翟子豪， 宋飏， 王俊茵， 張可俊， 孫丙華， 李靜*

(1. 四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，生物資源與生態(tài)環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川省瀕危野生動(dòng)物保護(hù)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都610065； 2. 峨眉山景區(qū)管委會(huì)，峨眉山生物多樣性保護(hù)研究所，四川峨眉山614200；3.安徽大學(xué)資源與環(huán)境工程學(xué)院，安徽省黃山生物多樣性與短尾猴行為生態(tài)學(xué)國(guó)際聯(lián)合研究中心，合肥230039)

哺乳動(dòng)物通過(guò)母體產(chǎn)道出生時(shí)，首次獲得腸道微生物(Vaishampayanetal.，2010)。隨著時(shí)間的推移，在食物、社會(huì)接觸或周?chē)h(huán)境的影響下，腸道微生物多樣性逐漸增加(Davidetal.，2014)。這些微生物之間及微生物與宿主之間形成了相互依存、相互作用的不可分割的整體。微生物菌群和宿主相互交換能量物質(zhì)、傳遞信息，在宿主的營(yíng)養(yǎng)、免疫、代謝中起重要作用(Egertetal.，2006)。隨著食物、生境等的改變，腸道微生物的組成也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化。研究表明，在不同季節(jié)(Sunetal.，2016)、圈養(yǎng)與野生(Wangetal.，2016)、不同海拔(Zhaoetal.，2018)的條件下，同種動(dòng)物的腸道微生物組成均有明顯的差異。Clayton等(2016)發(fā)現(xiàn)，野生白臀葉猴Pygathrixnemaeus和鬃毛吼猴Alouattapalliata具有明顯不同的腸道菌群，而在人工圈養(yǎng)條件下卻表現(xiàn)出了較大的相似性，在人體中占主導(dǎo)地位的普氏菌屬Prevotella和擬桿菌屬Bacteroides物種均增加。Zhao等(2018)發(fā)現(xiàn)高海拔地區(qū)的恒河猴Macacamulatta較低海拔地區(qū)的腸道微生物多樣性更高，且有多種獨(dú)有的可操作分類(lèi)單元(operational taxonomic units，OTUs)。

藏酋猴Macacathibetana，又稱毛面短尾猴、大青猴，隸屬于靈長(zhǎng)目Primates猴科Cercopithecidae獼猴屬M(fèi)acaca，是我國(guó)特有的靈長(zhǎng)類(lèi)，國(guó)家Ⅱ級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物，世界自然保護(hù)聯(lián)盟(IUCN)瀕危物種紅色名錄近危(NT)物種(Long & Richardson，2008)，《中國(guó)脊椎動(dòng)物紅色名錄》易危(VU)物種(蔣志剛等，2016)。由于適宜棲息地不斷縮小，藏酋猴現(xiàn)主要分布在四川、安徽、貴州、福建等地，分為4個(gè)亞種：指名亞種M.t.thibetana、貴州亞種M.t.guizhouensis、黃山亞種M.t.huangshanensis和福建亞種M.t.pullus(蔣學(xué)龍等，1996)。

峨眉山和黃山分別位于我國(guó)西南部和中東部地區(qū)，不同的地理位置塑造了兩地獨(dú)有的自然環(huán)境。黃山植被主要為次生常綠闊葉林，峨眉山植被以亞熱帶常綠闊葉林為主。同時(shí)，兩地都以其得天獨(dú)厚的藏酋猴資源開(kāi)展了靈長(zhǎng)類(lèi)生態(tài)旅游，并且兩地管理部門(mén)都對(duì)游客向藏酋猴的投喂行為做出了限制(黃山不允許游客投喂，由管理人員定時(shí)、定點(diǎn)、定量投食；峨眉山允許游客購(gòu)買(mǎi)特定的猴糧投喂)。目前，關(guān)于黃山、峨眉山藏酋猴的研究主要集中在棲息活動(dòng)范圍(Zhao，1994)、形態(tài)和社群行為(Zhao，1997)等方面，發(fā)現(xiàn)兩地藏酋猴的猴群大小差異較大(孫丙華等，2010)；Sun等(2016)報(bào)道了不同季節(jié)的黃山藏酋猴腸道微生物在組成和多樣性上均有顯著差異。但兩地猴群腸道微生物組成上的差異迄今尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。

