張銀龍，湯繼輝，李巧霞，高文遠(yuǎn)，霍彩霞

帕博西尼(palbociclib)是全球首個(gè)上市的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(cellular-dependent kinase，CDK)4 /6 抑制劑，聯(lián)合來曲唑用于絕經(jīng)后婦女雌激素受體陽(yáng)性(estrogen-receptor-positive，ER+)、人表皮生長(zhǎng)因子受體2陰性(human-epidermal-growth-receptor-2-negative，HER2-)的晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌的初始內(nèi)分泌治療。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(food and drug administration，F(xiàn)DA)于2015年2月加速批準(zhǔn)原研廠家輝瑞制藥的帕博西尼膠囊上市，商品名：IBRANCE?，規(guī)格：125 mg、100 mg和75 mg，推薦初始劑量：每天125 mg，與食物同服，連續(xù)服藥21 d后，停藥7 d[1]。本產(chǎn)品市場(chǎng)潛力巨大但目前尚未在國(guó)內(nèi)上市[2]。

本試驗(yàn)自2015年6月至2016年12月以125 mg規(guī)格帕博西尼膠囊原研參比制劑為對(duì)照，根據(jù)參比制劑說明書中公布的輔料種類為基礎(chǔ)，首先以自制制劑和參比制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5 %十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate ，SDS)的水溶液中溶出曲線相似因子(similarity factor，f2)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行帕博西尼膠囊處方篩選，然后測(cè)定優(yōu)化后的自制制劑在四種溶出介質(zhì)的溶出曲線，并與參比制劑溶出曲線相比較，以期獲得在四種溶出介質(zhì)與參比制劑體外溶出曲線一致的帕博西尼膠囊自制制劑。

1 儀器與試藥

1.1儀器BSA2202和CPA225D電子天平(德國(guó)賽多利斯有限公司)；RC8M溶出實(shí)驗(yàn)儀(天大天發(fā)科技有限公司)；UV-2450型紫外可見分光光度計(jì)(日本島津有限公司)；HTD200柱式料斗混合機(jī)(浙江迦南科技股份有限公司)；Z40F膠囊填充機(jī)(山東新馬制藥裝備有限公司)。

1.2藥品與試劑帕博西尼原料(北京澳合藥物研究院有限公司，批號(hào)：20150801，含量：99.8%)；帕博西尼原料(廊坊高博京邦制藥有限公司，批號(hào)：160401，含量：99.9%；批號(hào)：160402，含量：99.6%；批號(hào)：160501，含量：99.7%)；帕博西尼膠囊(美國(guó)輝瑞制藥有限公司，批號(hào)：J7977OP2)；帕博西尼膠囊(北京四環(huán)制藥有限公司，批號(hào)：160501，160504，160507)；無水直壓乳糖(美國(guó)Kerry有限公司，批號(hào)：1320020633)；微晶纖維素PH102(microcrystalline cellulose，MCC,山東聊城阿華制藥股份有限公司，批號(hào)：20150404)；羧甲淀粉鈉(臺(tái)灣永日化學(xué)工業(yè)股份有限公司，批號(hào)：SSG2015004)；二氧化硅(湖州展望藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20160408)；硬脂酸鎂(遼寧奧達(dá)制藥有限公司，批號(hào)：20150402)；膠囊殼(蘇州膠囊有限公司，批號(hào)：12860434)；十二烷基硫酸鈉(天津福晨化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20150108)。其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1溶出測(cè)定方法

2.1.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 精密稱取帕博西尼標(biāo)準(zhǔn)品，配制濃度約為10 μg/mL的帕博西尼對(duì)照溶液，取對(duì)照溶液，在190～400 nm進(jìn)行紫外掃描(圖1)，選擇最大吸收波長(zhǎng)365 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 帕博西尼紫外吸收光譜圖

2.1.2方法專屬性 空白輔料在365 nm波長(zhǎng)處無吸收(圖2)，不干擾樣品測(cè)定，符合專屬性規(guī)定。

2.1.3線性關(guān)系與范圍 精密稱取帕博西尼標(biāo)準(zhǔn)品，配制濃度約為200 μg/mL的帕博西尼對(duì)照儲(chǔ)備液，分別精密量取0.5、1、2、3、4、5 mL對(duì)照儲(chǔ)備液于50 mL容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，配制實(shí)際濃度(C)分別為2.026、4.052、8.140、12.156、16.208、20.260 μg/mL的帕博西尼溶液，分別在365 nm處測(cè)定吸光度值，以吸光度值(A)對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=0.058 6C+0.009 6(R2= 0.999 9)，結(jié)果表明，在2.206～20.260 μg/mL濃度范圍內(nèi)，吸光度值與濃度線性關(guān)系良好(圖3)。

