李傳俊，張勇

（ 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 漯河 462000）

0 引言

拐棗(H.dulcis)屬鼠李科(Rhamnaceae)拐棗屬(Hovenia)植物，拐棗系鼠李科枳椇屬植物枳椇干燥成熟的種子，學(xué)名枳椇子，又名雞爪果萬壽果、木蜜、雞距子等，主要分布于湖北、陜西、廣東、福建、浙江等省，目前處于野生或半野生狀態(tài)。

拐棗在1500多年前我國(guó)已作為藥用，載于《唐本草》，藥用部分為帶有肉質(zhì)果柄的果實(shí)或種子。至近現(xiàn)代，藥用部位從枝木及花序軸發(fā)展到果實(shí)和種子，而功效基本一致[1]?！侗静菥V目》中記述:拐棗性干、平、無毒，止渴除煩，去膈上熱，利大小便，功用同蜂蜜；可解酒毒，辟蟲毒。拐棗的樹皮、葉、根、果實(shí)、種子均可藥用。

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人民生活水平的提高，飲酒已是人們生活中普遍現(xiàn)象。目前，酒精性肝病成為僅次于病毒性肝炎的第二大類肝臟疾病[2-3]，肝臟是機(jī)體乙醇代謝的主要場(chǎng)所，長(zhǎng)期大量飲酒可使乙醇在體內(nèi)慢性蓄積，酒精性肝損傷有爆發(fā)的勢(shì)頭[4]。天麻多糖[5]、北五味子藤莖總?cè)芠6]、葛花[7]、梔子油[8]、桑葚[9]、木犀草素[10]、葡萄籽原花青素[11]均具有抗酒精性肝損傷的作用。

本文通過建立小鼠急性酒精性肝損傷模型，觀察給予拐棗水提物灌胃急性酒精性肝損傷模型小鼠生化指標(biāo)的變化，研究拐棗水提物對(duì)急性酒精性肝損傷模型小鼠的保護(hù)作用，為因飲酒導(dǎo)致的肝損傷者提供具有保肝護(hù)肝功效的食物。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 試劑

拐棗水提液:低劑量（0.5mg/mL）、中劑量（1mg/mL）、高劑量（2mg/mL）；50%乙醇，分析純，鄭州市化工廠；生理鹽水，華潤(rùn)雙鶴藥業(yè)股份有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試試劑盒、丙二醛(MDA)測(cè)試試劑盒、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)測(cè)試試劑盒、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)測(cè)試試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司。

1.2 動(dòng)物

購(gòu)買實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，昆明種雄性小鼠，在漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校動(dòng)物房飼養(yǎng)，溫度20～26℃，相對(duì)濕度為35%～70%。飼養(yǎng)期間小鼠活動(dòng)及飲食正常，皮毛光滑色澤鮮亮。

1.3 儀器

BLOBASE-EL10A多功能酶標(biāo)儀，濟(jì)南高奎醫(yī)療器械有限公司；Happy-TL16臺(tái)式離心機(jī)；全自動(dòng)組織脫水機(jī)；超凈工作臺(tái)等。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)方法

2.1.1 拐棗水提液

拐棗粉碎成粗粉，加8N純化水浸提24h,過濾，濾液保存待用；濾渣分別加3N純化水煎煮1.5h、1h,過濾合并水煎濾液、浸提液為拐棗水提液，加熱濃縮為拐棗濃縮液備用。取適量拐棗濃縮液加純化水分別稀釋成含生藥0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL水提液，備用。

2.1.2 急性酒精性肝損傷實(shí)驗(yàn)

選取年（月）齡、體重、健康狀況比較無顯著差異的雄性小鼠40只，體重（20±2）g，隨機(jī)分成五組，拐棗水提液低、中、高劑量組、模型組、和正常組，每組8只。除正常對(duì)照組外，其他組按照齊慧慧等[12]建模方法，按6g/kg劑量用50%乙醇一次性給予小鼠灌胃。急性酒精性肝損傷模型建模成功，拐棗水提液低、中、高劑量組分別用0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL的拐棗水提液罐胃，1次/天,0.5mL/次，連用7天；正常組和模型組生理鹽水罐胃，1次/天,0.5mL/次，連用7天。最后一次罐胃后，等2h開始進(jìn)行生化指標(biāo)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

2.2 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)及檢測(cè)方法

2.2.1 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)

選取小鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）含量、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性為本實(shí)驗(yàn)的生化指標(biāo)。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)

摘除小鼠眼球取血，靜止放置，離心15min后取出血清，采用酶法測(cè)定血清中 AST 和 ALT 水平。按試劑盒說明書要求操作，定量測(cè)定各組小鼠谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性，結(jié)果詳見表1、表2。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果與分析