本文以16SrRNA基因的V3-V4高變區(qū)為分子標(biāo)記，使用高通量測(cè)序技術(shù)研究了峨眉山藏酋猴群體的腸道微生物，并與黃山藏酋猴的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析，為揭示藏酋猴腸道微生物的特征提供資料，也為藏酋猴的保護(hù)與管理提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究地點(diǎn)和樣本信息

峨眉山位于四川省峨眉山市境內(nèi)，地理位置103°10′～103°37′E，29°16′～29°43′N(xiāo)，最高海拔3 099 m；黃山位于安徽省南部黃山市境內(nèi)，地理位置118°01′～118°17′E，30°01′～30°18′N(xiāo)，最高海拔1 864.8 m，兩地相距超1 460 km。峨眉山藏酋猴(EM)31個(gè)糞便樣本采集于生態(tài)猴區(qū)和雷洞坪，采樣時(shí)間為5月。在猴群每天出現(xiàn)的游步道守候，等待猴群進(jìn)食完畢，采集新鮮糞便，回到住所后立即置于液氮中保存。為確保所有樣本均來(lái)自不同個(gè)體，樣本間距需大于1.5 m。此外，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)室篩選的微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)一步確認(rèn)，共有25只不同個(gè)體的樣品。黃山藏酋猴(HS)樣本下載于NCBI(GenBank 登錄號(hào)：SRP073002)，共25個(gè)樣品，為黃山野生猴谷的魚(yú)鱗坑YA1群體，采樣時(shí)間為春季，測(cè)序平臺(tái)為Illumina MiSeq PE250，共產(chǎn)生290 542條高質(zhì)量序列，平均長(zhǎng)度為415.28 bp±9.81 bp(Sunetal.，2016)。

1.2 DNA提取、PCR擴(kuò)增

取糞便內(nèi)部部分，使用MoBio PowerSoil?DNA Isolation Kit(12888)提取DNA。16SrRNAV3-V4區(qū)的PCR擴(kuò)增引物為338F(5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3’)和806R(5’-GGACTACHVGGGTWTC-TAAT-3’)。反應(yīng)體系25 μL：Q5 high-fidelity DNA polymerase 0.25 μL，5×Reaction Buffer 5 μL，5×High GC Buffer 5 μL，dNTP(1×104μmol)0.5 μL，模板DNA 1 μL，正、反向引物(10 μmol)各1 μL， ddH2O 11.25 μL。PCR程序：98 ℃ 2 min；98 ℃ 15 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，27個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物使用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，使用Axygen凝膠回收試劑盒回收目的片段。采用Illumina MiSeq PE250平臺(tái)對(duì)糞便微生物群落DNA片段進(jìn)行雙向測(cè)序，原始測(cè)序數(shù)據(jù)與下載的黃山數(shù)據(jù)合并后進(jìn)行后續(xù)分析。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用Perl語(yǔ)言編寫(xiě)腳本，采用滑動(dòng)窗口法對(duì)FASTQ格式的雙端序列作質(zhì)量控制：窗口大小為10 bp，步長(zhǎng)為1 bp，從5’端第一個(gè)堿基位置開(kāi)始移動(dòng)，要求窗口中堿基平均質(zhì)量≥Q20，從第一個(gè)平均質(zhì)量值低于Q20的窗口處截?cái)嘈蛄?，且截?cái)嗪蟮男蛄虚L(zhǎng)度≥150 bp，不允許存在模糊堿基N。使用FLASH(Magoc & Salzberg，2011)對(duì)通過(guò)質(zhì)量初篩的雙端序列進(jìn)行拼接，之后根據(jù)每個(gè)樣本所對(duì)應(yīng)的Barcode序列，使用QIIME 1.9.1(Caporasoetal.，2010)將拼接后的序列按樣本分開(kāi)。擴(kuò)增子測(cè)序結(jié)果中序列重復(fù)度高，并且大量出現(xiàn)1次或幾次的序列，統(tǒng)計(jì)學(xué)和功能上意義不大。因此，使用Usearch(Edgar，2010)去冗余并過(guò)濾低豐度序列，得到非冗余序列后，調(diào)用silva.gold數(shù)據(jù)庫(kù)(Quastetal.，2013)去除嵌合體序列，之后選用Uparse算法(Edgar，2013)按97%的序列相似度進(jìn)行聚類(lèi)和OTUs劃分，并生成代表性序列。隨后，與Greengenes數(shù)據(jù)庫(kù)(Release 13.8)(McDonaldetal.，2012)比對(duì)，獲取每個(gè)OTU所對(duì)應(yīng)的分類(lèi)學(xué)信息，并生成具有注釋信息的OTUs表。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