圖2 空白輔料紫外掃描圖譜

圖3 帕博西尼標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.4回收率試驗(yàn) 精密稱取處方量輔料15份，分別置于500 mL容量瓶中，分別精密稱取主藥約75、60、45、22.5和11.25 mg各3份加入各容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解，定容，過濾，取續(xù)濾液適量用0.1 mol/L鹽酸溶液制成帕博西尼濃度分別為15、12、9、4.5和2.25 μg/mL的溶液各3份，365 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，按外標(biāo)法計(jì)算回收率。各濃度水平回收率均在98.0%～102.0%之間(表1)，RSD均小于2.0 %，溶出回收率符合要求。

2.1.5儀器精密度 取對(duì)照溶液，在365 nm處重復(fù)6次測(cè)定吸光度值分別為0.600、0.601、0.602、0.599、0.602、0.601，平均0.601，計(jì)算儀器精密度，RSD為0.19%，小于2.0 %，符合儀器精密度要求。

表1 帕博西尼回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.6溶液穩(wěn)定性 取各溶出介質(zhì)的樣品溶液，分別在(37±0.5)℃放置8 h，分別于0、2、4、6、8 h，在365 nm處測(cè)定樣品吸光度值，結(jié)果表明，各溶出介質(zhì)下的樣品溶液的吸光度值在8 h內(nèi)無明顯變化，RSD均小于2.0 %，符合規(guī)定，表明各介質(zhì)的樣品溶液在(37±0.5)℃下，8 h內(nèi)穩(wěn)定(表2)。

2.1.7溶出介質(zhì)選擇 測(cè)定帕博西尼膠囊參比制劑在0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液和純化水的溶出曲線(圖4)。顯示在pH 6.8磷酸鹽緩沖液和純化水中60 min僅溶出約14.0 %，幾乎沒有區(qū)分能力。因此進(jìn)一步考察其在不同濃度SDS的水溶液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線(圖5)，顯示在含0.5% SDS的水溶液和含0.5% SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液中60 min可溶出90.0%以上，綜合考慮，選擇0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、含0.5% SDS的pH 6.8緩沖液和含0.5% SDS的水溶液作為帕博西尼膠囊溶出測(cè)定的溶出介質(zhì)。

表2 各溶出介質(zhì)的帕博西尼溶出溶液在不同時(shí)間吸光度值比較

圖4 帕博西尼膠囊在不同介質(zhì)中的溶出曲線

圖5 帕博西尼膠囊在含不同濃度的SDS水溶液中的溶出曲線

2.1.8溶出測(cè)定方法 參照FDA[3]公布的帕博西尼膠囊溶出方法，具體測(cè)定方法如下：

取帕博西尼膠囊，照溶出度測(cè)定法[《中國(guó)藥典》(ChP)2015年版四部通則0931第二法]，溶出介質(zhì)(① 0.1 mol/L鹽酸溶液;②pH 4.5醋酸鹽緩沖液;③含0.5 % SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液;④含0.5 % SDS的水溶液)900 mL，轉(zhuǎn)速為50 r/min，依法操作，經(jīng)指定時(shí)間點(diǎn)(5、10、15、30、45和60 min)，取溶液7 mL(同時(shí)補(bǔ)加等溫介質(zhì)7 mL)，經(jīng)0.45 μm水系濾膜濾過。精密量取續(xù)濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為樣品溶液。照紫外-可見分光光度計(jì)[《中華人民共和國(guó)藥典》(ChP)2015年版四部通則0401]，在365 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，按照外標(biāo)法計(jì)算溶出度，繪制溶出曲線。采用f2法評(píng)價(jià)自制制劑和參比制劑的體外溶出行為一致性。

2.2處方篩選原研參比制劑說明書中披露了帕博西尼膠囊內(nèi)容物所含有的非活性成分：乳糖、微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、二氧化硅和硬脂酸鎂。參照原研參比制劑帕博西尼膠囊內(nèi)容物輔料組成，選擇無水直壓乳糖、微晶纖維素PH102、羧甲淀粉鈉、二氧化硅和硬脂酸鎂進(jìn)行處方篩選。

