孫輝，何勝利

養(yǎng)胃寧膠囊系香附(醋)、水紅花子(炒)、草豆蔻、香椽、當(dāng)歸等12味中藥材加工而成，收載于《衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十三冊(cè)，具有調(diào)中養(yǎng)胃、理氣止痛的功效，其適應(yīng)證主要為急慢性胃炎、潰瘍病，胃神經(jīng)官能癥等疾病，臨床療效顯著[1]。養(yǎng)胃寧膠囊現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)方中藥物成分進(jìn)行定量測(cè)定研究，王英偉等[2]僅對(duì)該制劑中所含大黃酚進(jìn)行了含量測(cè)定，未檢索到對(duì)養(yǎng)胃寧膠囊中多成分定量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道。方中香附[3-4]為莎草科植物莎草的干燥根莖，具有疏肝解郁、理氣寬中、調(diào)經(jīng)止痛的作用，主要用于脾胃氣滯、脘腹痞悶、脹滿疼痛、肝郁氣滯、胸脅脹痛等癥狀的治療；水紅花子[3]為蓼科植物紅蓼的干燥成熟果實(shí)，具有消積止痛、利水消腫、散血消癥的功效，主要用于食積不消、胃脘脹痛、水腫腹水等癥狀的治療；草豆蔻[3,5]溫中止嘔、燥濕行氣，香椽[3]舒肝理氣、寬中化痰。筆者2016年1月至2017年1月采用HPLC波長切換法，對(duì)養(yǎng)胃寧膠囊主要藥味香附所含主要成分α-香附酮，水紅花子所含指標(biāo)性成分花旗松素，草豆蔻的指標(biāo)性成分山姜素、喬松素、小豆蔻明和榿木酮進(jìn)行了同時(shí)測(cè)定研究，所建立的方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，為養(yǎng)胃寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供了數(shù)據(jù)支持。

1 儀器

Agilent1100型高效液相色譜儀，美國安捷倫科技有限公司；BP211DAG型電子天平，德國Sartorius公司；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

2 試藥與試劑

養(yǎng)胃寧膠囊(規(guī)格：每粒裝0.3 g，批號(hào)：160501、170101、170601)來源于通化茂祥制藥有限公司；對(duì)照品花旗松素(批號(hào)：111816-201102，含量：98.9%)、山姜素(批號(hào)：110762-201405，含量：97.5%)、喬松素(批號(hào)：111829-201703，含量：99.5%)、小豆蔻明(批號(hào)：110763-201604，含量：99.8%)、榿木酮(111830-201703，含量：99.8%)、α-香附酮(批號(hào)：110748-201714，含量：99.4%)均來源于中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，其它試劑為分析純。

3 方法與結(jié)果

3.1溶液的制備

3.1.1對(duì)照品溶液 分別精密稱取花旗松素對(duì)照品、山姜素對(duì)照品、喬松素對(duì)照品、小豆蔻明對(duì)照品、榿木酮對(duì)照品、α-香附酮對(duì)照品各適量，用甲醇溶解并制成質(zhì)量濃度為0.436、1.578、1.314、0.978、1.152、0.358 mg/mL的單一組分對(duì)照品儲(chǔ)備液。再精密吸取各對(duì)照品儲(chǔ)備液2.5 mL，置同一50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得養(yǎng)胃寧膠囊檢測(cè)用混合對(duì)照品溶液。

3.1.2供試品溶液 取養(yǎng)胃寧膠囊適量，傾出內(nèi)容物，取約2.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，密塞，稱重，超聲(功率：500 W，頻率：40 kHz)提取30 min，放冷，擦干外壁，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，過濾，續(xù)濾液作為養(yǎng)胃寧膠囊供試品溶液。