去除豐度值低于全體樣本測(cè)序總量0.01%的OTUs(Bokulichetal.，2013)，通過(guò)mothur(Schlossetal.，2009)繪制稀疏曲線。使用Clustal Omega(Sieversetal.，2011)對(duì)代表序列進(jìn)行多序列比對(duì)，數(shù)據(jù)過(guò)濾后，使用FastTree 2.1.9(Priceetal.，2009)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。對(duì)OTUs進(jìn)行拉平處理，之后計(jì)算每個(gè)樣本的α多樣性和β多樣性。α多樣性由反映群落豐富度的ACE指數(shù)、Chao1指數(shù)，反映群落多樣性的Simpson指數(shù)、Shannon指數(shù)和反映樣品覆蓋度的Good’s coverage指數(shù)進(jìn)行評(píng)估，并通過(guò)箱線圖進(jìn)行可視化。β多樣性選擇Unweighted UniFrac距離(Lozuponeetal.，2011)對(duì)樣本進(jìn)行比較，通過(guò)主坐標(biāo)分析(principal co-ordinates analysis，PCoA)、主成分分析(principal component analysis，PCA)和樣本的UPGMA聚類(lèi)分析進(jìn)行可視化表達(dá)。使用LEfSe(Segataetal.，2011)進(jìn)行組間豐度差異的可視化，首先采用非參數(shù)因子Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)檢測(cè)組間豐度差異顯著的物種，之后對(duì)這些物種進(jìn)行成對(duì)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，最后通過(guò)線性判別分析(LDA)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行降維和評(píng)估差異顯著的物種的影響力。采用PICRUSt(Langilleetal.，2013)對(duì)序列進(jìn)行基因功能預(yù)測(cè)分析，并使用LEfSe進(jìn)行組間差異可視化。本研究中的顯著性水平檢驗(yàn)均選用單因素方差分析(One-Way ANOVA，α=0.05)。

2 結(jié)果

2.1 測(cè)序數(shù)據(jù)

經(jīng)質(zhì)量控制后，50個(gè)樣品共得到高質(zhì)量序列714 259條[(14 285條±3 274條)/樣品]，其中，EM為 423 717條，HS為290 542條，每條序列平均長(zhǎng)度為413.87 bp±12.34 bp。序列按97%相似度聚類(lèi)后得到500個(gè)OTUs，其中，EM獨(dú)有119個(gè)，HS獨(dú)有34個(gè)，兩地共有347個(gè)(分別占峨眉山和黃山的74%和91%)。按樣品最低序列數(shù)(4 203條)進(jìn)行拉平處理。Good’s coverage指數(shù)平均值為99.15%±0.14%(98.76%～99.46%)，表明99%的樣品均得到了鑒定。50個(gè)樣品的稀疏曲線趨于平緩(圖1)，表明測(cè)序數(shù)據(jù)量已覆蓋樣本中的絕大多數(shù)物種。

圖1 峨眉山藏酋猴和黃山藏酋猴各樣品稀疏曲線
Fig. 1 The rarefaction curves of each sample ofMacacathibetanabetween Mount Emei and Mount Huangshan