原研參比制劑帕博西尼膠囊內(nèi)容物不含有黏合劑，推測(cè)其內(nèi)容物采用干法制?；蛑苯踊旌瞎に囍瞥?。觀察其內(nèi)容物性狀，為均勻的粉末，未發(fā)現(xiàn)有顆粒，進(jìn)一步確定參比制劑采用原輔料粉末混合，直接灌裝膠囊的基本工藝。將內(nèi)容物稱重，為450 mg。初步確定制備工藝如下：

準(zhǔn)確稱取處方量的帕博西尼、無水直壓乳糖、微晶纖維素PH102、羧甲淀粉鈉和二氧化硅，混合均勻，稱取處方量的硬脂酸鎂，混合均勻，得帕博西尼膠囊總混粉末，灌裝0 #膠囊，每粒450 mg。

2.2.1填充劑比例篩選 設(shè)計(jì)不同填充劑比例的處方(表3)，測(cè)定其在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5% SDS的水溶液中的溶出曲線，結(jié)果見表4。試驗(yàn)結(jié)果表明：三批自制制劑與參比制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中溶出曲線均一致(f2> 50)，相似性順序：R3>R2>R1。三批自制制劑與參比制劑在含0.5% SDS的水溶液中的溶出曲線均不一致(f2<50)，相似性順序：R2>R1>R3。綜合考慮優(yōu)選MCC /乳糖比例為1∶4(R2)。

表3 填充劑比例篩選處方表/(毫克/片)

2.2.2崩解劑用量篩選 設(shè)計(jì)不同崩解劑用量的處方(表5)，測(cè)定其在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5% SDS的水溶液中的溶出曲線，結(jié)果見表6。試驗(yàn)結(jié)果表明：自制制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中前期溶出隨著崩解劑用量的增加而變快，與參比制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中溶出曲線均一致(f2> 50)，相似性順序：R2>R5>R4。崩解劑用量在3.00～9.00 %范圍內(nèi)，對(duì)自制制劑在含0.5% SDS的水溶液中的溶出無明顯影響，與參比制劑溶出曲線均不一致(f2< 50)，因此需要進(jìn)一步優(yōu)化處方。

2.2.3崩解劑廠家篩選 在處方R2基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)不同崩解劑廠家的處方，測(cè)定其在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5 % SDS的水溶液中的溶出曲線，結(jié)果見表7。試驗(yàn)結(jié)果表明：三批自制制劑與參比制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中溶出曲線均一致(f2> 50)。采用法國(guó)羅蓋特和臺(tái)灣永日化學(xué)的羧甲淀粉鈉制備的自制制劑R6和R7與參比制劑在含0.5% SDS的水溶液中的溶出曲線一致(f2> 50)，因法國(guó)羅蓋特制藥的羧甲淀粉鈉無進(jìn)口注冊(cè)證，優(yōu)選臺(tái)灣永日化工的羧甲淀粉鈉作為本產(chǎn)品的崩解劑。

表4 填充劑比例篩選溶出結(jié)果

表5 崩解劑用量篩選處方表/(毫克/片)

2.2.4原料粒度篩選 在處方R7基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)不同原料粒度的處方，測(cè)定其在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5% SDS的水溶液中的溶出曲線，結(jié)果見表8。試驗(yàn)結(jié)果表明：自制制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5% SDS的水溶液中的溶出隨著原料藥粒度的減小而明顯變快，自制制劑R7和R8與參比制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中溶出曲線一致(f2>50)，相似性順序：R7>R8。自制制劑R7和R9與參比制劑在含0.5% SDS的水溶液中溶出曲線一致(f2>50)，相似性順序：R7>R9。

測(cè)定自制制劑R7在0.1 mol/L鹽酸溶液和含0.5% SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線，自制制劑R7和參比制劑在0.1 mol/L鹽酸溶液(15 min累積溶出度大于85.0 %)和含0.5% SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液(f2>50)中的溶出曲線一致。

