陳斌，邵靚，張毅，裴超信，丁夢碟，梁璐琪

（四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

1 調(diào)查目的

H7N9流感是一種新型甲型流感，2013年3月底在上海和安徽兩地首次發(fā)現(xiàn)[1]，是全球首次發(fā)現(xiàn)的新亞型流感病毒[2]。該病毒可感染人，早期出現(xiàn)發(fā)熱等上呼吸道臨床癥狀，后期可致人死亡，目前尚未證實(shí)該病毒是否具有人傳染人的特性[3]。2016年底和2017年初，該病毒發(fā)生變異，出現(xiàn)了對(duì)禽致死率很高的高致病性毒株，給養(yǎng)禽業(yè)造成重大損失[4]。為進(jìn)一步了解H7N9流感在四川省禽間流行和變異的情況，我們?cè)谌》秶鷥?nèi)開展了H7N9流感病毒的監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查，為科學(xué)防控和預(yù)防人感染H7N9流感提供重要的預(yù)警信息[5]。

表1 全省各市州H7N9調(diào)查情況匯總

2 調(diào)查方法

2.1 調(diào)查范圍 2017年四川省有人感染H7N9流感病例的地區(qū)（14個(gè)市州）和未發(fā)現(xiàn)人感染H7N9流感病例的地區(qū)（7個(gè)市州）。全省各市州監(jiān)測情況見表1。

2.2 調(diào)查對(duì)象 規(guī)模養(yǎng)禽場、活禽交易市場（含農(nóng)貿(mào)市場和中轉(zhuǎn)場），野鳥棲息地，散養(yǎng)戶。

2.3 采樣數(shù)量與要求 每個(gè)場（點(diǎn)）同時(shí)采集血清和咽喉/泄殖腔拭子不少于30份（存欄低于30羽的全采）；在大型農(nóng)貿(mào)市場采集環(huán)境樣品和運(yùn)輸籠具上的糞污樣品30份，小型農(nóng)貿(mào)市場每個(gè)攤位采集環(huán)境樣品10份。咽喉/泄殖腔拭子放于同一管中，保存于病毒樣品保存液中（樣品保存液含青、鏈霉素各500 U/mL、10%甘油、0.01 M pH值7.4的PBS或5%DMEM）。

2.4 血清學(xué)檢測 按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》[6]，采用血凝抑制（HI）試驗(yàn)檢測 H7流感抗體。

2.5 病原學(xué)檢測 按照《禽流感病毒RT-PCR檢測方法》[7]，檢測H7N9病毒核酸。

2.6 陽性樣品復(fù)核及致病性、同源性分析 檢出的H7N9病毒核酸陽性樣本送國家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)核及序列同源性分析，以我國2013年報(bào)道的2株H7N9毒株為參考株（上海株4664T和浙江株P(guān)A-DTID-ZJU01）進(jìn)行比較。

3 調(diào)查結(jié)果

3.1 調(diào)查數(shù)量 共調(diào)查1827個(gè)場點(diǎn)，采集樣本82 362份，其中血清學(xué)樣本45 451份，病原學(xué)樣本36911份。調(diào)查樣本種類及數(shù)量見表2。

表2 H7N9調(diào)查樣本種類及數(shù)量匯總

3.2 調(diào)查結(jié)果 采集血清樣本45451份，檢出H7流感抗體陽性79份，陽性率0.17%。部分陽性血清抗體滴度較高，但對(duì)應(yīng)病原學(xué)檢測均為陰性。

采集病原學(xué)樣本36 911份，其中含環(huán)境水樣、糞樣等6800份，共檢出病原學(xué)陽性26份，病原學(xué)陽性率0.07%（26/36911）。病原學(xué)陽性樣本均來自于6個(gè)農(nóng)貿(mào)市場和2個(gè)家禽中轉(zhuǎn)場的環(huán)境中（表 3）。

表3 H7N9調(diào)查場點(diǎn)匯總

3.3 陽性樣品復(fù)核及致病性、同源性分析 根據(jù)國家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室復(fù)核，26份疑似樣品均確定為H7N9陽性，這26份陽性樣品均來自6個(gè)農(nóng)貿(mào)市場和2個(gè)中轉(zhuǎn)場，其中2個(gè)中轉(zhuǎn)場為同一經(jīng)銷商所有。26份陽性樣本共檢出7株H7N9病毒毒株，其中成都2株、南充2株、阿壩2株和自貢（中轉(zhuǎn)場）1株。7株H7N9病毒核酸的測序結(jié)果顯示：7個(gè)四川毒株兩兩間相比，HA基因同源性為 98.4%～99.9%，NA基因同源性為 96.9%～100%，同源性非常高，推測可能來自同一毒株。與2013年浙江、上海H7N9毒株相比，HA基因同源性為 97.3%～97.7%，NA基因同源性為97.1%～98.1%，同源性也較高，不排除四川省H7N9流感病毒和2013年外省病毒為同一毒株的可能。所有毒株均未發(fā)現(xiàn)裂解位點(diǎn)有氨基酸增加，屬于低致病性H7N9流感病毒。

4 討論分析

從調(diào)查數(shù)據(jù)來看，H7N9血清學(xué)陽性率僅為0.17%，個(gè)別抗體滴度較高，離散度較大，但均未檢測到H7N9病毒，推測可能曾經(jīng)感染過。經(jīng)過流行病學(xué)調(diào)查，我們發(fā)現(xiàn)血清學(xué)陽性的養(yǎng)殖場多分布在水網(wǎng)密集地區(qū)、候鳥停留水域或無防鳥措施的地方，不排除野鳥遷徙過程中接觸感染導(dǎo)致。

從病原學(xué)檢測結(jié)果來看，H7N9病原學(xué)陽性率僅為0.07%（26/36911），均為環(huán)境樣品，養(yǎng)殖場中未檢出病毒核酸陽性，提示市場環(huán)境中的H7N9病毒可能是導(dǎo)致人感染發(fā)病的重要隱患。同時(shí)，檢出的環(huán)境H7N9病毒陽性樣本與2013年我國首次發(fā)現(xiàn)的H7N9毒株高度同源，未發(fā)現(xiàn)裂解位點(diǎn)有氨基酸增加，無毒力變異現(xiàn)象，均屬于低致病性H7N9流感病毒。

由于四川省存在活禽銷售和消費(fèi)的傳統(tǒng)模式，個(gè)別地方還有將未銷售的活禽暫養(yǎng)在市場或中轉(zhuǎn)場的習(xí)慣，這極易導(dǎo)致交叉感染，造成“中轉(zhuǎn)場-養(yǎng)殖場”的循環(huán)傳播，也極易加快H7N9流感病毒的重組和變異，給禽間H7N9流感的防控帶來較大風(fēng)險(xiǎn)。因此，必須進(jìn)一步加強(qiáng)活禽市場的防疫管理措施，切實(shí)阻斷H7N9病毒通過市場環(huán)節(jié)在禽間和人間的感染和傳播。