張斗勝，王晨，王立新，崇小萌，姚尚辰，許明哲

(中國食品藥品檢定研究院，北京 102629)

苯唑西林(Oxacillin)為國家基本藥物目錄藥物[1]，臨床使用以注射劑、口服制劑為主；其中口服劑型包含片劑和膠囊。結(jié)構(gòu)上通過異惡唑環(huán)取代、苯基和甲基引入等結(jié)構(gòu)修飾，相比其他青霉素，苯唑西林不僅耐青霉素酶，而且對胃酸穩(wěn)定；臨床主要用于抗革蘭陽性菌感染治療[2-3]。盡管臨床有更多抗生素選擇，口服苯唑西林鈉由于抗菌作用較強，價格較便宜，在基層醫(yī)療機構(gòu)仍應用較廣泛[4]。

通?？诜幬锝?jīng)胃腸道崩解、釋放、吸收等復雜生理過程，而良好的藥品質(zhì)量是保證臨床療效的首要前提條件[5-6]。目前，尚未見口服苯唑西林鈉的系統(tǒng)質(zhì)量評價報道。鑒于此，本文以2016年口服苯唑西林鈉國家評價抽驗為依據(jù)；在法定檢驗基礎(chǔ)上，結(jié)合探索性研究，統(tǒng)計分析水分、裝量、含量、崩解時限(溶出度)等重點質(zhì)控項；探索研究雜質(zhì)譜變化來評價本品質(zhì)量現(xiàn)狀以及可能的質(zhì)量風險，分析影響本品的質(zhì)量因素，為加強產(chǎn)品質(zhì)量管理，進一步完善產(chǎn)品質(zhì)量提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 日本島津LC-20A型液相色譜儀(SPD-M20A二極管陣列檢測器)；美國Waters 2690型液相色譜系統(tǒng)(Waters 996二極管陣列檢測器)；美國戴安U3000型液相色譜系統(tǒng)；美國AB-3200Q TRAP質(zhì)譜儀(Analyst軟件，Version 1.4.2)；美國Agilent-RS8PLUS溶出度儀；美國賽默飛PE35紫外可見分光光度計。試劑：磷酸二氫鉀、鹽酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀均為分析純；甲醇、乙腈為色譜純；水為純化水。

1.2 樣品 2016年國家藥品評價性抽驗共抽12批次樣品，其中片劑9批次，涉及2家生產(chǎn)企業(yè)，企業(yè)及文號覆蓋率100%；膠囊3批次，涉及1家生產(chǎn)企業(yè)，企業(yè)及文號覆蓋率25%。苯唑西林鈉對照品(批號：130482-201402，含量：90.0%)、氯唑西林對照品(批號：130423-200903，含量：91.0%)，均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.3 試驗方法

1.3.1 法定檢驗 2015年12月1日前生產(chǎn)的樣品按國家藥品標準WS-10001-(HD-1131)-2002(片劑)和WS-10001-(HD-0717)-2002(膠囊)；2015年12月1日后生產(chǎn)的樣品按《中國藥典》2015年版(二部)[6]進行法定檢驗。

1.3.2 雜質(zhì)譜研究 參考我室已發(fā)表文獻[7]，采用優(yōu)化的液相質(zhì)譜方法與《中國藥典》2015年版(二部)[10]方法進行比較分析，建立適于苯唑西林鈉口服制劑質(zhì)控用雜質(zhì)譜。

1.3.2.1 高效液相色譜(HPLC)條件 色譜柱為Capcell MG II C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；0.02 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2 mol·L-1氫氧化鉀溶液調(diào)解pH至6.6)為流動相A，甲醇為流動相B，梯度洗脫(0～32 min:69% A，32～37 min:55%A，37～50 min:65%A，50～51 min:31%A，51～65 min:69%A)；檢測波長：225 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1。

1.3.2.2 質(zhì)譜(MS)條件 離子源：電噴霧(ESI)正離子化，噴霧電壓：5 500 V；去簇電壓(DP)：49 psi；進口電壓(EP)：10 psi； 碰撞能(CE)：8 eV；離子源溫度(TEM)：500 ℃ ；掃描范圍(m/z)：50～1 000。