綜合自制制劑溶出測(cè)定結(jié)果，初步確定處方R7為最優(yōu)處方。

表6 崩解劑用量篩選溶出結(jié)果

表7 崩解劑廠家篩選溶出結(jié)果

表8 原料粒度篩選溶出結(jié)果

2.3中試樣品制備在上述處方R7原輔料種類不變的基礎(chǔ)上，分別采用三批原料藥(D90分別為15.39、17.65和12.48 μm)，原輔料混合后直接灌裝膠囊的基本工藝，進(jìn)行3批2.4萬粒的中試樣品的制備，測(cè)定3批中試樣品在四種溶出介質(zhì)中的溶出曲線，并與原研參比制劑比較，結(jié)果見表9和圖6～9。由表9和圖6～9可知，自制制劑與參比制劑在四種溶出介質(zhì)中的溶出曲線均一致，表明處方工藝可行。

最終確定帕博西尼膠囊內(nèi)容物：微晶纖維素 PH102 / 無水直壓乳糖為1∶4，臺(tái)灣永日化學(xué)的羧甲淀粉鈉為6.00 %，原料藥粒度D90為12.00～18.00 μm。單劑量處方：帕博西尼125.00 mg，無水直壓乳糖231.20 mg，微晶纖維素PH102 57.80 mg，羧甲淀粉鈉27.00 mg，二氧化硅4.50 mg，硬脂酸鎂4.50 mg。

表9 自制制劑和參比制劑溶出曲線比較

圖6 帕博西尼膠囊在0.1 mol·L-1鹽酸溶液中的溶出曲線

圖7 帕博西尼膠囊在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中的溶出曲線

圖8 帕博西尼膠囊在含0.5 % SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線

圖9 帕博西尼膠囊在含0.5 % SDS的水溶液中的溶出曲線

2.4溶出、性狀和水分穩(wěn)定性研究以高密度聚氯乙烯塑料瓶(內(nèi)加干燥劑)為包裝材料，經(jīng)加速條件(40 ℃±2 ℃，RH 75%±5%)下放置6個(gè)月，考察帕博西尼膠囊溶出曲線、內(nèi)容物性狀和水分，結(jié)果見表10～11。由表11可知，自制制劑加速條件下放置6個(gè)月，與0月相比，溶出曲線、內(nèi)容物性狀和水分無明顯變化。

表10 自制制劑內(nèi)容物性狀和水分穩(wěn)定性考察結(jié)果

表11 自制制劑加速(40 ℃±2 ℃，RH 75%±5%)6個(gè)月樣品溶出數(shù)據(jù)

3 討論

羧甲淀粉鈉由淀粉經(jīng)過適度交聯(lián)反應(yīng)后,在適宜的堿性條件下與一氯乙酸進(jìn)行醚化反應(yīng)得到，產(chǎn)品的黏度和取代度影響其崩解性能[4]。與遼寧奧達(dá)制藥的羧甲淀粉鈉相比，采用法國(guó)羅蓋特和臺(tái)灣永日化學(xué)的羧甲淀粉鈉制備的帕博西尼膠囊在含0.5 % SDS的水溶液中累積溶出度明顯變快，推測(cè)可能是不同廠家羧甲淀粉鈉的的黏度和取代度不同所致。

原料藥粒度是影響藥物體外溶出的重要因素，一般來說，原料藥粒度越小，表面積越大，體外溶出越快[5-6]。本文考察帕博西尼原料藥粒度對(duì)帕博西尼膠囊體外溶出的影響，體外累積溶出度隨著原料藥的粒度的減少而變快。

體外溶出度實(shí)驗(yàn)是篩選制劑處方和控制其質(zhì)量的重要手段，因?yàn)樗退幬锏纳锢枚认嚓P(guān)。以f2評(píng)價(jià)自制制劑和參比制劑的溶出度曲線現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用[7-9]。當(dāng)f2值在50～100時(shí)，認(rèn)為兩制劑的體外溶出行為一致；f2值愈接近100，相似程度就愈高；f2值< 50時(shí)，則認(rèn)為兩制劑的體外溶出行為不一致。

本課題通過原輔料直接混合，然后灌裝膠囊的基本工藝，制備帕博西尼膠囊，工藝簡(jiǎn)單易行，制備的3批自制制劑與參比制劑在四種溶出介質(zhì)中的溶出曲線均一致。自制制劑加速條件下放置6個(gè)月，與0月相比，溶出曲線、內(nèi)容物性狀和水分無明顯變化，表明篩選的帕博西尼膠囊處方可行。