表1、表2表明:模型組與對(duì)照組比較，生化指標(biāo)ALT、ATS、MAD有非常顯著差異（P值均小于0.01）；SOD指標(biāo)具顯著差異（P＜0.05）。ALT、ATS、MAD與SOD四指標(biāo)表明急性酒精性肝損傷建模成功。

3.1 拐棗水提液對(duì)急性酒精肝損傷小鼠血清ALT、AST影響

表1表明:不同劑量組與模型組組間比較，低劑量組ALT、ATS指標(biāo)P值均大于0.05，與模型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中劑量組ALT（P＜0.01）與模型組差異有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ATS（P＞0.05）與模型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高劑量組ALT（P＜0.01）與模型組差異有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ATS（P＜0.05）與模型組差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 拐棗水提液對(duì)急性酒精肝損傷小鼠血清ALT、AST影響（±s）

表1 拐棗水提液對(duì)急性酒精肝損傷小鼠血清ALT、AST影響（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，*表示差異顯著(P＜0.05)，**表示差異極顯著(P＜0.01)；與模型組比較，#表示差異顯著(P＜0.05)，##表示差異極顯著(P＜0.01)。

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3.2 拐棗水提液對(duì)急性酒精肝損傷小鼠血清MAD、SOD影響

表2表明:不同劑量組與模型組組間比較，低劑量組MAD、SOD指標(biāo)P值均大于0.05，與模型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中劑量組MAD（P＜0.01）與模型組差異有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SOD（P＞0.05）與模型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高劑量組MDA（P＜0.01）與模型組差異有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SOD（P＜0.05）與模型組差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 拐棗水提液對(duì)急性酒精肝損傷小鼠血清MAD、SOD影響（±s）

表2 拐棗水提液對(duì)急性酒精肝損傷小鼠血清MAD、SOD影響（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，*表示差異顯著(P＜0.05)，**表示差異極顯著(P＜0.01)；與模型組比較，#表示差異顯著(P＜0.05)，##表示差異極顯著(P＜0.01)。

組別 n 劑量（mg/mL） MAD（mmol/mg） SOD（u/mg）正常組 8 / 8.60±0.46 329.25±7.21模型組 8 / 15.39±1.66** 278.44±31.71*低劑量組 8 0.5 13.21±1.05 290.65±13.31中劑量組 8 1 9.47±0.69## 292.45±9.28高劑量組 8 2 8.79±0.48## 339.25±5.20#

4 討論

4.1 生化指標(biāo)選取及動(dòng)物建模

酒精進(jìn)入體內(nèi)會(huì)引起機(jī)體內(nèi)谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）含量升高[13-14]。因正常血清中ALT、AST含量很低，只有當(dāng)肝損傷，肝細(xì)胞內(nèi)ALT、AST才會(huì)釋放入血，導(dǎo)致ALT、AST含量升高，所以本實(shí)驗(yàn)選取血清ALT、AST含量作為檢測(cè)肝損傷的生化指標(biāo)[15]。

肝臟是機(jī)體酒精代謝的主要場(chǎng)所，酒精進(jìn)入肝臟，會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，影響肝功。因丙二醛（MDA）作為肝細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的終末產(chǎn)物之一，其含量可以間接反映肝損傷的受損程度[16]。超氧化物歧化酶（SOD）可以阻止肝損傷，及時(shí)修復(fù)損傷是肝細(xì)胞，SOD活性能反映肝損傷的速度及修復(fù)受損肝細(xì)胞的能力[17]。所以本實(shí)驗(yàn)選取MAD含量、SOD活性作為檢測(cè)肝損傷的生化指標(biāo)。

模型組與正常對(duì)照組比較，生化指標(biāo)ALT、ATS、MAD有非常顯著差異（P值均小于0.01）；SOD指標(biāo)具顯著差異（P＜0.05）。ALT、ATS、MAD與SOD四指標(biāo)表明急性酒精性肝損傷建模成功。

4.2 拐棗水提液對(duì)酒精性急性肝損傷小鼠保護(hù)作用

本實(shí)驗(yàn)中各劑量組與模型組組間比較，拐棗水提液低劑量組對(duì)ALT、AST、MDA、SOD無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；拐棗水提液中劑量組降低ALT含量具有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），降低MDA的產(chǎn)生非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），對(duì)AST、SOD無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；拐棗水提液高劑量組對(duì)降低ALT、AST含量有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），降低MDA的產(chǎn)生有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），對(duì)SOD活性的提升有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

綜上得出結(jié)論:拐棗水提液中劑量組、高劑量組對(duì)酒精性急性肝損傷具有保護(hù)作用，拐棗水提液高劑量組護(hù)肝效果更明顯。拐棗水提液高劑量組提升SOD活性，加速受損肝細(xì)胞的修復(fù)，有利于保護(hù)長(zhǎng)期飲酒者肝細(xì)胞，加速受損肝細(xì)胞的修復(fù)，值得在實(shí)際生活中運(yùn)用。