1.3.3 崩解時限(溶出度)溶出度試驗條件 照《中國藥典》2015年版(二部)項下方法[8]。

1.3.4 溶液的配制

1.3.4.1 系統(tǒng)適用性溶液、對照品以及供試品溶液 照《中國藥典》2015年版(二部)項下方法配制[7]。

1.3.4.2 強酸降解溶液 取對照品約10 mg，加2.7 g·L-1磷酸二氫鉀(pH 5.0)-乙腈溶液(75∶25)5 mL使溶解，再加入1 mol·L-1鹽酸溶液3 mL，放至室溫，用1 mol·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性。

1.3.4.3 強堿降解溶液 取對照品約10 mg，加0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液2 mL使溶解，室溫放置1 min，再加2.7 g·L-1磷酸二氫鉀(pH 5.0)-乙腈溶液(75∶25)7 mL，放至室溫，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至中性。

1.3.4.4 高溫降解溶液 取苯唑西林對照品適量，置100 ℃烘箱內(nèi)放置16 h，取出，放至室溫，稱取適量，照《中國藥典》2015年版(二部)方法制備。

1.4 數(shù)據(jù)處理 采用Microsoft Excel 2010辦公軟件(美國微軟公司)。

2 結(jié)果與討論

2.1 總的檢驗結(jié)果 按照法定標準檢驗，9批苯唑西林鈉片、3批膠囊結(jié)果均符合標準規(guī)定，合格率100%。進一步對主要檢測項：水分、裝量差異、含量測定結(jié)果作統(tǒng)計分析。

2.1.1 水分 分別以劑型、生產(chǎn)廠家為橫坐標，以極差、均值和相對標準偏差(RSD)為縱坐標，對水分結(jié)果做統(tǒng)計圖(見圖1)。由圖1可知：不同企業(yè)間以及同一企業(yè)的不同批間、批內(nèi)差異均較大；企業(yè)2的片劑和膠囊的水分控制(RSD：8.8%、18%)較企業(yè)1差(RSD:6.7%)，且1批膠囊水分值處在限度邊緣(不得過6.0%)；其反映了生產(chǎn)工藝和過程控制的優(yōu)劣，是影響質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一。雖然按法定檢驗樣品符合規(guī)定，但水分統(tǒng)計結(jié)果揭示出目前企業(yè)在水分控制方面仍存在的潛在質(zhì)量風險；特別是對邊緣產(chǎn)品，需要從原輔料質(zhì)量、工藝合理性、工藝管理以及貯存運輸?shù)确矫骈_展偏離分析以及風險評估報告；以進一步優(yōu)化和改進工藝，降低質(zhì)量風險。

圖1 水分測定結(jié)果統(tǒng)計

2.1.2 裝量差異 3批膠囊裝量差異的RSD均小于2.5%；但對膠囊殼進行RSD分析發(fā)現(xiàn)，企業(yè)2生產(chǎn)的1批樣品所用膠囊殼的RSD為3.5%，而其他2批次樣品所用膠囊殼的RSD小于1.5%，盡管囊殼未造成產(chǎn)品不合格情況發(fā)生，但對工藝及過程控制來講是個潛在質(zhì)控風險點。

2.1.3 崩解時限(溶出度)檢查 2家企業(yè)在的8批片劑樣品崩解時限均符合規(guī)定(2015年12月1日前生產(chǎn))，企業(yè)2的3批膠囊和1批2016年生產(chǎn)的片劑，溶出度檢查符合規(guī)定。研究提示：膠囊殼、糖衣片崩解程度與崩解速率是影響本品溶出的關(guān)鍵質(zhì)量因素。

2.1.4 含量測定 分別以劑型、生產(chǎn)廠家為橫坐標，以均值和相對標準偏差(RSD)為縱坐標，對含測結(jié)果做統(tǒng)計圖，見圖2。由圖2可知：從整體看，2家企業(yè)產(chǎn)品含測均值在95.0%～102.0%之間，含量控制均較好；相比企業(yè)2，企業(yè)1的產(chǎn)品含測均值(101.5%)更接近理論中心值(100%)，表明其投料控制更為精準、合理。

