鄧秋艷，吳開松

(武漢大學(xué)中南醫(yī)院，武漢430071)

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，病死率居惡性腫瘤之首[1]。肺癌按病理學(xué)類型分為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌，其中NSCLC占80%～85%[2]，多數(shù)患者確診時(shí)已屬于中晚期，病死率高、治愈率低[3]。早期NSCLC患者經(jīng)手術(shù)等綜合治療后5年生存率可提高至45%～65%[4]，因此，NSCLC的早期篩查與診斷尤為重要。血清標(biāo)志物檢查具有無創(chuàng)、簡便等優(yōu)勢，成為近年肺癌早期篩查與診斷的重要手段[5]。目前常用的主要有癌胚抗原(CEA)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、糖類抗原125(CA125)、胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)、鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原(SCC)等，但以上腫瘤標(biāo)志物對肺癌的診斷尤其早期篩查與診斷的敏感度和特異度均不高，無法滿足臨床需求[6,7]。其他常用方法如影像學(xué)檢查及支氣管鏡檢查等敏感度較低，且為有創(chuàng)性檢查，患者依從性較差，對肺癌早期診斷意義也不大[8]。研究[9～15]發(fā)現(xiàn)，miRNA表達(dá)失調(diào)在惡性腫瘤患者的體液及組織中有不同的表現(xiàn)模式，與多種惡性腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)，對結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、肝癌、胃癌、鼻咽癌、骨肉瘤等的早期診斷有一定價(jià)值。盡管現(xiàn)階段NSCLC治療技術(shù)如靶向治療等不斷涌現(xiàn)，但其5年生存率并未得到改善，早期篩查與診斷是提高生存率的關(guān)鍵[16]。近年來，痰液、血液和組織中miRNA檢測越來越多地被用于腫瘤早期篩查和診斷。現(xiàn)將不同標(biāo)本miRNA檢測在NSCLC早期篩查與診斷中的應(yīng)用研究進(jìn)展作一綜述。

1 血液miRNA檢測在NSCLC早期篩查與診斷中的價(jià)值

研究[17]表明，miRNA釋放入血可能有三種機(jī)制，即從裂解的細(xì)胞中無能量被動(dòng)泄漏；在各種刺激下無微泡的miRNA視活性選擇性分泌；通過細(xì)胞衍生的微囊活化分泌。miRNA在血液中較為容易被檢測到。miR-141是miR-200家族的成員，通過結(jié)合不同的靶點(diǎn)而調(diào)控不同的信號通路，調(diào)節(jié)生理及病理?xiàng)l件下一系列的生物學(xué)進(jìn)程，對腫瘤等疾病的早期預(yù)測有重要價(jià)值。Arab等[18]采用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測34例NSCLC患者及20例健康志愿者血漿中的4種miRNA，結(jié)果顯示血漿miR-141診斷早期NSCLC特異度(82.7%)和敏感度(98.0%)較高，ROC曲線下面積為0.918，提示miR-141可作為NSCLC早期診斷的標(biāo)志物。Lv等[19]提取了20例肺腺癌患者和20例年齡、性別匹配的健康對照者血清樣品中的RNA，進(jìn)行低密度陣列分析，發(fā)現(xiàn)miR-146a、miR-222、miR-223在Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌患者中表達(dá)上調(diào)，認(rèn)為miR-146a、miR-222、miR-223可作為早期診斷肺腺癌的潛在非侵襲性生物標(biāo)志物。Heegaard等[20]研究發(fā)現(xiàn)，早期肺癌患者血清miR-146b、miR-221、let-7a、miR-155、miR-17-5p、miR-27a、miR-106a表達(dá)顯著下調(diào)，而miR-29c表達(dá)顯著上調(diào)，認(rèn)為上述miRNA檢測可能對早期肺癌的診斷有一定價(jià)值。Geng等[21]分析了早期NSCLC患者和健康人的miRNA表達(dá)譜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)5種miRNA(miRNA-20a、miRNA-145、miRNA-21、miRNA-223、miRNA-221)在NSCLC組與健康組的表達(dá)有明顯差異，可作為早期篩查與診斷NSCLC的生物標(biāo)志物，且前四者對吸煙的肺癌患者診斷價(jià)值更高。還有研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者治療前后miRNA水平也有一定變化，檢測血清miRNA還有助于NSCLC患者的早期干預(yù)及治療，間接提高患者的生存率。

miRNA聯(lián)合檢測有助于提高肺癌早期診斷的敏感度和特異度。Foss等[22]研究表明，早期NSCLC患者血清miR-1254、miR-574-5p表達(dá)上調(diào)，二者聯(lián)合檢測診斷早期肺癌的敏感度為82%、特異度為77%。Shen等[23]發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測血miR-21、miR-210、miR-486-5p可用于鑒別肺部良惡性結(jié)節(jié)，三者聯(lián)合診斷肺癌的敏感度和特異度分別為75.00%、84.95%，AUC高達(dá)0.86。Zhang等[24]發(fā)現(xiàn),肺癌患者血漿miR-145、miR-20a、miR-21、miR-223表達(dá)高于健康組，四種miRNA聯(lián)合檢測診斷早期NSCLC的敏感度和特異度分別為81.8%、90.1%，AUC為0.897。血漿或血清中miRNA檢測對NSCLC的診斷價(jià)值仍需大量臨床研究來進(jìn)一步驗(yàn)證。