3.1.3陰性樣品溶液 按照養(yǎng)胃寧膠囊的處方和制備工藝，分別制備缺水紅花子(炒)陰性樣品、缺草豆蔻陰性樣品和缺香附(醋)陰性樣品，再按照“3.1.2”項(xiàng)下養(yǎng)胃寧膠囊供試品溶液制備方法制成水紅花子陰性樣品溶液、草豆蔻陰性樣品溶液和香附陰性樣品溶液。

3.2色譜條件采用Agilent Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相A：甲醇，流動(dòng)相B：0.1%磷酸溶液，梯度洗脫(0～10 min，36.0%A；10～14 min，36.0%A→48.0%A；14～30 min，48.0%A→62.0%A；30～37 min，62.0%A→70.0%A；37～45 min，70.0%A→36.0%A)；0～30 min在300 nm[3,6-7]波長下檢測(cè)花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明和榿木酮，30～45 min在242 nm[8-11]波長下檢測(cè)α-香附酮；流速：0.9 mL/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量為10 μL。

3.3方法學(xué)考察

3.3.1專屬性考察 精密量取“3.1”項(xiàng)下制備的混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各適量，依法進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見圖1，陰性樣品溶液均無干擾，理論塔板數(shù)按所測(cè)各成分計(jì)均不低于3 000，所測(cè)各成分花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮色譜峰均能達(dá)到有效分離，分離度均大于1.5。

注：a.混合對(duì)照品溶液；b.養(yǎng)胃寧膠囊；c.水紅花子陰性樣品溶液；d.草豆蔻陰性樣品溶液；e.香附陰性樣品溶液;1.花旗松素；2.山姜素；3.喬松素；4.小豆蔻明；5.榿木酮；6.α-香附酮

圖1養(yǎng)胃寧膠囊HPLC色譜圖

3.3.2線性關(guān)系考察 分別精密吸取“3.1.1”項(xiàng)下制備的花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮對(duì)照品儲(chǔ)備液各0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，置于20 mL量瓶中，用甲醇制成25倍濃度差的6個(gè)混合對(duì)照品溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定，采用花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮質(zhì)量濃度c為橫坐標(biāo)，所測(cè)各成分峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行回歸計(jì)算，回歸方程分別為花旗松素：A=8.5594×105c+427.1；山姜素：A=1.6057×106c+256.9；喬松素：A=1.7365×106c-372.8；小豆蔻明：A=1.3219×106c+281.7；榿木酮：A=1.5698×106c-277.1；α-香附酮：A=9.0572×105c+169.4。花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮分別在2.18～54.50 μg/mL(r=0.999 9)、7.89～197.25 μg/mL(r=0.999 6)、6.57～164.25 μg/mL(r=0.999 8)、4.89～122.25 μg/mL(r=0.999 7)、5.76～144.00 μg/mL(r=0.999 9)、1.79～44.75 μg/mL(r=0.999 1)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.3.3精密度試驗(yàn) 取“3.1.1”項(xiàng)下制備的養(yǎng)胃寧膠囊檢測(cè)用混合對(duì)照品溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮峰面積，結(jié)果所測(cè)6個(gè)成分峰面積的RSD分別為1.11%、0.95%、1.02%、0.98%、0.83%和1.26%。

3.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 取養(yǎng)胃寧膠囊(批號(hào)：160501)的同一供試品溶液，分別在室溫下第0、2、4、8、12和16 h進(jìn)樣，結(jié)果養(yǎng)胃寧膠囊供試品溶液室溫下16 h穩(wěn)定，所測(cè)各成分花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮峰面積的RSD分別為1.05%、0.88%、0.95%、1.11%、0.67%和1.20%。

3.3.5重復(fù)性試驗(yàn) 取養(yǎng)胃寧膠囊(批號(hào)：160501)，按照“3.1.2”項(xiàng)下制備方法制備養(yǎng)胃寧膠囊供試品溶液6份，依法進(jìn)樣測(cè)定，記錄花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮峰面積，計(jì)算所測(cè)各成分含量，結(jié)果所測(cè)各成分含量的RSD分別為1.46%、0.59%、0.82%、1.39%、1.27%和0.96%。