圖2 含測結(jié)果統(tǒng)計

2.2 探索性研究結(jié)果 在法定檢驗基礎(chǔ)上，為進一步評價國產(chǎn)苯唑西林鈉片、膠囊的質(zhì)量現(xiàn)狀，從雜質(zhì)譜方面開展探索性研究，探討影響本品的關(guān)鍵質(zhì)量因素。結(jié)合法定檢驗結(jié)果，通過與《中國藥典》2015年版(二部)有關(guān)物質(zhì)檢查法相比較，系統(tǒng)評價分析方法并分析制劑工藝對雜質(zhì)的差異性影響。

2.2.1 兩種方法在制劑中分離效果比較 取系統(tǒng)適用性溶液和供試品溶液，分別采用優(yōu)化后液相方法與《中國藥典》2015年版(二部)方法進行比較分析，系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果見圖3。

圖3 系統(tǒng)適用性試驗色譜圖

如圖3所示：雖然新優(yōu)化方法與《中國藥典》2015年版(二部)方法均可對系統(tǒng)適用性溶液有效分離；但新優(yōu)化方法在雜質(zhì)分離數(shù)，難分離雜質(zhì)對的分離度改善方面更顯出優(yōu)勢,專屬性更好。供試品試驗結(jié)果見圖4。如圖4所示：新優(yōu)化方法可有效分離制劑中的各雜質(zhì)。

圖4 供試品色譜圖

2.2.2 雜質(zhì)歸屬 取系統(tǒng)適用性溶液，加速試驗溶液以及供試品溶液，采用LC-MS分析，參考英國藥典(BP2015)[9]初步推測苯唑西林鈉(見圖3)中所含雜質(zhì)主要包括：苯唑西林噻唑酸及異構(gòu)體、氯唑西林及異構(gòu)體，開環(huán)及脫水物等雜質(zhì)，且大部分可因酸、堿降解產(chǎn)生，詳見表1。

表1 苯唑西林鈉雜質(zhì)歸屬

2.2.3 制劑中雜質(zhì)檢查結(jié)果 進一步按廠家、劑型對主要檢出雜質(zhì)進行統(tǒng)計分析，見圖5。

如圖5所示：不同廠家、不同批次產(chǎn)品檢出結(jié)果差異較大，其中雜質(zhì)D與單雜檢出變化幅度范圍較大，最大分別達0.4%和0.6%；是造成產(chǎn)品總雜質(zhì)偏高的主要原因。2家企業(yè)生產(chǎn)的片劑和膠囊中含量較大的雜質(zhì)均為雜質(zhì)D和單雜。從現(xiàn)有檢出情況可初步歸納出目前國產(chǎn)苯唑西林鈉口服制劑的雜質(zhì)譜概況：即國產(chǎn)苯唑西林鈉口服制劑中主要檢出雜質(zhì)為雜質(zhì)D和單雜；其中雜質(zhì)D屬于降解雜質(zhì)，反映制劑工藝的優(yōu)劣；雜質(zhì)E為原料合成殘留的氯唑西林雜質(zhì)，反映原料質(zhì)量的優(yōu)劣；雜質(zhì)D與雜質(zhì)E作為指針雜質(zhì)，用于評價和控制生產(chǎn)工藝及藥品質(zhì)量。

圖5 制劑中雜質(zhì)統(tǒng)計圖

3 結(jié)論

綜上分析，現(xiàn)行《中國藥典》2015年版(二部)收載方法滿足苯唑西林鈉口服制劑質(zhì)量控制需要。膠囊質(zhì)量好于糖衣片，而主要檢查項如水分、裝量差異、有關(guān)物質(zhì)在不同廠家、不同批次間差異較大；原、輔料質(zhì)量及工藝水平是造成雜質(zhì)譜差異變化的主要原因，是影響本品質(zhì)量的關(guān)鍵工藝屬性。提示生產(chǎn)企業(yè)應重視原、輔料質(zhì)量，優(yōu)化生產(chǎn)工藝，加強過程控制，提高產(chǎn)品質(zhì)量。