2.2 EM與HS腸道微生物組成

Greengenes數(shù)據(jù)庫(kù)(Release 13.8)匹配到的OTUs可劃分為9門(mén)46科79屬。其中，EM腸道中，相對(duì)豐度大于1%的門(mén)有8個(gè)：厚壁菌門(mén)Firmicutes(69.04%±11.81%)、擬桿菌門(mén)Bacteroidetes(21.59%±10.05%)、放線菌門(mén)Actinobacteria(2.73%±2.17%)、螺旋體門(mén)Spirochaetes(1.69%±2.74%)、藍(lán)藻菌門(mén)Cyanobacteria(1.49%±2.60%)、變形菌門(mén)Proteobacteria(1.27%±1.75%)、軟壁菌門(mén)Tenericutes(1.16%±1.75%)、疣微菌門(mén)Verrucomicrobia(1.00%±1.72%)，占門(mén)水平總豐度的99.97%；HS腸道中，相對(duì)豐度大于1%的門(mén)有3個(gè)：厚壁菌門(mén)(46.34%±8.15%)、擬桿菌門(mén)(36.75%±6.38%)、變形菌門(mén)(14.91%±8.06%)，占門(mén)水平總豐度的97.97%。EM腸道中，厚壁菌門(mén)與擬桿菌門(mén)相對(duì)豐度的比值(3.20)顯著高于HS(1.26，P<0.05)。在屬級(jí)水平上，EM腸道中相對(duì)豐度最高的為顫螺菌屬Oscillospira(23.49%±16.63%)，其次為普氏菌屬(19.94%±14.48%)、柔嫩梭菌屬Faecalibacterium(18.40%±12.41%)；HS腸道中相對(duì)豐度最高的為普氏菌屬(36.35%±9.15%)，其次為琥珀酸弧菌屬Succinivibrio(13.94%±11.47%)、顫螺菌屬(13.76%±10.59%)(圖2)。

為了比較兩地藏酋猴腸道微生物的差異，選用LEfSe發(fā)掘在豐度上有顯著差異的類(lèi)群。在EM中，厚壁菌門(mén)、梭菌綱Clostridia、梭菌目Clostrisiales、瘤胃菌科Ruminococcaceae和毛螺菌科Lachnospiraceae均顯著富集，主要表現(xiàn)在布勞特氏菌屬Blautia、糞球菌屬Coprococcus、顫螺菌屬、瘤胃球菌屬Ruminococcus等的增加，同時(shí)螺旋體門(mén)的螺旋體綱Spirochaetia、螺旋體目Spirochaetales、螺旋體科Spirochaetaceae、密螺旋體屬Treponema也在EM中顯著增加(|LDA score|>4且P<0.05)(圖3)。而在HS中，擬桿菌門(mén)的擬桿菌綱Bacteroidia、擬桿菌目Bacteroidales、普雷沃氏菌科Prevotellaceae、普氏菌屬，變形菌門(mén)的胃螺桿菌屬Flexispira和琥珀酸弧菌屬均顯著富集。

圖2 峨眉山與黃山藏酋猴腸道菌群中門(mén)(上)和屬(下)的相對(duì)豐度Fig. 2 Relative abundance of gut microbiome taxa on phylum (upper) and genus (bottom) category in Macaca thibetana from Mount Emei and Mount Huangshan

圖3 LEfSe分析峨眉山和黃山藏酋猴腸道微生物組成的差異Fig. 3 Analysis of gut microbial composition in Macaca thibetana from Mount Emei and Mount Huangshan based on LEfSe

A. LDA值分布柱狀圖， B. 進(jìn)化分支圖： 由內(nèi)到外輻射的圓圈代表由門(mén)至屬的分類(lèi)級(jí)別， 圓圈的大小代表相對(duì)豐度的大小， 節(jié)點(diǎn)代表起重要作用的微生物類(lèi)群， 黃色代表差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的類(lèi)群

A. LDA value distribution histogram， B. evolutionary branching diagram： the circles from the inside to the outside represent the classification level from the phylum to the genus， the size of the circle represents the relative abundance level， the node represents the important microbial group， and the yellow node represents microbiomes of no significant differences

2.3 EM與HS腸道微生物多樣性

EM的ACE指數(shù)(P<0.05)、Shannon指數(shù)(P<0.01)均顯著高于HS，而Chao1指數(shù)(P>0.05)和Simpson指數(shù)(P>0.1)雖然在EM中較高，但在組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖4)。PCA、PCoA分析結(jié)果均表明，EM與HS在第一軸均明顯分開(kāi)(圖5)。

2.4 EM與HS腸道微生物基因功能分析

PICRUSt對(duì)EM和HS微生物群落在KEGG代謝途徑的差異分析結(jié)果顯示，共匹配到41個(gè)KEGG二級(jí)代謝通路，其中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的代謝通路15個(gè)(|LDA score|>2，P<0.05)。EM顯著富集的通路5個(gè)：脂代謝、外源化學(xué)物的生物降解與代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄、膜運(yùn)輸；HS顯著富集的通路10個(gè)：多糖生物合成與代謝、核苷酸代謝、輔因子及維生素代謝、能量代謝、細(xì)胞通路和信號(hào)、細(xì)胞生長(zhǎng)與死亡、萜類(lèi)化合物及多肽代謝、氨基酸代謝、運(yùn)輸和分解代謝、信號(hào)分子與互作。

