shè)計(jì)為在擴(kuò)增過程中不被Taq酶剪切。雙標(biāo)記探針的猝滅基團(tuán)和熒光基團(tuán)在未與靶序列雜交時(shí)，通過兩個(gè)基團(tuán)相互靠近或者形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)造成熒光的減弱，而當(dāng)探針和靶序列相互結(jié)合時(shí)，探針展開釋放熒光信號(hào)。結(jié)合熔解曲線的原理，根據(jù)曲線波峰出現(xiàn)的溫度位置判斷產(chǎn)物類型[21]。雙標(biāo)記自身猝滅Taqman探針法在基因表達(dá)檢測(cè)、基因分型、單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)等領(lǐng)域應(yīng)用較多。

2.2.3 多重PCR堿基淬滅探針法 堿基淬滅探針法是由張俊等[22]提出和研發(fā)的僅需單標(biāo)記的特殊探針。堿基淬滅探針在設(shè)計(jì)過程中，選擇合適的末端堿基序列，后利用探針與模板結(jié)合時(shí)，核酸鏈和堿基對(duì)之間發(fā)生電子轉(zhuǎn)移和電子傳輸，從而對(duì)探針末端的熒光標(biāo)記產(chǎn)生淬滅作用的現(xiàn)象[23]。結(jié)合熒光熔解曲線分析法的原理，堿基淬滅探針法可以通過曲線波谷出現(xiàn)的溫度位置對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行鑒別。堿基淬滅探針法目前主要應(yīng)用于單核苷酸多態(tài)性、基因突變的檢測(cè)。

2.2.4 多重PCR核肽酸雙標(biāo)記自身猝滅探針 核肽酸即PNA，是一種類多肽骨架的DNA類似物，具有與DNA或RNA特異性雜交，形成穩(wěn)定的復(fù)合體的特點(diǎn)[24]。PNA作為雜交探針能夠提高基因檢測(cè)的特異性和靈敏度。

2.2.5 多重PCR分子信標(biāo)法 分子信標(biāo)是一種能夠在5′和3′端存在一段互補(bǔ)序列并自身形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)的探針，由于兩端各標(biāo)有熒光基團(tuán)和猝滅基團(tuán)，故莖環(huán)結(jié)構(gòu)時(shí)熒光猝滅。而在PCR反應(yīng)開始后，隨著溫度的升高，分子信標(biāo)雜交區(qū)域打開變成線型，與不序列結(jié)合時(shí)熒光增強(qiáng)程度不同，通過分析熒光熔解曲線的變化來鑒別產(chǎn)物，目前分子信標(biāo)技術(shù)在微生物篩檢分型應(yīng)用較多[25]。

多通道閉管PCR技術(shù)采用的熒光熔解曲線法采用多種熒光通道，使得靶基因之間更容易鑒別，由于曲線呈現(xiàn)的是波或者谷的位置，在出現(xiàn)未知基因時(shí)更容易發(fā)現(xiàn)。但是由于探針設(shè)計(jì)和試驗(yàn)方法的不同，使得這種技術(shù)難以有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，加上部分熒光熔解曲線高通量PCR技術(shù)尚在研究階段，體系優(yōu)化還未達(dá)到最佳水平，各種探針法所得結(jié)果互相的參考價(jià)值不大。

閉管檢測(cè)PCR主要利用熒光來鑒別產(chǎn)物，大大減少了產(chǎn)物污染導(dǎo)致假陽性結(jié)果的可能性。探針的不斷改良推動(dòng)了閉管檢測(cè)PCR高通量的發(fā)展，但目前閉管檢測(cè)還在不斷地完善和研發(fā)中，還需要進(jìn)一步優(yōu)化才能實(shí)現(xiàn)真正意義上的生物安全性高、簡便、快速和高通量。

3 小結(jié)

高通量PCR技術(shù)的成熟對(duì)臨床工作意義重大，有助于臨床以及流行病學(xué)的大規(guī)模高效、快速、準(zhǔn)確、低成本的人群篩查的實(shí)現(xiàn)，也是推進(jìn)個(gè)體化診療實(shí)現(xiàn)的一大助力。不同的高通量PCR技術(shù)有其獨(dú)特的反應(yīng)原理和反應(yīng)體系，各有優(yōu)劣。未來的高通量技術(shù)應(yīng)當(dāng)能夠簡便、快速、準(zhǔn)確完成大批量多基因篩查，并完成基因分型、突變位點(diǎn)檢測(cè)等等，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)滿足產(chǎn)物污染風(fēng)險(xiǎn)低，除PCR儀外，無需特殊儀器設(shè)備，最好是在閉管檢測(cè)的環(huán)境中完成檢測(cè)，能夠產(chǎn)生較高的社會(huì)效益。相信隨著科學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，高通量PCR的技術(shù)也會(huì)不斷優(yōu)化，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮更大的作用。