3.3.6加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的養(yǎng)胃寧膠囊(批號(hào)：160501)，傾出內(nèi)容物，取6份，每份約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入花旗松素對(duì)照品溶液(0.514 mg/mL)0.5 mL、山姜素對(duì)照品溶液(0.905 mg/mL)1.0 mL、喬松素對(duì)照品溶液(0.762 mg/mL)1.0 mL、小豆蔻明對(duì)照品溶液(0.561 mg/mL)1.0 mL、榿木酮對(duì)照品溶液(0.659 mg/mL)1.0 mL和α-香附酮對(duì)照品溶液(0.417 mg/mL)0.5 mL，再按照“3.1.2”項(xiàng)下養(yǎng)胃寧膠囊供試品溶液制備方法制備加樣回收樣品溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算所測(cè)各成分花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮、α-香附酮的回收率

3.4養(yǎng)胃寧膠囊的含量測(cè)定取批號(hào)為160501、170101、170601的養(yǎng)胃寧膠囊，按照“3.1.2”項(xiàng)下養(yǎng)胃寧膠囊供試品溶液制備方法制備供試品溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定，記錄花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮峰面積，采用外標(biāo)法計(jì)算所測(cè)各成分含量，結(jié)果見表2。

表2 含量測(cè)定結(jié)果/(mg/g)

4 討論

4.1養(yǎng)胃寧膠囊供試品溶液制備方法的優(yōu)化本實(shí)驗(yàn)考察了不同提取溶劑(甲醇[3,7-9]、70%甲醇、乙醇[12]、70%乙醇[13])對(duì)養(yǎng)胃寧膠囊中所測(cè)成分花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮提取率的影響，對(duì)比結(jié)果顯示甲醇的提取效果優(yōu)于其他提取溶劑；在此結(jié)果基礎(chǔ)上，對(duì)養(yǎng)胃寧膠囊供試品的提取方式(超聲提取[2,7-8]和加熱回流提取[3])和提取時(shí)間(15 min、30 min和45 min)進(jìn)行了對(duì)比考察，最終優(yōu)選養(yǎng)胃寧膠囊供試品溶液最佳的制備方法為甲醇溶液超聲提取30 min，此條件下所測(cè)成分花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮的綜合提取率最佳。

4.2色譜條件中流動(dòng)相的優(yōu)化本實(shí)驗(yàn)對(duì)比考察了甲醇-水[3,7-9,13-14]、乙腈-水[15]等度洗脫，以所測(cè)成分花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮的峰形、分離度以及色譜峰基線平穩(wěn)等為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果甲醇-水流動(dòng)相優(yōu)于乙腈-水流動(dòng)相體系，但所測(cè)成分α-香附酮峰形較差，喬松素色譜峰分離效果欠佳；在此結(jié)果基礎(chǔ)上，筆者又分別考察了甲醇-0.1%磷酸溶液[16-17]、甲醇-0.1%冰醋酸溶液為流動(dòng)相，同時(shí)采用梯度洗脫方法，對(duì)流動(dòng)相的比例進(jìn)行不斷摸索，最終確定采用甲醇-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，按照文中“3.2”項(xiàng)下的規(guī)定的程序梯度洗脫，此條件下所測(cè)色譜峰基線平穩(wěn)，所測(cè)成分花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮色譜峰峰形對(duì)稱，分離度符合要求。

本研究采用HPLC波長切換聯(lián)合梯度洗脫法，同時(shí)對(duì)養(yǎng)胃寧膠囊中6個(gè)成分花旗松素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮和α-香附酮的含量進(jìn)行了測(cè)定，所建立的方法簡(jiǎn)便、快捷，重復(fù)性好，靈敏度高，為養(yǎng)胃寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供了數(shù)據(jù)支持。