2 組織miRNA檢測在NSCLC早期篩查與診斷中的價(jià)值

miRNA具有高度的保守性、時(shí)序性和組織特異性。這提示人類miRNA的分布可能決定組織和細(xì)胞的功能特異性，對組織的發(fā)育起重要作用。Ason等[25]研究表明，不同物種間mRNA表達(dá)差異越大，生理功能差別越大，而不同物種間的差別主要是由miRNA表達(dá)的時(shí)期特異性和較小程度的空間特異性引起的。Kim等[26]從13例臨床分期Ⅰ、Ⅱ期的肺腺癌患者及15例肺部良性疾病患者的支氣管肺泡灌洗液中分離出外泌體miRNA，發(fā)現(xiàn)肺腺癌組支氣管肺泡灌洗液中miR-126、Let-7a水平顯著高于良性疾病組，認(rèn)為miR-126、Let-7a檢測有助于早期肺腺癌的診斷，可能為肺癌的潛在早期診斷生物標(biāo)志物。早期肺癌往往表現(xiàn)為肺部結(jié)節(jié)樣改變，但目前的診療水平很難對大多數(shù)肺結(jié)節(jié)作出準(zhǔn)確、及時(shí)的判斷。CT檢查顯示的肺部磨玻璃樣結(jié)節(jié)改變是早期肺癌比較常見的影像學(xué)表現(xiàn)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，這類肺部結(jié)節(jié)的惡變率約為20%。He等[27]檢測了66例影像學(xué)表現(xiàn)為肺部磨玻璃結(jié)節(jié)且經(jīng)病理證實(shí)為肺腺癌的患者腫瘤組織中的miRNA，認(rèn)為檢測腫瘤組織中的hsa-miR-199a-3p、chr17_10932、hsa-miR-148a-3p、hsa-miR-210-3p、chr1_1402、hsa-miR-378d、hsa-miR-138-5p有助于輔助診斷以磨玻璃結(jié)節(jié)為表現(xiàn)的早期肺腺癌。Wang等[28]采用新一代測序技術(shù)檢測肺鱗癌患者腫瘤組織、臨近組織和正常組織樣本中的miRNA譜，發(fā)現(xiàn)miRNA表達(dá)水平與腫瘤分期和直徑密切相關(guān)，miRNA有望成為肺鱗狀細(xì)胞癌早期檢測、亞分類和靶向治療的生物標(biāo)志物。目前篩選出的組織miRNA種類較多，在臨床上被用于不同病理類型肺癌的早期診斷和篩查。

3 痰液miRNA檢測在NSCLC早期篩查與診斷中的價(jià)值

痰液是肺泡、支氣管和氣管的分泌物，成分復(fù)雜，對諸多呼吸系統(tǒng)疾病的診斷有參考價(jià)值。然而，痰液細(xì)胞學(xué)檢測對肺癌的診斷靈敏度很低。近年來，痰液的分子遺傳學(xué)研究逐漸興起，痰液中異常表達(dá)的miRNA檢測被考慮作為肺癌非侵入性診斷方法。Roa等[29]使用聚類分析法對30例研究對象(24例NSCLC患者和6例正常對照)痰液中的miR-21、miR-143、miR-155、miR-210、miR-372進(jìn)行定量分析，結(jié)果顯示五種miRNA聯(lián)合檢測診斷NSCLC的敏感度和特異度分別為83.3%和100%。Xing等[30]檢測了Ⅰ期肺鱗狀細(xì)胞癌患者和健康受試者痰樣品中的6種miRNA，其中miR-205、miR-210和miR-708表達(dá)升高，且miR-205對早期肺鱗狀細(xì)胞癌的診斷靈敏度和特異度分別為65%和90%，AUC為0.79。上述研究結(jié)果提示痰液miRNA檢測對NSCLC的早期篩查與診斷有一定價(jià)值。

人類有超過2 600種miRNA，約60%的基因受miRNA調(diào)控。隨著對miRNA作用機(jī)制的研究不斷深入，以及miRNA芯片等高通量技術(shù)手段的應(yīng)用，使人們對高等真核生物基因表達(dá)調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)理解提高到一個(gè)新水平。這也將使miRNA成為多種疾病診斷的新生物學(xué)標(biāo)志物。建立標(biāo)準(zhǔn)化的miRNA檢測體系，對實(shí)現(xiàn)未來肺癌早期篩查與診斷有重要的臨床意義。