圖4 峨眉山藏酋猴和黃山藏酋猴腸道微生物α多樣性指數(shù)Fig. 4 α diversity index of gut microbiome in Macaca thibetana from Mount Emei and Mount Huangshan

圖5 基于PCA和PCoA分析峨眉山和黃山藏酋猴腸道菌群的差異Fig. 5 Difference in the gut microbiome of Macaca thibetana between Mount Emei and Mount Huangshan based on PCA and PCoA

3 討論

宿主的生活環(huán)境、飲食組成決定了其腸道微生物的組成，而腸道微生物組成的變化也反過(guò)來(lái)影響宿主的健康、食物消化、營(yíng)養(yǎng)獲取。對(duì)EM和HS腸道菌群的比較研究有利于了解動(dòng)物對(duì)不同生境的適應(yīng)性進(jìn)化，也有利于評(píng)估不同生態(tài)旅游管理模式對(duì)藏酋猴的潛在影響。本研究發(fā)現(xiàn)，EM和HS的腸道微生物組成以厚壁菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、變形菌門(mén)、放線菌門(mén)為主，符合脊椎動(dòng)物腸道微生物組成的共同特征(Deng & Swanson，2015)，也與其他非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物相似，如恒河猴(Yasudaetal.，2015)。EM和HS共有的OTUs數(shù)量分別占其總數(shù)量的74%和91%，表明藏酋猴腸道微生物群落結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定。

EM和HS腸道微生物在組成、豐度和多樣性方面存在明顯的差異。峨眉山和黃山地理位置的差異造就了兩地不同的植被分布，而這也影響著藏酋猴食物的組成。藏酋猴食性復(fù)雜，通常以枝葉、果實(shí)、樹(shù)根等為主，也取食某些昆蟲(chóng)(Bermanetal.，2007)。尤碩愚(2013)報(bào)道HS取食共計(jì)26科50種植物，主要包括禾本科Poaceae、殼斗科Fagaceae、樟科Lauraceae、杜鵑花科Ericaceae、金縷梅科Hamamelidaceae、山茶科Theaceae、豆科Leguminosae等，其中以殼斗科、樟科的取食量尤為突出，占全年總?cè)∈沉康?1.26%～59.75%。春季時(shí)，它們還偏愛(ài)取食竹筍，在食物中占據(jù)一定比例(熊成培，1984)。而EM取食的植物則高達(dá)177種，主要包括五加科Araliaceae、殼斗科、禾本科、木通科Lardizabalaceae、蕁麻科Urticaceae等，此外，EM還被觀察到取食地面小型無(wú)脊椎動(dòng)物(Zhaoetal.，1991)。食物組成上的差異可能是兩地藏酋猴腸道菌群組成和多樣性產(chǎn)生差異的主要原因。無(wú)論是評(píng)價(jià)豐富度的ACE指數(shù)還是評(píng)價(jià)多樣性的Shannon指數(shù)，EM均顯著高于HS，這可能與峨眉山豐富的食物種類(lèi)密切相關(guān)。而HS腸道中具有較高豐度的普氏菌屬，它們?cè)诜纸饫盟?、谷?lèi)和嫩葉中的半纖維素、果膠、淀粉、單糖等時(shí)發(fā)揮著重要作用(Russell & Baldwin，1979)，這可能與HS攝食更多的谷物、竹筍等有關(guān)。而EM腸道中富集的顫螺菌屬和瘤胃球菌屬則可能與食物中的高比例纖維含量相關(guān)(Jindouetal.，2006)。

