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(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 武漢 430000)

卵巢癌是臨床上最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率有逐年升高的趨勢(shì)，已成為威脅女性健康和生存的重要?dú)⑹諿1]。卵巢癌早期患者通?？蛇M(jìn)行手術(shù)治療，但中晚期患者或發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者通常無(wú)特效的治療手段，患者預(yù)后較差[2-3]。因此，分析卵巢癌患者臨床分期及是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的相關(guān)生物分子對(duì)臨床診斷和治療具有重要的參考價(jià)值。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體是特異性的促血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，調(diào)控了細(xì)胞的增殖、分化和遷移等過(guò)程[4]；基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑參與了惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等過(guò)程，且與腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡及轉(zhuǎn)移過(guò)程密切相關(guān)[5-6]。本文分析血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及基質(zhì)金屬蛋白酶與卵巢癌臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

以本院2006年1月至2009年4月期間診治的卵巢癌患者為研究對(duì)象。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟UICC(2002年)的分期及診斷標(biāo)準(zhǔn)，140例卵巢癌患者Ⅰ期40例，Ⅱ期30例，Ⅲ期30例，Ⅳ期40例；發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移患者70例，未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移患者70例。所有患者均經(jīng)過(guò)病理學(xué)診斷確認(rèn)。卵巢癌患者年齡56～72歲，平均(64.6±10.3)歲。所有患者均知情并簽署知情同意書(shū)，并經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 分析指標(biāo)及方法

140例不同臨床分期卵巢癌患者(卵巢癌組，n=140)血清中VEGF及基質(zhì)金屬蛋白酶水平的變化，并分析發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移(發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移組)及未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移(未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移組)患者血清中上述因子水平的變化。VEGF及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體( VEGFR，vascular endothelial growth factor receptor) 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，基質(zhì)金屬蛋白酶2( metalloproteinase2，MMP-2)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自R&D公司，MMP-9(metalloproteinase9，MMP-9)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Santa Cruz公司，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1( the inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自R&D公司。檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法進(jìn)行，所有操作均按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法步驟：用移液器加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品20 μL到各自微孔中，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做兩孔平行，再按每孔80 μL加入單抗工作液，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置20 ℃恒溫箱中反應(yīng)30 min;小心揭開(kāi)蓋板膜，在洗板機(jī)上用洗滌液洗板，8孔8道，每孔250 μL，2點(diǎn)吸液，洗板5次，最后在吸水紙上將殘余液滴拍干；每孔加入酶標(biāo)二抗100 μL，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板置20 ℃恒溫箱中反應(yīng)25 min，取出重復(fù)上述洗板步驟;顯色:每孔加入底物A液50 μL，再加B液50 μL，振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后，置20 ℃恒溫箱中20 min;測(cè)定:每孔加入終止液50 μL，振蕩混勻，用雙波長(zhǎng)450 nm/630 nm檢測(cè)，測(cè)定每孔OD值。按上述程序重復(fù)操作2次，將加入100 μL酶標(biāo)二抗后的孵育時(shí)間分別改為30 min和35 min。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件完成，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，總體比較有差異再采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，相關(guān)性分析采用Spearman進(jìn)行。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同臨床分期卵巢癌患者血清中VEGF及基質(zhì)金屬蛋白酶水平變化

與對(duì)照組相比，卵巢癌組患者血清中VEGF、VEGFR、MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平均明顯升高(P<0.05)，且隨著臨床分期的增加，上述因子水平明顯升高(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移卵巢癌患者血清中VEGF及基質(zhì)金屬蛋白酶水平變化

與未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移組患者相比，發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移組患者的VEGF、VEGFR、MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平均明顯升高(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 VEGF及基質(zhì)金屬蛋白酶與臨床分期的相關(guān)性分析

VEGF及基質(zhì)金屬蛋白酶與臨床分期密切相關(guān)：VEGF、VEGFR、MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平與患者臨床分期呈明顯的正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為0.446、0.309、0.354、0.411和0.432)，見(jiàn)表3。

表1 不同臨床分期卵巢癌患者血清中VEGF及基質(zhì)金屬蛋白酶水平變化 (pg/mL)

表2 發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移卵巢癌患者血清中VEGF及基質(zhì)金屬蛋白酶水平變化 (pg/mL)

表3 VEGF及基質(zhì)金屬蛋白酶與臨床分期的相關(guān)性分析

3 討 論

卵巢癌給患者和家庭帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。中晚期卵巢癌患者治療效果差，患者的預(yù)后不盡如人意。因此，分析卵巢癌臨床分期及是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)的生物大分子對(duì)臨床診斷和治療具有重要的參考價(jià)值。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體參與調(diào)控了多種惡性腫瘤的病理及生理學(xué)過(guò)程，且可作為藥物治療的潛在靶點(diǎn)[7-8]。在分析VEGF在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及其臨床意義時(shí)也證實(shí)VEGF表達(dá)在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中增高，可能促進(jìn)子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)[9]。以往的研究也證實(shí)乳腺癌組織中VEGF均呈陽(yáng)性表達(dá)，且與乳腺癌組織的發(fā)生、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[10]，VEGF水平異常與多發(fā)性骨髓瘤患者疾病進(jìn)展及預(yù)后相關(guān)[11]。本文卵巢癌組患者血清中VEGF、VEGFR水平均明顯升高，且發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移組患者的VEGF、VEGFR水平均明顯升高，提示VEGF與卵巢癌患者臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)?；|(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑在多種惡性腫瘤中表現(xiàn)異常，且已有的證據(jù)顯示其可能與惡性腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程密切相關(guān)[12-13]。沈樹(shù)娜等[14]也指出腹水中MMP-2和MMP-9水平可能成為鑒別卵巢良惡性病變的標(biāo)記物，且與卵巢惡性腫瘤患者預(yù)后有關(guān)。基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制蛋白共同參與了細(xì)胞外基質(zhì)的重構(gòu)過(guò)程，而腫瘤細(xì)胞快速增殖的過(guò)程中伴隨有基質(zhì)的降解和重構(gòu)以適應(yīng)細(xì)胞的快速增殖，同時(shí)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移也需要基質(zhì)降解后腫瘤細(xì)胞在新的位點(diǎn)進(jìn)行基質(zhì)重構(gòu)進(jìn)而增殖形成新的病灶。這與本文中卵巢癌組發(fā)生轉(zhuǎn)移患者血清中MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平升高的結(jié)論一致。