峨眉山和黃山在藏酋猴生態(tài)旅游管理方式上的顯著不同也是導(dǎo)致兩地藏酋猴腸道微生物組成差異的重要原因之一。黃山為吸引藏酋猴到固定地方供游客觀賞，管理人員會(huì)每天定點(diǎn)定量喂食6 kg玉米(Mathesonetal.，2006)，人工食物已成為藏酋猴的固定食物組成；峨眉山則允許游客購(gòu)買(mǎi)指定的猴糧(主要為花生和紅薯干)自行投喂，因此，藏酋猴獲取人工食物的量會(huì)隨著季節(jié)和人流量而波動(dòng)，一般夏秋季居多，冬季最少(本實(shí)驗(yàn)調(diào)查)。長(zhǎng)期固定的人工飲食模式可能導(dǎo)致動(dòng)物腸道菌群α多樣性降低(Uenishietal.，2007)，這可能也是HS腸道菌群多樣性較EM低的原因。此外，EM具有較高豐度的厚壁菌門(mén)與較低豐度的擬桿菌門(mén)。厚壁菌門(mén)微生物攜帶許多編碼能量代謝相關(guān)酶的基因，并且可以產(chǎn)生許多消化酶來(lái)分解各種物質(zhì)，從而幫助宿主消化和吸收養(yǎng)分(Nuriel-Ohayonetal.，2016)。擬桿菌門(mén)則在蛋白質(zhì)、碳水化合物(特別是多糖)等其他能量物質(zhì)吸收方面發(fā)揮著重要作用，從而增加宿主中養(yǎng)分的利用率(Backhedetal.，2004)。研究表明，在經(jīng)常食用高脂飲食的西方人中，會(huì)出現(xiàn)厚壁菌門(mén)豐度增加、擬桿菌門(mén)豐度減少的現(xiàn)象(Filippoetal.，2010)。而高厚壁菌門(mén)、低擬桿菌門(mén)也是肥胖人群腸道菌群的重要表現(xiàn)(Clarkeetal.，2012)。腸道菌群KEGG功能分析也發(fā)現(xiàn)，EM在與脂類(lèi)代謝有關(guān)的功能通路上有更多的富集，這可能是由于峨眉山游客投喂的猴糧為花生等脂類(lèi)含量較高的食物，脂類(lèi)攝入量的增加導(dǎo)致EM腸道中厚壁菌門(mén)類(lèi)群增多，并加強(qiáng)了其對(duì)脂類(lèi)食物的代謝。此外，野外觀察也發(fā)現(xiàn)部分體型較胖的個(gè)體，但這是否與游客投喂食物有關(guān)尚需進(jìn)一步研究。

值得注意的是，在EM中發(fā)現(xiàn)了一定豐度的螺旋體門(mén)和密螺旋體屬，其通常被認(rèn)為是潛在的病原體(Schwan，1996)，可能導(dǎo)致各種慢性傳染性皮膚病，如雅司和品他病(Karlssonetal.，2013)。作為靈長(zhǎng)類(lèi)生態(tài)旅游的重要組成部分，近距離觀賞藏酋猴越來(lái)越受到追捧。在管理上，黃山實(shí)施人猴隔離，禁止人猴接觸及游客投喂；而EM則是逗留在游步道旁，與游客直接接觸，給疾病傳播提供了條件，可能給靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物和游客都帶來(lái)潛在威脅(Pedersen & Davies，2009)。KEGG功能分析也發(fā)現(xiàn)，EM腸道菌群在外源化學(xué)物的代謝與降解途徑有顯著的功能富集。外源化學(xué)物主要包括一些人工合成物或由外界環(huán)境攝入，而非機(jī)體代謝產(chǎn)生的內(nèi)源物質(zhì)。而游客與藏酋猴的直接接觸或投喂不適當(dāng)?shù)氖澄锒伎赡苁菍?dǎo)致它們?cè)谠摯x通路活動(dòng)增強(qiáng)的原因。

通過(guò)比較和分析峨眉山和黃山藏酋猴的腸道菌群組成，發(fā)現(xiàn)兩地的藏酋猴在厚壁菌門(mén)、擬桿菌門(mén)等腸道微生物組成、豐度，以及多樣性上存在顯著差異，這可能與兩地藏酋猴在食物組成、生態(tài)旅游的管理模式上的差異密切相關(guān)。本研究為藏酋猴的保護(hù)和合理開(kāi)發(fā)生態(tài)旅游提供了科學(xué)參考。

致謝：感謝峨眉山景區(qū)管委會(huì)郝國(guó)歉在采樣過(guò)程中給予的支持與幫助，謹(jǐn)此致謝。